本发明涉及一种检测方法，具体是一种链霉素检测方法。
背景技术：
链霉素(Streptomycin)是一种重要的氨基糖苷类抗生素，被广泛应用于动物疾病的治疗，链霉素对鸡、羊、牛、猪的各类炎症，如鸡传染性鼻炎、猪急性支气管炎、猪白痢、奶牛子宫内膜炎等有很好的疗效，因此经常作为饲料添加剂使用。如果不正确使用，可造成链霉素残留超标。研究证明，链霉素可对肾脏和听神经造成不可逆转的损耗，长期使用还会使细菌产生耐药性。为了保障动物源性食品的安全，农业部第235号文件《动物性食品中兽药最高残留限量》中规定链霉素在牛奶中为200μg/L，在肌肉、脂肪、肝中为600μg/kg，在肾中为1000μg/kg。目前链霉素残留的检测主要有仪器分析和免疫学方法。其中仪器分析法主要用高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)，这些方法具有灵敏度高、结果准确、重复性好、假阳性少等优点，但仍存在一定缺点，如样品前处理过程复杂，仪器化程度高且价格昂贵，分析速度慢，不适合进行大规模现场检测等。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种链霉素检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种链霉素检测方法，包括如下步骤：（1）对样品进行提取，先后用含酸的不同浓度的乙腈-水溶液对样品分三次进行振荡提取、离心，合并三次提取液，得样品提取液；（2）对样品提取液进行盐析、除脂，在所述样品提取液中加入甲醇和0.2%~0.5%氨水进行盐析，离心，在所得上清液中加入正己烷，旋涡振荡，除脂得到标准溶液；（2）将化学荧光探针溶于有机溶剂制得溶液A，碱溶于水制得溶液B；（3）将溶液A和溶液B分别与不同浓度的标准溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，建立荧光强度与标准溶液浓度间的相关曲线；（4）将溶液A和溶液B与待测样品溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，与步骤（3）所建立的曲线进行比对，计算样品的硫酸链霉素含量。
作为本发明进一步的方案：所述化学荧光探针为 9,10-菲醌。
作为本发明进一步的方案：在所述步骤（2）中，所述有机溶剂为与水不相溶，且密度比水大。
作为本发明进一步的方案：所述含酸的不同浓度的乙腈-水溶液浓度在5%~15%。
作为本发明再进一步的方案：所述溶液A、溶液B和标准溶液的体积比与所述溶液A、溶液B和所述待测样品溶液的体积比相同。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明链霉素检测方法具有操作简便、快速、不需要复杂的机械测定设备等优点。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
本发明实施例中，一种链霉素检测方法，包括如下步骤：（1）对样品进行提取，先后用含酸的不同浓度的乙腈-水溶液对样品分三次进行振荡提取、离心，合并三次提取液，得样品提取液；（2）对样品提取液进行盐析、除脂，在所述样品提取液中加入甲醇和0.2%~0.5%氨水进行盐析，离心，在所得上清液中加入正己烷，旋涡振荡，除脂得到标准溶液；（2）将化学荧光探针溶于有机溶剂制得溶液A，碱溶于水制得溶液B；（3）将溶液A和溶液B分别与不同浓度的标准溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，建立荧光强度与标准溶液浓度间的相关曲线；（4）将溶液A和溶液B与待测样品溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，与步骤（3）所建立的曲线进行比对，计算样品的硫酸链霉素含量。所述化学荧光探针为 9,10-菲醌。在所述步骤（2）中，所述有机溶剂为与水不相溶，且密度比水大。所述含酸的不同浓度的乙腈-水溶液浓度在5%~15%。所述溶液A、溶液B和标准溶液的体积比与所述溶液A、溶液B和所述待测样品溶液的体积比相同。
实施例1
