一种鸭肉中雌二醇的专用检测方法及其设备与流程

本发明涉及食品检测技术领域，具体为一种鸭肉中雌二醇的专用检测方法及其设备。

背景技术：

雌二醇是一种天然的雌激素，并且广泛存在于自然环境中，它可以从外部环境进入人体，从而扰乱人体内分泌系统功能，造成人体在神经系统、免疫系统和生殖发育等系统上的病变，女性吸收过多的雌二醇容易导致提前发育，男性吸收过多的雌二醇容易出现第二性征，一些动物或家禽，如家鸭，不法养殖户为提前催熟家鸭，缩短养殖期，使用雌二醇进行催熟，因此开发一种简单的、快捷的、灵敏的针对雌二醇的检测方法具有重大的意义。

传统的雌二醇的检测方法有高效液相色谱法、气相色谱-质谱法，化学发光免疫法等等，这些方法虽然能够达到较高的检测限，但是都是基于实验室中复杂昂贵的仪器，并且成本高，耗时长，难以满足现场实时精准检测的需要，本发明提供一种利用阳离子表面活性剂聚集纳米金比色检测雌二醇的方法。

技术实现要素：

（一）解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种鸭肉中雌二醇的专用检测方法及其设备，解决了现有雌二醇检测方法及设备成本高和耗时长的问题。

（二）技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种鸭肉中雌二醇的专用检测方法，包括以下步骤：

一、采取鸭肉样本：将新鲜鸭肉用清水洗净，用不锈钢刀具顺着鸭肉经络方向割取两块5*5厘米的样品，一块用于实验检测，一块用于备用，将两块鸭肉样品分别放在食品级搅拌机内以每秒10圈的速度分别将两块鸭肉样品搅碎，并且在搅拌的过程中添加少量清水，防止鸭肉粘贴在搅拌机内部，鸭肉搅碎后，用干净的勺匙分别将两块鸭肉样品取出来，放置在干净的玻璃器皿中，暂时放在冰箱或冰柜中冷藏5-8分钟，温度设为5-8摄氏度；

二、设置对照样品：取一只干净的玻璃器皿，并用马克笔在玻璃器皿上标记为A，向玻璃器皿内添加100-120毫升的纯净水，再将步骤一中制得的两份鸭肉样品从冰箱或冰柜中取出一份，另一份使用保鲜膜包裹在鸭肉样品上，继续冷藏，作为备用检测样品储备起来，取出的鸭肉样品用干净的玻璃器皿盛放，并用马克笔在玻璃器皿上标记为B，向B器皿中添加20-30毫升的纯净水，用干净的搅拌勺将搅碎的鸭肉样品进行搅拌，使其与纯净水充分融合；

三、开始试验；S1、分别向A、B器皿中添加等量的适配体溶液，并分别用搅拌勺进行混匀和孵育5分钟，得混合液A1、B1；

S2、分别向A1和B1中分别添加适量的等质量的二甘脂试剂，并分别用搅拌勺进行混匀，静置1分钟，再分别向A1、B1中添加等质量的甲基丙磺酸试剂，并分别用搅拌勺进行混匀和孵育5分钟，得混合液A2、B2；

S3、向A2、B2中分别添加的30-40毫升等质量的纳米金溶液，并分别用搅拌勺进行混匀，得混合液A3、B3；

S4、向A3、B3中分别添加15-20毫升等质量的氯化钠与氯化钾混合液，并分别用搅拌勺进行混匀，得混合液A4、和B4；

S5、取内径为60*60毫米高度为60毫米的石英荧光比色皿两个，并用马克笔分别标记为A5和B5，洗净并让其自然晾干，晾干后，将A4、和B4混合液分别用导流管引流至A5和B5中，并将A5和B5两个石英荧光比色皿置于荧光分光光度计内，接通电源，向荧光分光光度计内的A5和B5最终分别添加50-60毫升的等质量的罗丹明溶液，开启荧光分光光度计进行扫描测定信号。

优选的，所述荧光分光光度计的扫描条件为：激发光狭缝为9纳米，发射光狭缝为2纳米，激发光波长为480纳米，在此条件下进行扫描，获得其荧光光谱信号，A5和B5的荧光强度信号分别为C1和C2，计算增强的荧光强度值为C2与C1的差值。

