本发明属于细胞检测分离技术领域，特别是涉及一种新型外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置。
背景技术：
循环内皮细胞(circulatingendothelialcells,cecs)是能够从外周血中可检测的血管内皮细胞，内皮细胞每天更新0-1％,因此，体内循环内皮细胞数量少。在多种疾病(心血管疾病、恶性肿瘤、创伤、炎症等)状态下，外周血中的循环内皮细胞的形态和数量均会发生变化，可作为反映血管内皮细胞损伤的直接和特异性生物标志。根据循环内皮细胞的不同功能状态可分为循环静息cec和活化cec；根据内皮细胞的发生学可分为内皮祖细胞和成熟内皮细胞。内皮细胞表面可表达多种的细胞表面的抗原如vegfr-2、cd31、cd34、cdl06、cdl46等，联合这些细胞表面标志检测可以作为外周血内皮细胞计数和内皮细胞亚型分选的工具。外周血循环内皮细胞及亚型计数可作为多种疾病的预后和预测指标，对疾病的诊断和治疗有较为重要的作用。
然而，目前针对内皮细胞及亚型的检测多基于流式细胞技术检测，能够部分实现内皮细胞的计数，其只能完成总数的统计，不能对不同亚型进行分类统计及分离，并且存在着无法实现准确计数、检测及分离的缺陷。想要实现外周血中内皮细胞亚型的准确检测、计数和分离，目前现有技术中还没有很好的办法及装置。
技术实现要素：
本发明提供了一种新型外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置，解决了外周血循环内皮细胞亚型的准确检测计数问题，进一步的解决了外周血循环内皮细胞的分离问题。
具体技术方案是，所述外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置，包括荧光标记抗体检测管、单细胞液流发生器、激光发生器、信号接收器和信息处理器；荧光标记抗体检测管用于盛放荧光标记抗体；单细胞液流发生器用于使细胞成单细胞流排列，并且具有良好的光穿透性；激光发生器用于发射不同波长的激光；信号接收器用于接收激光发生器发出的与荧光混合后的激光，并且将信号传递给信息处理器；信息处理器用于将接收到的光的波长信号的变化进行处理分析最终实现血循环内皮细胞亚型的检测计数。另外设置在荧光标记抗体检测管单细胞液流发生器可以为多个，以便提高计数效率。
使用前，首先进行外周血循环内皮细胞标记，①准备抗体：用0～4℃磷酸盐缓冲盐水(其为ph8.0)将抗体cd34、cd146、cd133和cd106溶液分别稀释至浓度为30～40ug/ml，在冰槽上置于三角烧瓶内②准备荧光素：按每微克蛋白加入荧光素10ug计算，将荧光素用中碳酸钠水(其浓度为3％)溶液溶解。③将所准备的抗体与荧光素溶液进行等量混合、混匀，置于0～4℃冰箱中过夜，即可应用于外周血中循环内皮细胞的检测。④在检测时，每毫升血液先后加入含有荧光素的抗体cd34、cd146、cd133和cd106，每种抗体加入的量为10-20ul，反应2小时后就可进行内皮细胞亚型计数检测了。
工作原理，标记后的外周血循环内皮细胞加入到荧光标记抗体检测管中，然后与单细胞液流发生器连接，然后标记后的外周血循环内皮细胞进入单细胞液流发生器中，因为单细胞液流发生器官腔的直径略大于一个内皮细胞的直径，约5ul，因此使得细胞在管内呈单细胞液流排列。而又因单细胞液流发生器具有良好的光穿透性，因此激光发生器发出不同波长的激光时通过单细胞液流发生器与被标记后的cd34、cd146、cd133或cd106内皮细胞相交，因为不同波长的荧光与激光混合可发生光学改变，而信号接收器又设置在激光发生器对面，因此可以很好的接收光学改变后的激光信号，之后将信号传递给信号处理器，光信号的变化经过信号处理器处理，每个内皮细胞经过激光是光强度的变化计数为一个内皮细胞，激光和不同荧光混合产生混合光，其波长有所不同。根据信号处理器所接收的不同波长光进行内皮细胞亚型计数。
本发明所属的外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置，不仅限于处理cd34、cd146、cd133或cd106内皮细胞而且也适用于其它抗体。
