一种氧氟沙星检测试纸及其检测方法与流程

文档序号:12453927阅读:1874来源:国知局

本发明涉及一种检测试纸,具体是一种氧氟沙星检测试纸及其检测方法。



背景技术:

食品安全检测作为保障食品安全的重要手段,发挥着越来越重要的作用,食品安 全检测技术的发展方向呈现两个趋势 :一是向设备日趋完善、痕量分析方向发展 ;另一个 是向仪器便携化和现场检测方向发展。食品安全检测中备受关注的检测物包括农兽药残留 等项目,研发高通量、快速、灵敏的农兽药检测试剂可谓当务之急。

农兽药残留的检测手段主要有 :理化分析法、微生物法、免疫法。其中免疫学检测 是农兽药残留检测的发展方向,它可以做到快速和特异性。酶联免疫吸附方法 (ELISA 法 ) 已经逐步成为食品中农兽药残留检测的一种重要方法。国家兽药安全评价中心的初步调 查,国内使用 ELISA 检测试纸作为兽药残留筛选的检测样本数量远远超过微生物方法和理化 分析方法。

免疫分析技术以其抗原抗体反应的高度专一性、测定方法的简单、快速及高灵敏 度、低费用和适于现场大批量样品筛选等优点,在农兽药残留分析中展示了广泛的应用前 景。随着农药残留免疫学检测技术不断被完善和商品化,免疫学检测技术会成为食品农兽药残留和食品安全质量控制的有效快速检测手段。基于目前兽药残留诊断试剂的研究现 状,及时开发出优于目前的、快速灵敏的检测试剂可谓是当务之急。免疫学技术进行分析是 特异性很好、检测时间较短的方法。

目前,对氧氟沙星的检测主要在食品领域以及环境领域,用于抗生素检测的方法主 要有高效液相色谱技术、微生物法、免疫分析法,这些方法需要昂贵的检测仪器或专业的检 测人员,不适合家庭使用。



技术实现要素:

本发明的目的在于提供一种氧氟沙星检测试纸及其检测方法,以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:

一种氧氟沙星检测试纸,包括底板、样品吸收垫、样品结合垫、反应膜和样品吸水垫,所述底板上从左到右依次设有样品吸收垫、样品结合垫、反应膜和样品吸水垫。

作为本发明进一步的方案:所述的样品结合垫包被有β-内酰 胺特异性抗体-胶体金标记物、氧氟沙星特异性抗体-胶体金标记物、喹诺酮特异性抗体-胶体金标记物、大环内脂特异性抗体-胶体金标记物、磺胺特异性抗体-胶体金标记物和头孢特异性抗体-胶体金标记物。

作为本发明进一步的方案:所述的反应膜为硝酸纤维素膜,其上面依此包被有大环内脂类抗生素检测线、β-内酰胺类抗生素检测线、氧氟沙星类抗生素检测线、喹诺酮类抗生素检测线、磺胺类抗生素检测线、头孢类抗生素检测线和羊抗鼠质控线。

作为本发明再进一步的方案:所述的大环内脂类抗生素检测线与所述的β-内酰胺抗生素检测线并排、所述的氧氟沙星类抗生素检测线与所述的喹诺酮类抗 生素检测线并排、所述的磺胺类抗生素检测线与所述的头孢类抗生素检测线并排。

作为本发明再进一步的方案:所述的大环内脂类抗生素检测线为大环内脂类抗生素-载体蛋白,所述的β-内酰胺类抗生素检测线为β-内酰胺类抗生素-载 体蛋白,所述的氧氟沙星类抗生素检测线为氧氟沙星类抗生素-载体蛋白,所述的喹诺烷酮类抗生素检测线为喹诺烷酮类抗生素-载体蛋白,所述的磺胺类抗生素检测线为磺胺类抗生素- 载体蛋白,所述的头孢类抗生素检测线为头孢类抗生素检测线。

作为本发明再进一步的方案:所述的载体蛋白为牛血清白蛋白。

作为本发明再进一步的方案:所述的样品吸水垫为滤纸块。

一种氧氟沙星检测试纸的制备方法,A配 制 指 示 剂 :将上述样品吸收垫、样品结合垫、反应膜和样品吸水垫所需的包被物按照1.30比例溶于蒸馏水中,B浸渍 :将配制好的指示剂倒入浸渍机,卷筒试纸原纸先后经过退纸架和导纸辊进,C入浸渍机,调整退纸架导辊和导纸辊,使原纸处于拉紧和平整的状态,原纸以 3.6-4.2m/s 的速度通过浸渍机上的浸渍槽,指示剂即均匀涂布在原纸上,然后经橡胶导辊挤压,进入烘干装置;D烘干:常压下用热蒸汽烘干,蒸汽温度为98-102℃,时间为大于3分钟。

与现有技术相比,本发明的有益效果是:本发明通过在测试纸中加入不同的标记物,使得本测试纸能够快速准确的测试氧氟沙星物质的同时,还能对喹诺烷酮类抗生素、磺胺类抗生素、β-内酰胺类抗生素等一系列抗生素均作出准确的检测,且不同的抗生素设有不同的检测线,不会产生混淆的情况,达到使用方便、快速,不需要专业操作,适合家庭使用的目的。

