快速检测草甘膦残留的试剂盒及系统的制作方法

本实用新型涉及试剂盒技术领域，尤其是涉及快速检测草甘膦残留的试剂盒及系统。

背景技术：

随着现代农业的迅速发展，农药的使用越来越广泛，农药残留对环境、动植物及人体健康造成的威胁越来越凸显。草甘膦目前已成为使用最广泛、用量最大的除草剂之一。草甘膦(Glyphosate)是美国孟山都公司在1971年开发的一种广谱灭生性水溶性除草剂，能够非选择性的有效抑制多种一年生或多年生杂草。草甘膦商品名为镇草宁、农达等，化学名为N-膦羧甲基甘氨酸(N-phosphonomethyl-glycine，PMG)，化学式为C₃H₈NO₅P，分子量为169。

虽然草甘膦的毒性较低，但长期大量使用会在环境和生物体内不断富集，并通过食物链进入人体，对人体健康造成潜在威胁。已有研究证实草甘膦具有一定的动物毒性作用。因此，很多国家和地区都将草甘膦的残留限量列入相关法规与标准中，我国以及美国的饮用水标准中都规定草甘膦的最大残留限量为0.7mg/L，我国2014年修订的食品安全国家标准《食品中农药最大残留限量》(GB2763-2014)中对草甘膦在食品中的最大残留限量作出了更为详细的规定。

近年来，针对草甘膦残留的检测研究逐渐成为研究热点，目前较为成熟的检测方法包括气相色谱、液相色谱以及联用技术，但这些传统方法在样品处理、分析时间上都存在一些不足，不适宜于大批量快速筛查以及推广应用。且目前一些常规的试剂盒结构设计不合理，存在操作不便的缺陷。

鉴于此，有必要进行研究以提供一种方案。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于提供一种快速检测草甘膦残留的试剂盒，用于改善现有方法在样品处理、分析时间上都存在一些不足，以及不适宜于大批量快速筛查和推广应用的缺陷。

本实用新型的目的在于提供一种快速检测草甘膦残留的系统。

本实用新型提供的一种快速检测草甘膦残留的试剂盒，包括盒体以及可开启和闭合的盖体；

所述盒体包括第一盒体和第二盒体；

所述第一盒体内部设置有固定垫和若干个试剂瓶，若干个所述试剂瓶分别盛装有草甘膦抗体溶液、草甘膦二抗溶液、草甘膦标准溶液、洗涤液、稀释液、显色液和终止液，在所述固定垫上设有与所述试剂瓶对应的下凹瓶位；

所述第二盒体内设置固定若干个枪头的枪头板；

所述盖体具有空腔结构，所述盖体内部设置有可拆卸连接的检测板以及说明书。

进一步的，所述盖体内部设置有卡夹，通过所述卡夹将所述检测板和/或说明书固定在所述盖体上。

进一步的，所述检测板为聚苯乙烯材质的96孔板。

进一步的，在所述检测板的顶部还设置有封板膜。

进一步的，若干个所述试剂瓶上均设有各自所盛装溶液的标签。

进一步的，所述固定垫为泡沫塑料固定垫或海绵固定垫。

进一步的，所述第一盒体和第二盒体可拆卸连接。

进一步的，所述第一盒体与所述盖体枢轴连接。

进一步的，所述枪头板的尺寸与所述第二盒体的尺寸相对应，所述枪头板上还设置有缺口。

本实用新型还提供了一种快速检测草甘膦残留的系统，包括上述快速检测草甘膦残留的试剂盒。

与现有技术相比，本实用新型提供的快速检测草甘膦残留的试剂盒及系统具有如下有益效果：

(1)本实用新型提供的快速检测草甘膦残留的试剂盒，包括盒体和盖体，其中，通过将盖体设计为具有一定深度的空腔结构，使得检测板和/或说明书可拆卸的固定在盒体内部，既对检测板和/或说明书起到定位作用，又能防止说明书丢失；另外，将盒体设置为第一盒体和第二盒体，第一盒体主要用于盛放试剂瓶，第二盒体主要用于盛放枪头，整体结构设计合理，操作起来更为便利。

(2)本实用新型提供的快速检测草甘膦残留的试剂盒，该试剂盒所需试剂种类固定，程序固定，操作简便快捷，适合实验操作基础薄弱人员使用，能够在2小时内完成样品的试剂盒结果判定，另外，可以对大批量样品进行同时检测，能够有效减少检测费用和检测时间，不需要昂贵仪器进行检测，能够有效减少设备费，改善了现有方法在样品处理、分析时间上存在的不足，以及不适宜于大批量快速筛查和推广应用的缺陷。

(3)本实用新型提供的快速检测草甘膦残留的系统，该系统采用上述快速检测草甘膦残留的试剂盒，可实现对于草甘膦残留的快速检测和筛查。

附图说明

为了更清楚地说明本实用新型具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本实用新型的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为快速检测草甘膦残留的试剂盒的结构简图；