进一步的，所述外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置还包括设置在单细胞液流发生器的单细胞液流管末端的与信息处理器电连接的细胞电磁场偏转器，因为细胞电磁场偏转器设置在单细胞液流管末端并且单细胞液流管距离下方还有段空间，因此细胞从单细胞液流管末端流出下落过程中，在细胞电磁场偏转器的作用下会发生相应的偏转及位移。其中细胞电磁场偏转器用于将同一个类型的内皮细胞亚型向同一个方向偏转，从而实现不同亚型的内皮细胞的分离。通过在单细胞液流管末端加上两两相对的细胞电磁场偏转器，从而细胞电磁场偏转器根据信号处理器计数分析的细胞亚型的类别及需要偏转的方向及距离自动给予最合适的电流电压，从而实现将同一类型的内皮细胞亚型向同一方向进行偏转，最终实现不同类型的内皮细胞亚型的分离。
进一步的，荧光标记抗体检测管下部与单细胞液流发生器上部活动连接；激光发生器设置在单细胞液流发生器上半部分的一侧，信号接收器设置在相对的另一侧，激光发生器和信号接收器均固定于单细胞液流发生器上段所对应的整机罩的内侧壁。信息处理器一端与信号接收器电连接，另一端与细胞电磁场偏转器电连接。
进一步的，所述荧光标记抗体检测管下部与单细胞液流发生器上部之间设置有控制开关。
进一步的，在单细胞液流发生器的下端还设置有接收皿。内皮细胞亚型接收皿置于整机罩的底座内侧面，接受皿的中心位于单细胞液流管末端的正下方。接受皿为四分格，每个分格的位置分别位于四种类型的内皮细胞偏转方向，并能全部接受分选的细胞亚型。接收皿固定于底座内侧面并可方便拆卸，从整机罩下部的一个侧面可以取出。
进一步的，所述的外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置还包括外壳，外壳上设置有功能设置面板、液晶显示屏及微型打印机。
有益效果，通过对外周血循环内皮细胞进行荧光标记，在通过利用单细胞液流发生器、激光发生器、信息接收器和信息处理器的结合从而可以准确的对外周血循环内皮细胞进行分类计数，也即可以更加准确的记录出各种不同类型的外周血循环内皮细胞的数量；通过细胞电磁场偏转器的利用从而进一步实现对不同类型的外周血循环内皮细胞的分离，结构更加简单，分离准确性更高；通过在荧光标记抗体检测管下部与单细胞液流发生器上部之间设置控制开关从而可以有效控制周血循环内皮细胞进入单细胞液流发生器的时间及数量；通过在单细胞液流发生器的下端设置有接收皿，从而很好的收集分离的不同类型的外周血循环内皮细胞；结果显示器的设置可以使检测计数结果更加直观的显现出来，观察更加方便。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对实施例描述中所需的附图作简单介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，这些附图所直接得到的技术方案也应属于本发明的保护范围。
图1是本发明所述的外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置的结构框图。
附图标记说明：1、荧光标记抗体检测管；2、单细胞液流发生器；3、激光发生器；4、信号接收器；5、信息处理器；6、细胞电磁场偏转器；7、接收皿；8、结果显示器；9、控制开关；10、外壳。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本发明的具体实施方式做详细说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施方式的限制。
实施例1如图1所示，所述外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置，包括荧光标记抗体检测管1、单细胞液流发生器2、激光发生器3、信号接收器4和信息处理器5；荧光标记抗体检测管1用于盛放荧光标记抗体；单细胞液流发生器2用于使细胞成单细胞流排列，并且具有良好的光穿透性；激光发生器3用于发射不同波长的激光；信号接收器4用于接收激光发生器3发出的与荧光混合后的激光，并且将信号传递给信息处理器5；信息处理器5用于将接收到的光的波长信号的变化进行处理分析最终实现血循环内皮细胞亚型的检测计数。另外设置在荧光标记抗体检测管单细胞液流发生器2可以为多个，如2个或者5个等以便提高计数效率。
