一种鱼鳞明胶代血浆注射液的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物制药领域，涉及一种以鱼鳞明胶为原料制备鱼鳞明胶代血浆注射 液的方法。
【背景技术】
[0002] 我国每年医疗用血量高达1300吨，近年来的用血量还在以每年7%~10%的速度 递增，临床上的用血量迅速增加使得血液的短缺达到了危机的程度。而临床上，90%的丙型 肝炎是由输血传播，在重点传染病中经输血传染的病例已经连续多年位居首位，因输血而 感染人类免疫缺陷病毒的事故频发。血源紧张、贮存及运输困难、价格昂贵等多方面的原 因，使临床对输血日益审慎，并尽可能地减少输血机会，提倡"节约用血、科学输血、成分输 血"的观念。按照卫生部输血指南（2000年）规定，通常失血量在人体质量的20%以内，以 及当血红蛋白含量大于或等于100g/L时，不必输血，可输入等量代血浆，因此血浆代用品 ((Plasmasubstitute，PS，一般简称"代血衆"）在临床上的应用日益广泛。
[0003] 代血浆是一种输入血管后依赖胶体渗透压而起到扩张及代替血容量的作用，分子 量接近血浆白蛋白的胶体溶液，在治疗失血性休克时是节约用血的重要"功臣"。
[0004] 在人体出血而没有血液供应的情况下，需要大量晶体或胶体液的输入，晶胶体液 本身不含有血红蛋白，其大量的输入并不能直接有效的增加重要脏器的供血和供氧，相反 还会加速机体内环境的紊乱，严重干扰了机体的保护性机制，从而加重出血。国内外的研究 表明，代血浆是解决问题的唯一出路。与常规的血液相比，代血浆具有无红细胞表面抗原决 定簇，可避免输血反应，可排除适配血型之麻烦，避免了病原微生物污染血源和进一步的交 叉感染，其保质时间较长、易于储存、运输比较方便。代血浆的来源广泛，也不用依赖于稳定 供血人群，取材方便，可保障充足供应等优点。因此，安全、有效、方便携带、可大量生产、使 用方便的代血浆具有广阔的市场应用前景。
[0005] 理想的代血浆应具备下列条件：①无毒性，无抗原性，无致热原；②能在血管内存 留而产生暂时替代血容量的作用；③较易排出或被机体代谢，不蓄积；④在一定剂量范围 内，不干扰血液有形成分和凝血系统，不损害脏器功能，不影响机体内环境稳定；⑤性质稳 定，允许较长期保存。目前尚无完全符合上述条件的代血浆制剂，目前临床上使用的代血浆 主要有葡萄糖聚合物、羟乙基淀粉、明胶三大类。
[0006] 葡萄糖聚合物代血浆主要包括缩合葡萄糖(又称409代血浆）和右旋糖酐，409代 血浆扩容时间较短（2h左右)、没有进入医保和基药目录，但因其价格便宜，在基层医院仍有 使用；右旋糖酐的不良反应包括严重过敏、过敏性休克、诱发肾衰竭，已较少用于扩充血容 量。
[0007] 羟乙基淀粉代血浆，主要用于预防和治疗各种原因造成的低血容量。2013年，欧 盟、美国、加拿大等国外药品管理部门就含羟乙基淀粉类药品对特定健康条件患者的肾损 伤及死亡率增高风险陆续发布了多项风险控制措施。中国国家食品药品监督管理总局为此 统一修改含羟乙基淀粉说明书，因含羟乙基淀粉类药品在特定健康条件的患者中存在着死 亡率升高、肾损害及过量出血等风险，国家食品药品监督管理总局同时建议医务人员和患 者应充分重视此类药品的安全性问题，详细了解含羟乙基淀粉类药品的禁忌症、不良反应、 注意事项、相互作用。
[0008] 明胶代血浆具有最好的血液相容性，根据交联剂的不同又分为脲联明胶 (Polyeline，聚明胶肽）和改良液体明胶（ModifiedFluidGelatin，琥?白酰明胶）。目前市 场上所用的聚明胶肽（脲联明胶）的代表产品为菲克雪浓，是用健康的牛骨、猪骨的明胶蛋 白经热降解后生成明胶水解蛋白，再经尿素交联而支撑的一种多肽，平均分子量为27500-39500kDa，渗透压、PH、相对粘度都与血浆一致，扩容效果确切，不在体内蓄积，易于清除，半 衰期为4-6小时，并含有与血清相当浓度的电解质，不会引发容量治疗产生的电解质紊乱， 所含钙离子也更有助于凝血功能。明胶代血浆对人体内环境影响较轻微，不影响凝血机制、 不损害肾脏功能，合理使用的情况下无剂量使用限制。
