一种测定大鼠姜黄素血浆浓度的UHPLC‑MS/MS分析方法与流程

文档序号:12657489阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种测定大鼠姜黄素血浆浓度的UHPLC-MS/MS分析方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)配制姜黄素标准溶液、内标替硝唑标准溶液,建立标准曲线;

(2)待测血浆中加入内标后,进行前处理,进行LC-MS/MS分析,利用标准曲线计算出待测血浆中姜黄素的浓度。

2. 根据权利要求1所述的方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1.建立标准曲线

S11.配制标准溶液:

精密称取姜黄素对照品,溶解于乙腈溶液中震荡摇匀,得1mg/mL的标准储备液,再用甲醇/水=1/1稀释液溶液梯度稀释,得一系列浓度的姜黄素标准溶液;

精密称取替硝唑标准品,溶解于90%甲醇水溶液中震荡摇匀,得1mg/mL的母液,再用90%甲醇水溶液稀释成0.2 µg/mL标准溶液;

S12.建立标准曲线

分别取一系列浓度的姜黄素标准溶液,分别加入空白血浆,震荡后,加入内标替硝唑标准溶液,进行样品前处理后,进行UHPLC-MS/MS分析,以不同浓度的姜黄素的峰面积与内标替硝唑的峰面积之比Y 为纵坐标,以姜黄素的血药浓度C为横坐标进行直线回归,建立标准曲线;

S2.样品检测:待测样品前处理后,进行UHPLC-MS/MS分析。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述前处理的方法为:样品加入内标后,旋涡混匀,加入3~5倍体积的乙酸乙酯,旋涡振荡,静置2~5min后,离心取有机层,室温真空挥干,加入乙腈-醋酸铵溶液溶解,离心取上清,即为供试品溶液,用于UHPLC-MS/MS进样分析。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述样品和内标的体积比为8~12:1。

5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述旋涡混匀的时间为5~20s;所述旋涡振荡的时间为30~90s。

6. 根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述乙腈-醋酸铵溶液为乙腈和10 mM醋酸铵的混合溶液,两者的体积比为8:2。

7.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤S12和步骤S2所述UHPLC-MS/MS分析的液质条件如下:

色谱条件:正离子监测:流动相为乙腈:水的体积比=80:20,流速为300µL/min,柱温为室温;分析时间为2.0 min;

质谱条件:离子源为电喷雾电离源;电喷雾电压正离子模式为4500 V;加热毛细管温度为350℃;鞘气(N2)压力为30 psi,辅气压力为25 psi,碰撞气压力为1.5 mTorr;扫描峰宽为0.5 Th;扫描时间为0.3 s;扫描方式为选择反应监测,定量监测的母离子、子离子。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述流动相中含有10mM醋酸铵。

9.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤S12所述震荡的时间为10~30s。

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