使用时，首先进行外周血循环内皮细胞标记，具体步骤方法为①准备抗体：用0～4℃磷酸盐缓冲盐水(其为ph8.0)将抗体cd34、cd146、cd133和cd106溶液分别稀释至浓度为30～40ug/ml，在冰槽上置于三角烧瓶内②准备荧光素：按每微克蛋白加入荧光素10ug计算，将荧光素用中碳酸钠水(其浓度为3％)溶液溶解。③将所准备的抗体与荧光素溶液进行等量混合、混匀，置于0～4℃冰箱中过夜，即可应用于外周血中循环内皮细胞的检测。④在检测时，每毫升血液先后加入含有荧光素的抗体cd34、cd146、cd133和cd106，每种抗体加入的量为10-20ul，反应2小时后就可进行内皮细胞亚型计数检测了。
工作原理，标记后的外周血循环内皮细胞加入到荧光标记抗体检测管1中，然后与单细胞液流发生器2连接，然后标记后的外周血循环内皮细胞进入单细胞液流发生器2中，因为单细胞液流发生器2官腔的直径略大于一个内皮细胞的直径，约5ul，因此使得细胞在管内呈单细胞液流排列。而又因单细胞液流发生器2具有良好的光穿透性，因此激光发生器3发出不同波长的激光时通过单细胞液流发生器2与被标记后的cd34、cd146、cd133或cd106内皮细胞相交，因为不同波长的荧光与激光混合可发生光学改变，而信号接收器4又设置在激光发生器3对面，因此可以很好的接收光学改变后的激光信号，之后将信号传递给信号处理器5，光信号的变化经过信号处理器5处理，每个内皮细胞经过激光是光强度的变化计数为一个内皮细胞，激光和不同荧光混合产生混合光，其波长有所不同。根据信号处理器5所接收的不同波长光进行内皮细胞亚型计数，从而准确对外周血循环内皮细胞进行检测与计数。通过对外周血循环内皮细胞进行荧光标记，在通过利用单细胞液流发生器、激光发生器、信息接收器和信息处理器的结合从而可以准确的对外周血循环内皮细胞进行分类计数，也即可以更加准确的记录出各种不同类型的外周血循环内皮细胞的类型及数量。
实施例2如图1所示，所述外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置，包括荧光标记抗体检测管1、单细胞液流发生器2、激光发生器3、信号接收器4和信息处理器5；荧光标记抗体检测管1用于盛放荧光标记抗体；单细胞液流发生器2用于使细胞成单细胞流排列，并且具有良好的光穿透性；单细胞液流发生器2的长度根据单细胞液流在单细胞液流发生器内的流动速度、cec亚型计数和cec分离之间响应时间等多个因素确定。激光发生器3用于发射不同波长的激光；信号接收器4用于接收激光发生器3发出的与荧光混合后的激光，并且将信号传递给信息处理器5；信息处理器5用于将接收到的光的波长信号的变化进行处理分析最终实现血循环内皮细胞亚型的检测计数。进一步的，所述外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置还包括设置在单细胞液流发生器2的单细胞液流管末端的与信息处理器5电连接的细胞电磁场偏转器6，单细胞液流发生器的长度根据单细胞液流在单细胞液流发生器内的流动速度、cec亚型计数和cec分离之间响应时间等多个因素确定。具体的在单细胞液流发生器2的单细胞液流管末端加上两两相对的细胞电磁场偏转器6。因为细胞电磁场偏转器6设置在单细胞液流管末端并且单细胞液流管距离下方还有段空间，因此细胞从单细胞液流管末端流出下落过程中，在细胞电磁场偏转器6的电磁力的作用下会发生相应的偏转及位移。待检测单细胞液流样品在经过单细胞液流发生器2时，在上半部分有激光照射到标记的不同荧光抗体血管内皮细胞时，激光信号会产生微弱的变化，根据这个变化信号处理器5对cec亚型进行计数，并且将计数信号及类型信息传到细胞电磁场偏转器6，细胞电磁场偏转器6可以根据需要偏转的方向及距离自动给予最合适的电流电压，从而实现将同一类型的内皮细胞亚型向同一方向进行偏转，从而实现不同类型的内皮细胞亚型的最终分离。也可以根据细胞亚型的种类提前设置好细胞电磁场偏转器6所对应细胞亚型及偏转距离所需得电流及电压。通过对外周血循环内皮细胞进行荧光标记，在通过利用单细胞液流发生器、激光发生器、信息接收器和信息处理器的结合从而可以准确的对外周血循环内皮细胞进行分类计数，也即可以更加准确的记录出各种不同类型的外周血循环内皮细胞的种类及数量；通过细胞电磁场偏转器的利用从而进一步实现对不同类型的外周血循环内皮细胞的分离，结构更加简单，分离准确性更高。