优选的，所述纳米金溶液的制备方法如下：在100毫升的煮沸的质量百分比浓度为0.015%的氯金酸溶液中，加入4毫升质量百分比浓度为1%的柠檬酸三钠溶液，搅拌30分钟，移除加热装置后继续搅拌混合物15分钟，最后，使溶液达到25摄氏度并且使用0.15微米的超滤膜过滤，然后储存在恒温为4摄氏度的黑色玻璃瓶中备用，从而制得纳米金溶液。

优选的，所述氯化钠的浓度为0.14mol/L，罗丹明的浓度为8umol/L，甲基丙磺酸试剂的浓度为20umol/L，甲基丙磺酸试剂是作为缓冲液的作用，还可以使用乙基丙磺酸代替甲基丙磺酸试剂。

优选的，所述鸭肉中雌二醇检测方法所涉及的制备样品检测体系为：取10毫升B5待测样品，加入到离心管中，充分混匀后再将离心管置于25摄氏度条件下孵育25分钟后，在混合液中加入30毫升浓度为0.14mol/L的氯化钠溶液和25毫升浓度为8umol/L的罗丹明溶液，混匀，然后按照C2减C1的计算方式得到增强的荧光强度值。

优选的，所述鸭肉中雌二醇的专用检测设备，包括机体，机体内固定安装有滑杆，所述滑杆上滑动套接有滑座，所述滑座的底部固定连接有激光扫描仪，所述机体内设置有检测台，所述检测台顶部的右侧开设有凹槽且凹槽内固定连接有减震垫，所述减震垫的顶部设置有两个器皿，且两个器皿之间通过隔板隔开，所述机体内壁的顶部固定安装有遮光板，所述机体的两侧均固定安装有通风窗，所述机体的底部固定安装有底座。

（三）有益效果

本发明提供了一种鸭肉中雌二醇的专用检测方法。具备以下有益效果：

（1）、本发明通过将鸭肉搅碎后支撑液态状并与纳米金溶液混合，使得雌二醇适配体包裹在纳米金的表面，当鸭肉中存在雌二醇时，包裹在纳米金上的适配体会与雌二醇特异性结合，从而释放出游离的纳米金，加入氯化钠和氯化钾溶液之后，游离的纳米金产生聚集，加入罗金丹对聚集的纳米金荧光没有猝灭作用，当检测物中没有加入罗丹明时，纳米金处于游离状态，而纳米金对于游离状态的纳米金具有很强的荧光猝灭作用，试验通过设置对比例的方式，起到很直观的对比作用，具有明确的辨别鸭肉中是否含有雌二醇的效果，并且通过荧光的对比强度，还可判断鸭肉中所含雌二醇的浓度高低，并且该检测方法具有操作简单、检测耗时短、成本较低的优点。

附图说明

图1为本发明结构示意图。

图中：1机体、2滑杆、3滑座、4激光扫描仪、5检测台、6减震垫、7器皿、8隔板、9遮光板、10通风窗、11底座。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

如图1所示，本发明提供一种技术方案：一种鸭肉中雌二醇的专用检测方法，包括以下步骤：

一、采取鸭肉样本：将新鲜鸭肉用清水洗净，用不锈钢刀具顺着鸭肉经络方向割取两块5*5厘米的样品，一块用于实验检测，一块用于备用，将两块鸭肉样品分别放在食品级搅拌机内以每秒10圈的速度分别将两块鸭肉样品搅碎，并且在搅拌的过程中添加少量清水，防止鸭肉粘贴在搅拌机内部，鸭肉搅碎后，用干净的勺匙分别将两块鸭肉样品取出来，放置在干净的玻璃器皿中，暂时放在冰箱或冰柜中冷藏5-8分钟，温度设为5-8摄氏度；

二、设置对照样品：取一只干净的玻璃器皿，并用马克笔在玻璃器皿上标记为A，向玻璃器皿内添加100-120毫升的纯净水，再将步骤一中制得的两份鸭肉样品从冰箱或冰柜中取出一份，另一份使用保鲜膜包裹在鸭肉样品上，继续冷藏，作为备用检测样品储备起来，取出的鸭肉样品用干净的玻璃器皿盛放，并用马克笔在玻璃器皿上标记为B，向B器皿中添加20-30毫升的纯净水，用干净的搅拌勺将搅碎的鸭肉样品进行搅拌，使其与纯净水充分融合；

