一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法与流程

文档序号:12061161阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,包括以下步骤:首先将底物各原料混合后粉碎,所述底物由以下原料按照质量百分比组成:玉米60%、豆粕20%、棉粕10%及DDGS 10%,添加待测植酸酶与所述底物混合,同时作空白对照,分别加入到胃蛋白酶盐酸溶液中,40℃恒温水浴,冷却至室温后再测定溶液pH,准确移取12mL上清液至离心管中,并准确量取剩余上清液,将离心管中的上清液离心,得上清液A,再准确移取离心管中上清液A 1mL,加入钒钼酸胺显色剂,再加蒸馏水定容,摇匀静置,用分光光度计比色测定,最后从磷标准曲线中查得待测植酸酶磷浓度和空白对照中磷浓度,计算在模拟胃环境中添加植酸酶饲料底物多释放的水溶性磷含量。

2.如权利要求1所述的一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其具体实现步骤如下:

(1)首先制备底物:所述底物由如下原料按照质量百分比组成:玉米60%、豆粕20%、棉粕10%及DDGS 10%;按照上述配比称取各原料混合后粉碎,并过40目筛;

(2)分别称取3~7g所述步骤(1)制备的底物各置于250mL碘量瓶中,按1000FYT/kg的酶活添加量添加0.1~1mg的待测植酸酶加入到其中一个碘量瓶中为处理组,同时平行做空白对照,即底物中不添加待测植酸酶;

(3)然后将100mL胃蛋白酶盐酸溶液缓慢加入至碘量瓶中制成消化液,缓慢搅拌后测定消化液的pH,当pH大于3.5,用pH 2.0的盐酸溶液将消化液调整至3.0~3.5之间,严密封口,所述盐酸溶液为取质量分数为36%的浓盐酸0.83mL,定容至1000mL;

(4)40℃恒温水浴摇床2h,冷却至室温后再测定溶液pH,pH应保持在4.0~4.5之间;

(5)准确移取12mL碘量瓶中的上清液至离心管中,同时,准确量取碘量瓶中剩余上清液的体积,将上清液4000rpm离心10min,得上清液A;

(6)准确移取离心管中1mL上清液A至50mL比色管中,加入10mL钒钼酸胺显色剂,加蒸馏水定容至50mL,摇匀静置10min;

(7)用分光光度计400nm比色测定,从磷标准曲线中查得磷的浓度,即待测植酸酶磷浓度C1和空白对照磷浓度C2,;

(8)磷标准曲线的绘制:准确移取磷标准溶液0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL分别置于50mL容量瓶中,分别加入钒钼酸铵显色剂10mL,用水稀释至刻度,摇匀,静置10min,在400nm波长下用分光光度计测各溶液的吸光度,以磷含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制磷标准曲线;

(9)计算在模拟胃环境中添加植酸酶饲料底物多释放的水溶性磷含量p,公式为:

<mrow> <mi>P</mi> <mo>=</mo> <mfrac> <mrow> <mi>C</mi> <mn>1</mn> <mo>&times;</mo> <mrow> <mo>(</mo> <mi>V</mi> <mn>1</mn> <mo>+</mo> <mn>12</mn> <mo>)</mo> </mrow> </mrow> <mi>m</mi> </mfrac> <mo>-</mo> <mfrac> <mrow> <mi>C</mi> <mn>2</mn> <mo>&times;</mo> <mrow> <mo>(</mo> <mi>V</mi> <mn>2</mn> <mo>+</mo> <mn>12</mn> <mo>)</mo> </mrow> </mrow> <mi>m</mi> </mfrac> </mrow>

其中,C1:待测植酸酶磷浓度(μg/mL);C2:空白对照磷浓度(μg/mL);v1:添加待测植酸酶碘量瓶中剩余上清液的体积(mL);V2:空白对照碘量瓶中剩余上清液的体积(mL);m:底物样品重量(g)。

3.如权利要求1或2所述的一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其特征在于,所述的待测植酸酶为非耐高温型,固态颗粒状,酶活为5000~50000FYT/g。

4.如权利要求1或2所述的一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其特征在于,所述胃蛋白酶盐酸溶液是将胃蛋白酶与盐酸溶液混合,混合后pH为2.0,胃蛋白酶的质量百分比浓度为0.2%,所述盐酸溶液为取质量分数为36%的浓盐酸0.83mL,定容至1000mL,pH为2.0。

5.如权利要求1或2所述的一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其特征在于,所述钒钼酸胺显色剂的配制具体步骤为:称取偏钒酸铵1.25g,加水200mL,加热溶解不能沸腾,冷却后加质量分数为65%的浓硝酸250mL溶解制成溶液A;另外称取钼酸铵25g,加水400mL加热溶解,冷却,制成溶液B,将溶液A和溶液B混合,定容至1000mL。

6.如权利要求2所述的一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其特征在于,所述磷标准溶液的配制具体步骤为:取105℃烘至恒重的磷酸二氢钾0.2195g溶于蒸馏水中,加质量分数为65%的浓硝酸3mL,定容至1000mL。

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