实施例3在上述实施例2的技术方案的基础上，进一步的，荧光标记抗体检测管1下部与单细胞液流发生器2上部活动连接，从而可实现拿取更加方便；激光发生器3设置在单细胞液流发生器2上半部分的一侧，信号接收器4设置在相对的另一侧，也即二者都设置在激光发生器3得上半部分，从而更好的完成激光的接收；信息处理器5一端与信号接收器4电连接，另一端与细胞电磁场偏转器6电连接。通过对外周血循环内皮细胞进行荧光标记，在通过利用单细胞液流发生器、激光发生器、信息接收器和信息处理器的结合从而可以准确的对外周血循环内皮细胞进行分类计数，也即可以更加准确的记录出各种不同类型的外周血循环内皮细胞的数量。通过细胞电磁场偏转器的利用从而进一步实现对不同类型的外周血循环内皮细胞的分离，结构更加简单，分离准确性更高。
实施例4进一步的，所述荧光标记抗体检测管1下部与单细胞液流发生器2上部之间设置有控制开关9。通过在荧光标记抗体检测管1下部与单细胞液流发生器2上部之间设置控制开关9，从而可以有效控制周血循环内皮细胞进入单细胞液流发生2的时间及数量，使用更加方便。
实施例5在上述实施例4的技术方案的基础上，进一步的，在单细胞液流发生器2的下端还设置有接收皿7。接收皿7的中心位于单细胞液流管末端的正下方。接受皿为四分格，每个分格的位置分别位于四种类型的内皮细胞偏转方向，并能全部接受分选的细胞亚型。接收皿7，从整机罩下部的一个侧面可以取出。通过在单细胞液流发生器的下端设置接收皿7，从而很好的收集分离的不同类型的外周血循环内皮细胞。
实施例6，如图1所示，在上述实施例5的基础上进一步的，所述的外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置还包括外壳10。更好的保护装置内部各部件，也可在一定程度上满足各部件对光线的需求。
实施例7，如图1所示，所述外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置，包括荧光标记抗体检测管1、单细胞液流发生器2、激光发生器3、信号接收器4和信息处理器5；荧光标记抗体检测管1用于盛放荧光标记抗体；单细胞液流发生器2用于使细胞成单细胞流排列，并且具有良好的光穿透性；激光发生器3用于发射不同波长的激光；信号接收器4用于接收激光发生器3发出的与荧光混合后的激光，并且将信号传递给信息处理器5；信息处理器5用于将接收到的光的波长信号的变化进行处理分析最终实现血循环内皮细胞亚型的检测计数。进一步的，所述外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置还包括设置在单细胞液流发生器2的单细胞液流管末端的与信息处理器5电连接的细胞电磁场偏转器6，具体的在单细胞液流发生器2的单细胞液流管末端加上两两相对的细胞电磁场偏转器6。因为细胞电磁场偏转器6设置在单细胞液流管末端并且单细胞液流管距离下方还有段空间，因此细胞从单细胞液流管末端流出下落过程中，在细胞电磁场偏转器的电磁力的作用下会发生相应的偏转及位移。进一步的，所述荧光标记抗体检测管1下部与单细胞液流发生器2上部之间设置有控制开关9。进一步的，在单细胞液流发生器2的下端还设置有接收皿7。进一步的，所述的外周血循环内皮细胞亚型检测与分离装置还包括外壳10。外壳10上设置有功能设置面板、液晶显示屏及微型打印机。通过对外周血循环内皮细胞进行荧光标记，在通过利用单细胞液流发生器、激光发生器、信息接收器和信息处理器的结合从而可以准确的对外周血循环内皮细胞进行分类计数，也即可以更加准确的记录出各种不同类型的外周血循环内皮细胞的数量；通过细胞电磁场偏转器的利用从而进一步实现对不同类型的外周血循环内皮细胞的分离，结构更加简单，分离准确性更高；通过在荧光标记抗体检测管下部与单细胞液流发生器上部之间设置控制开关从而可以有效控制周血循环内皮细胞进入单细胞液流发生器的时间及数量；通过在单细胞液流发生器的下端设置有接收皿，从而很好的收集分离的不同类型的外周血循环内皮细胞；结果显示器的设置可以使检测技术结果更加直观的显现出来，观察更加方便。