[0009]目前，制备明胶代血浆的原料主要来源于猪、牛等动物的皮和骨，因可能携带如口 蹄疫、疯牛病等流行疾病，存在致病性、过敏性等安全风险；而已有报道采用来源于驴皮、海 狗皮等制备的代血浆则存在原料成本太高的问题。采用鱼鳞明胶制备代血浆，则有效规避 了上述风险，同时控制了生产成本，探索了一条新来源、制备安全有效的代血浆的新途径。
【发明内容】
[0010] 本发明的目的在于提供一种以鱼鳞明胶提取的含有多肽、氨基酸等物质的供注射 用的明胶代血浆注射液及其制备方法。
[0011] 针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案： 一种鱼鳞明胶代血浆注射液的制备方法，所述制备方法如下： 1、 鱼鳞明胶的降解：将鱼鳞明胶用一定量的60~90°C注射用水溶解，用pH调节剂调 节鱼鳞明胶溶液的pH值至5. 5~6. 5,将鱼鳞明胶溶液加温至110~130°C，至相对粘度达 到1. 7~2. 0时，停止加热，并冷却至30~40°C得到鱼鳞明胶降解液； 2、 交联改性：调节鱼鳞明胶降解液使其pH值至8. 5~9. 5,保持温度在30~40°C，加 入交联剂，不断搅拌，交联1~3h; 3、 加电解质：向鱼鳞明胶交联液中补加一定量的注射用水，加入氯化钾、氯化钠、氯化 钙，全部溶解后调pH值至6. 5~7. 5 ; 4、 吸附：向补加过电解质的鱼鳞明胶液中加入活化处理的活性炭，加热至90~110°C 并保温20~50分钟，冷却降温，静置沉淀，上清液过滤； 5、 过滤：加入剩余量的注射用水，调pH值至6. 8~7. 2,用多孔钛棒和微孔滤膜组合分 级过滤，先通过多孔钛棒，再通过微孔滤膜； 6、 灌封、灭菌、灯检、包装； 上述步骤1中pH调节剂为盐酸溶液或氢氧化钠。
[0012] 上述步骤1中注射用水用量为注射液总体积量的30~50%。
[0013] 上述步骤3中注射用水用量为注射液总体积量的40~50%。
[0014] 上述步骤2中交联剂是琥珀酸酐(别名：丁二酸酐或2, 5-二氧四氢呋喃)，琥珀酸 酐与鱼鳞明胶的质量比，g/g，为0.005~0.02 : 1。
[0015] 上述步骤3中氯化钾、氯化钠、氯化钙的添加量需保证满足鱼鳞明胶代血浆注射 液的钾、钠、I丐（μmol/ml)的浓度分别满足2~4μmol/ml、139~152μmol/ml、0. 2~ 2μmol/ml〇
[0016] 上述步骤4中活性炭与明胶液的质量体积比，g/ml,为0. 001~0. 015 :1。
[0017] 上述步骤5中多孔钛棒和微孔滤膜组合分级过滤指依次通过10μπι的多孔钛棒、 0. 45μm的微孔滤膜、0. 22μm的微孔滤膜。
[0018] 上述步骤6中灌封规格是：250ml: 1.6g(以含氮量计)，灭菌为采用115°C灭菌 30分钟。
[0019] 本发明的有益效果主要是： 1、采用鱼鳞明胶制备代血浆注射液，既保证了原料低廉的成本，又避免了来源于猪、牛 等动物的明胶原料因可能携带如口蹄疫、疯牛病等流行疾病，而对人体造成的潜在安全风 险，鱼鳞明胶代血浆具有更高的生物安全性。
[0020] 2、使用琥珀酸酐做交联剂，对人体无毒副作用，反应条件能准确控制，交联程度 高，确保交联产物符合国家标准要求。
[0021] 3、通过添加适量的氯化钠、氯化钾、氯化钙等电解质，保证了大量输入鱼鳞明胶代 血浆时不会引起电解质紊乱，同时符合国家标准要求。
[0022] 4、采用多孔钛棒和微孔滤膜组合分级过滤，制剂中的大颗粒杂质被10μπι的多孔 钛棒去除，微孔滤膜也分为