三、开始试验；S1、分别向A、B器皿中添加等量的适配体溶液，并分别用搅拌勺进行混匀和孵育5分钟，得混合液A1、B1；

S2、分别向A1和B1中分别添加适量的等质量的二甘脂试剂，并分别用搅拌勺进行混匀，静置1分钟，再分别向A1、B1中添加等质量的甲基丙磺酸试剂，并分别用搅拌勺进行混匀和孵育5分钟，得混合液A2、B2；

S3、向A2、B2中分别添加的30-40毫升等质量的纳米金溶液，纳米金溶液的制备方法如下：在100毫升的煮沸的质量百分比浓度为0.015%的氯金酸溶液中，加入4毫升质量百分比浓度为1%的柠檬酸三钠溶液，搅拌30分钟，移除加热装置后继续搅拌混合物15分钟，最后，使溶液达到25摄氏度并且使用0.15微米的超滤膜过滤，然后储存在恒温为4摄氏度的黑色玻璃瓶中备用，从而制得纳米金溶液，并分别用搅拌勺进行混匀，得混合液A3、B3；

S4、向A3、B3中分别添加15-20毫升等质量的氯化钠与氯化钾混合液，氯化钠的浓度为0.14mol/L，罗丹明的浓度为8umol/L，甲基丙磺酸试剂的浓度为20umol/L，甲基丙磺酸试剂是作为缓冲液的作用，还可以使用乙基丙磺酸代替甲基丙磺酸试剂，并分别用搅拌勺进行混匀，得混合液A4、和B4；

S5、取内径为60*60毫米高度为60毫米的石英荧光比色皿两个，并用马克笔分别标记为A5和B5，洗净并让其自然晾干，晾干后，将A4、和B4混合液分别用导流管引流至A5和B5中，并将A5和B5两个石英荧光比色皿置于荧光分光光度计内，接通电源，向荧光分光光度计内的A5和B5最终分别添加50-60毫升的等质量的罗丹明溶液，鸭肉中雌二醇检测方法所涉及的制备样品检测体系为：取10毫升B5待测样品，加入到离心管中，充分混匀后再将离心管置于25摄氏度条件下孵育25分钟后，在混合液中加入30毫升浓度为0.14mol/L的氯化钠溶液和25毫升浓度为8umol/L的罗丹明溶液，混匀，然后按照C2减C1的计算方式得到增强的荧光强度值，开启荧光分光光度计进行扫描测定信号，荧光分光光度计的扫描条件为：激发光狭缝为9纳米，发射光狭缝为2纳米，激发光波长为480纳米，在此条件下进行扫描，获得其荧光光谱信号，A5和B5的荧光强度信号分别为C1和C2，计算增强的荧光强度值为C2与C1的差值，鸭肉中雌二醇的专用检测设备，包括机体1，机体1内固定安装有滑杆2，滑杆2上滑动套接有滑座3，滑杆2可以自由在滑座3上滑动，滑座3的底部固定连接有激光扫描仪4，机体1内设置有检测台5，检测台5顶部的右侧开设有凹槽且凹槽内固定连接有减震垫6，减震垫6起到减震的作用，减震垫6的顶部设置有两个器皿7，两个器皿7内分别盛装有鸭肉样品和空白对照样，且两个器皿7之间通过隔板8隔开，机体1内壁的顶部固定安装有遮光板9，设置遮光板9起到增强荧光亮度显示的效果，机体1的两侧均固定安装有通风窗10，机体1的底部固定安装有底座11。

使用时，本发明通过将鸭肉搅碎后支撑液态状并与纳米金溶液混合，使得雌二醇适配体包裹在纳米金的表面，当鸭肉中存在雌二醇时，包裹在纳米金上的适配体会与雌二醇特异性结合，从而释放出游离的纳米金，加入氯化钠和氯化钾溶液之后，游离的纳米金产生聚集，加入罗金丹对聚集的纳米金荧光没有猝灭作用，当检测物中没有加入罗丹明时，纳米金处于游离状态，而纳米金对于游离状态的纳米金具有很强的荧光猝灭作用，试验通过设置对比例的方式，起到很直观的对比作用，具有明确的辨别鸭肉中是否含有雌二醇的效果，并且通过荧光的对比强度，还可判断鸭肉中所含雌二醇的浓度高低，并且该检测方法具有操作简单、检测耗时短、成本较低的优点。

综上可得，该鸭肉中雌二醇的专用检测设备，通过设置滑杆2、滑座3、激光扫描仪4、隔板8和遮光板9，解决了现有雌二醇检测方法及设备成本高和耗时长的问题。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。