本发明链霉素检测方法，包括如下步骤：（1）对样品进行提取，先后用含酸的不同浓度的乙腈-水溶液对样品分三次进行振荡提取、离心，合并三次提取液，得样品提取液；（2）对样品提取液进行盐析、除脂，在所述样品提取液中加入甲醇和0.2%%氨水进行盐析，离心，在所得上清液中加入正己烷，旋涡振荡，除脂得到标准溶液；（2）将化学荧光探针溶于有机溶剂制得溶液A，碱溶于水制得溶液B；（3）将溶液A和溶液B分别与不同浓度的标准溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，建立荧光强度与标准溶液浓度间的相关曲线；（4）将溶液A和溶液B与待测样品溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，与步骤（3）所建立的曲线进行比对，计算样品的硫酸链霉素含量。所述化学荧光探针为 9,10-菲醌。在所述步骤（2）中，所述有机溶剂为与水不相溶，且密度比水大。所述含酸的不同浓度的乙腈-水溶液浓度在5%。所述溶液A、溶液B和标准溶液的体积比与所述溶液A、溶液B和所述待测样品溶液的体积比相同。
实施例2
本发明链霉素检测方法，包括如下步骤：（1）对样品进行提取，先后用含酸的不同浓度的乙腈-水溶液对样品分三次进行振荡提取、离心，合并三次提取液，得样品提取液；（2）对样品提取液进行盐析、除脂，在所述样品提取液中加入甲醇和0.3%氨水进行盐析，离心，在所得上清液中加入正己烷，旋涡振荡，除脂得到标准溶液；（2）将化学荧光探针溶于有机溶剂制得溶液A，碱溶于水制得溶液B；（3）将溶液A和溶液B分别与不同浓度的标准溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，建立荧光强度与标准溶液浓度间的相关曲线；（4）将溶液A和溶液B与待测样品溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，与步骤（3）所建立的曲线进行比对，计算样品的硫酸链霉素含量。所述化学荧光探针为 9,10-菲醌。在所述步骤（2）中，所述有机溶剂为与水不相溶，且密度比水大。所述含酸的不同浓度的乙腈-水溶液浓度在10%。所述溶液A、溶液B和标准溶液的体积比与所述溶液A、溶液B和所述待测样品溶液的体积比相同。
实施例3
本发明链霉素检测方法，包括如下步骤：（1）对样品进行提取，先后用含酸的不同浓度的乙腈-水溶液对样品分三次进行振荡提取、离心，合并三次提取液，得样品提取液；（2）对样品提取液进行盐析、除脂，在所述样品提取液中加入甲醇和5%氨水进行盐析，离心，在所得上清液中加入正己烷，旋涡振荡，除脂得到标准溶液；（2）将化学荧光探针溶于有机溶剂制得溶液A，碱溶于水制得溶液B；（3）将溶液A和溶液B分别与不同浓度的标准溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，建立荧光强度与标准溶液浓度间的相关曲线；（4）将溶液A和溶液B与待测样品溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，与步骤（3）所建立的曲线进行比对，计算样品的硫酸链霉素含量。所述化学荧光探针为 9,10-菲醌。在所述步骤（2）中，所述有机溶剂为与水不相溶，且密度比水大。所述含酸的不同浓度的乙腈-水溶液浓度在15%。所述溶液A、溶液B和标准溶液的体积比与所述溶液A、溶液B和所述待测样品溶液的体积比相同。
实施例4
本发明链霉素检测方法，包括如下步骤：（1）对样品进行提取，先后用含酸的不同浓度的乙腈-水溶液对样品分三次进行振荡提取、离心，合并三次提取液，得样品提取液；（2）对样品提取液进行盐析、除脂，在所述样品提取液中加入甲醇和4%氨水进行盐析，离心，在所得上清液中加入正己烷，旋涡振荡，除脂得到标准溶液；（2）将化学荧光探针溶于有机溶剂制得溶液A，碱溶于水制得溶液B；（3）将溶液A和溶液B分别与不同浓度的标准溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，建立荧光强度与标准溶液浓度间的相关曲线；（4）将溶液A和溶液B与待测样品溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，与步骤（3）所建立的曲线进行比对，计算样品的硫酸链霉素含量。所述化学荧光探针为 9,10-菲醌。在所述步骤（2）中，所述有机溶剂为与水不相溶，且密度比水大。所述含酸的不同浓度的乙腈-水溶液浓度在12%。所述溶液A、溶液B和标准溶液的体积比与所述溶液A、溶液B和所述待测样品溶液的体积比相同。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。