图2为快速检测草甘膦残留的试剂盒另一角度的结构简图；

图3为检测板的结构示意图；

图4为枪头板的结构示意图。

图标：1-盖体；2-盒体；3-检测板；4-固定垫；5-试剂瓶；6-枪头板；7-枪头；11-卡夹；12-卡环；21-第一盒体；22-第二盒体；31-封板膜；32-检测孔；41-下凹瓶位；61-安装孔；62-缺口；211-卡钩；221-把手。

具体实施方式

下面将结合附图对本实用新型的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。

在本实用新型的描述中，需要说明的是，术语“上”、“下”、“中间”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本实用新型和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本实用新型的限制。此外，术语“第一”、“第二”、仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。

在本实用新型的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本实用新型中的具体含义。

实施例1

根据本实用新型的一个方面，本实施例提供了一种快速检测草甘膦残留的试剂盒，包括盒体2以及可开启和闭合的盖体1，如图1-4所示。

盖体1和盒体2的结构、形状不作特殊限定，只需要完成各试剂材料的存放即可，可选择满足使用要求的市面上常见的盒体2和盖体1。

具体的，在本实施例中，盖体1具有一空腔结构，盖体1内部设置有检测板3以及说明书(图中未标示)。应当说明的是，盖体1所形成的空腔的深度要大于检测板3和说明书的总厚度。

检测板3上设置有若干个检测孔32。检测板3具体为聚苯乙烯材质的96孔板或48孔板。在本实施例中，检测板3采用的是96孔板，具体如图3所示。同时，在检测孔32内固定有草甘膦与载体蛋白形成的偶联物的包被层。

其中，载体蛋白优选为鸡卵清蛋白。

包被层的形成方法具体为，草甘膦与载体蛋白的偶联物经碳酸盐缓冲液稀释后吸附于检测板3的检测孔32表面且能够保持其免疫学活性。

在检测板3的顶部还设置有封板膜31，封板膜31可避免检测板3的污染。封板膜31优选为无菌透气封板膜，其可以实现空气和二氧化碳的均匀交换，同时能够阻止水蒸气蒸发。

检测板3和说明书与盖体1可拆卸连接。可拆卸连接的方式可以为常见的几种方式。在本实施例中，在盖体1内部设置有卡夹11，卡夹11的一端固定在盖体1上，另一端在外力的作用下可相对于盖体1转动，通过卡夹11将检测板3和/或说明书固定或者夹持在盖体1内部。

通过将盖体1设计为具有一定深度的空腔结构以及卡夹11的设置，使得检测板3和/或说明书可拆卸得固定在第一盒体21内部，既对检测板3和/或说明书起到定位作用，又能避免说明书长期使用容易丢失的问题。

盖体1能够相对于盒体2转动以实现试剂盒的开启和关闭。盖体1与盒体2之间可以是活动连接，比如铰接，也可以是相互独立的。

盒体2包括第一盒体21和第二盒体22，第一盒体21与第二盒体22的横截面积相同，两者的高度可以相同也可以不同。第一盒体21位于第二盒体22的上方或者下方。在本实施例中，第一盒体21位于第二盒体22的上方。

具体的，在第一盒体21内部设置有固定垫4和若干个试剂瓶5。固定垫4的尺寸略小于第一盒体21的尺寸。固定垫4上设置有若干个下凹瓶位41，若干个下凹瓶位41的数量、形状和大小与试剂瓶5的数量、形状和大小相对应。

固定垫4主要为泡沫塑料固定垫或海绵固定垫，也可以采用硬质纸板固定垫。上述几种固定垫4均可将试剂瓶5牢固得固定在第一盒体21内部，防止在运输或者移动过程中试剂瓶5的散落。

若干个试剂瓶5内分别盛装有草甘膦抗体溶液、草甘膦二抗溶液、草甘膦标准溶液、洗涤液、稀释液、显色液和终止液。

作为本实用新型一种优选方式，草甘膦抗体溶液为草甘膦兔源特异性抗体；草甘膦二抗溶液为辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)标记的羊抗兔IgG抗体；草甘膦标准溶液的浓度分别为2000ng/mL，1000ng/mL，500ng/mL，250ng/mL，125ng/mL，62.5ng/mL和0ng/mL；洗涤液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液中含有0.5mL/L的Tween-20溶液(PBST)；稀释液，含5％w/v脱脂奶的PBST溶液；显色液，为3,3',5,5'-四甲基联苯胺缓冲液；终止液，为2mol/L的盐酸溶液或硫酸溶液。