附图说明

图1是本发明的整体结构图。

图中:1-采样区、2-检测区、3-质检区、4-吸水垫、5-保护膜、6-塑料底板。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。

请参阅图1,一种氧氟沙星检测试纸,包括底板、样品吸收垫、样品结合垫、反应膜和样品吸水垫,所述底板上从左到右依次设有样品吸收垫、样品结合垫、反应膜和样品吸水垫。

所述的样品结合垫包被有β-内酰 胺特异性抗体-胶体金标记物、氧氟沙星特异性抗体-胶体金标记物、喹诺酮特异性抗体-胶体金标记物、大环内脂特异性抗体-胶体金标记物、磺胺特异性抗体-胶体金标记物和头孢特异性抗体-胶体金标记物。

所述的反应膜为硝酸纤维素膜,其上面依此包被有大环内脂类抗生素检测线、β-内酰胺类抗生素检测线、氧氟沙星类抗生素 检测线、喹诺酮类抗生素检测线、磺胺类抗生素检测线、头孢类抗生素检测线和羊抗鼠质控线。

所述的大环内脂类抗生素检测线与所述的β-内酰胺抗生素检测线并排、所述的氧氟沙星类抗生素检测线与所述的喹诺酮类抗 生素检测线并排、所述的磺胺类抗生素检测线与所述的头孢类抗生素检测线并排。

所述的大环内脂类抗生素检测线为大环内脂类抗生素-载体蛋白,所述的β-内酰胺类抗生素检测线为β-内酰胺类抗生素-载 体蛋白,所述的氧氟沙星类抗生素检测线为氧氟沙星类抗生素-载体蛋白,所述的喹诺烷酮类抗 生素检测线为喹诺烷酮类抗生素-载体蛋白,所述的磺胺类抗生素检测线为磺胺类抗生素- 载体蛋白,所述的头孢类抗生素检测线为头孢类抗生素检测线。所述的载体蛋白为牛血清白蛋白。所述的样品吸水垫为滤纸块。

A配 制 指 示 剂 :将上述样品吸收垫、样品结合垫、反应膜和样品吸水垫所需的包被物按照1.30比例溶于蒸馏水中,B浸渍 :将配制好的指示剂倒入浸渍机,卷筒试纸原纸先后经过退纸架和导纸辊进,C入浸渍机,调整退纸架导辊和导纸辊,使原纸处于拉紧和平整的状态,原纸以 3.6-4.2m/s 的速度通过浸渍机上的浸渍槽,指示剂即均匀涂布在原纸上,然后经橡胶导辊挤压,进入烘干装置;D烘干:常压下用热蒸汽烘干,蒸汽温度为98-102℃,时间为大于3分钟。

本发明的工作原理是:胶体金的制备方法,用双蒸去离子水将质量分数5%氯金酸稀释成质量分数至0 .01%,置磁力加热棒 搅拌器上搅拌煮沸,煮沸后每100ml氯金酸加入5ml质量分数3%柠檬酸三钠,溶液的颜色会 由浅黄变兰色,然后变深兰,最后变为红色,当溶液的颜色完全变为透明的红色时,继续回 流,10min后停止加热,冷却至室温后用双蒸去离子水补充至原体积并于4℃避光保存。β-内酰胺类抗生素特异性抗体-胶体金标记物制备方法,以目测法确定胶体金与待标记抗体用量比例,用0 .1mol/L的碳酸钾调节胶体金溶液至7 .2,将抗体用pH为7 .6,0 .1mol/L的磷酸盐缓冲液逐级稀释为5~40μg/ml,各取 0 .1ml按顺序加入一系列装有1ml胶体金的试管中,5min后在上述试管内分别加入0 .1ml质 量分数1%氯化钠,混匀,静置2h后观察结果。从加入抗体浓度为10μg/ml的试管开始,胶体 金溶液的颜色基本一致,因此稳定1ml胶体金最适抗体量是10μg/ml。在磁力搅拌下,在10ml胶体金中加入β-内酰胺类抗生素特异性隆抗体10ml,继 续搅拌混匀10min,加入0 .2ml10%BSA,静置30min。4℃离心30min,弃上清液,沉淀物用含质 量分数0 .1%的牛血清白蛋白、0 .5%的表面活性剂,pH为7 .2的0 .2mol/L磷酸盐缓冲液洗涤 两次,即可得到已纯化的金标抗体溶液,置4℃备用。按同样的方法制备其他金标抗体溶液,氧氟沙星检测试纸条的灵敏度试验,大环内脂类抗生素、β-内酞胺类抗生素、氧氟沙星类抗生素、喹诺烷酮类抗生素、头 孢类抗生素和磺胺类抗生素分别用pH为7的0 .2mol/L的磷酸盐缓冲液稀释成不同浓度,然后用本发明的试纸条进行检测,将不同浓度的抗生素滴加到试纸条的样品垫。结果表明,本 试纸条的检测灵敏度分别为:红霉素10μg/L、螺旋霉素8μg/L、青霉素G 4μg/L,阿莫西林4μ g/L、金霉素15μg/L、土霉素30μg/L、诺氟沙星60μg/L、氧氟沙星100μg/L、磺胺多辛100μg/L、 磺胺嚓咤100μg/L、头抱哇诺20μg/L、头抱洛宁20μg/L。

对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

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