作为本实用新型一种优选方式，草甘膦抗体溶液为草甘膦兔源特异性抗体；草甘膦二抗溶液为碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase，AP)标记的羊抗兔IgG抗体；草甘膦标准溶液的浓度分别为2000ng/mL，1000ng/mL，500ng/mL，250ng/mL，125ng/mL，62.5ng/mL和0ng/mL；洗涤液为PBST溶液；稀释液，含5％w/v脱脂奶的PBST溶液；显色液，为对硝基苯磷酸酯缓冲液；终止液，为2mol/L的氢氧化钠溶液。

鉴于上述溶液种类的数量，在本实施例中，试剂瓶5的数量为13个，试剂瓶5的大小根据用量有所不同。

为防止在使用过程中将上述溶液混淆，在各试剂瓶5的瓶身和/或瓶盖上均设有各自所盛装溶液的标签。另外也可采用不同的颜色对各试剂瓶5进行区分，既达到明显标识的目的，又具有一定的观赏性。

为实现盒体2与盖体1的闭合，在上述技术方案基础之上，第一盒体21上设置有卡钩211，在盖体1的相应位置上设置有卡环12，卡钩211和卡环12可配合连接。需要注意的是，第一盒体21与盖体1之间的连接并不限于卡钩211和卡环12的这种连接方式，只要市面上常见的盒体与盖体的连接方式均可满足使用要求。

第一盒体21和第二盒体22之间可拆卸连接。

第二盒体22可以是以推拉的方式拉出，具体如图2所示。为便于第二盒体22的推拉，在第二盒体22上还设置有把手221；

或者，第一盒体21和第二盒体22上分别设置有相应的凸块和凹槽，通过凸块和凹槽的配合将第一盒体21和第二盒体22进行连接，在图中未标示出来。

在第二盒体22内设置用于固定若干个枪头7的枪头板6，具体如图4所示。枪头板6的尺寸与第二盒体22的尺寸相对应。枪头板6上设置有若干个安装孔61，枪头7通过安装孔61固定在枪头板6上。

安装孔61的孔径大小可相同，也可不同。当固定不同型号的枪头7时，枪头板6上可设置不同孔径的安装孔61。

在枪头板6相对的两侧还设置有缺口62，缺口62的大小与手指的大小一致。当对枪头板6整体进行取用时，手指可通过缺口62对枪头板6进行取放。

枪头7的容量可以为10μL、200μL或1000μL等，具体可根据实际需要进行取用。为防止枪头7的污染，可将枪头7采用塑封膜进行包覆。

本实用新型将盒体设置为第一盒体和第二盒体，第一盒体主要用于盛放试剂瓶，第二盒体主要用于盛放枪头，整体结构设计合理，操作起来更为便利。

实施例2

根据本实用新型的另一个方面，本实施例提供了一种快速检测草甘膦残留的系统，该系统包括实施例1中的快速检测草甘膦残留的试剂盒。

通过采用上述快速检测草甘膦残留的试剂盒，该系统可实现对于草甘膦残留的快速检测和筛查。

本实用新型快速检测草甘膦残留的试剂盒的检测原理：以竞争性酶联免疫原理为基础，在获得草甘膦特异性抗体的基础上，利用酶联免疫反应的高效放大作用实现草甘膦的高灵敏检测。

本实用新型提供的快速检测草甘膦残留的试剂盒的检测方法，包括以下步骤：

(a)向检测板上的各检测孔中依次加入不同浓度的草甘膦标准溶液；

(b)从草甘膦标准溶液低浓度检测孔向高浓度检测孔逐孔加入草甘膦抗体溶液，37℃温育10～20min，洗板；

(c)向检测板上的各检测孔中加入草甘膦二抗溶液，37℃温育25～35min，洗板；

(d)向检测板上的各检测孔中加入显色液，反应5～15min；

(e)向检测板上的各检测孔中加入终止液终止反应，测定OD450nm(HRP标记二抗)或OD405nm(AP标记二抗)吸光值，根据草甘膦的竞争酶联免疫标准曲线，计算样品中草甘膦残留浓度。

结果分析：计算抑制率B/B₀，其中B₀为草甘膦标准溶液浓度为0ng/mL时的OD450nm或OD405nm吸光值，B为草甘膦标准溶液不同浓度的OD450nm或OD405nm吸光值，以B/B₀为纵坐标，以草甘膦标准溶液浓度的对数值为横坐标，绘制标准曲线，曲线的线性回归方程用于计算方法的半数抑制浓度(IC₅₀)以及样品中草甘膦浓度。

该试剂盒所需试剂种类固定，程序固定，操作简便快捷，适合实验操作基础薄弱人员使用，能够在2小时内完成样品的检测盒结果判定，另外，可以对大批量样品进行同时检测，能够有效减少检测费用和检测时间，不需要昂贵仪器进行检测，能够有效减少设备费，改善了现有方法在样品处理、分析时间上存在的不足，以及不适宜于大批量快速筛查和推广应用的缺陷。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本实用新型的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本实用新型进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本实用新型各实施例技术方案的范围。