本发明涉及分析检测领域，特别涉及一种鱼肉中喹诺酮类快速检测的方法。
背景技术：
：鱼肉中喹诺酮类药物残留已引起国内外人士的广泛关注，由于喹诺酮类抗生素的广泛使用，已经成为鱼肉中一类重要的药物残留污染物。这些药物残留存在于动物体内导致耐药和过敏菌株的发展。中国和欧盟规定，对动物组织中喹诺酮类药物最高残留限量为0.01～1.9mg/kg。因此，需要建立一种简单、快速、灵敏的检测鳗鱼中喹诺酮类药物的方法，开展有效的水产品中喹诺酮类药物残留检测监控。由于样品的复杂性以及低浓度喹诺酮类药物的检测，在分析过程中，样品净化和富集过程是至关重要的步骤，目前喹诺酮类药物的前处理方法包括搅拌棒固相萃取，微波提取，液液萃取法，双相透析和超临界流体萃取，此类前处理过程的缺点是反复萃取损失大、处理过程耗时长、经济成本高、过程繁琐。因此，建立起一种简便、快速、高效的水产品中喹诺酮类药物残留检测方法是非常必要的。技术实现要素：本发明针对现有技术问题，提供一种鱼肉中喹诺酮类快速检测的方法，前处理采用酸性提取液，可以使喹诺酮类更好的溶解进提取液中，采用n-丙基乙二胺作为净化剂，净化效果好，不对喹诺酮类产生吸附，可以将提取、基质去除与净化一次完成，操作简便、快速、高效，且回收率高，适合推广使用。为实现以上目的，本发明采用的技术方案为一种鱼肉中喹诺酮类快速检测的方法，包括以下步骤：1)称取鱼肉浆液样品2.5-5g于离心管中，加入1-2ml的稀盐酸，旋涡振荡1-3min，再加入10-20ml提取液，混匀，离心，得到第一上清液；2)向步骤1)的第一上清液中加入0.2-0.4g的n-丙基乙二胺，旋涡振荡1-3min后，离心，得到第二上清液，将第二上清液浓缩干燥后，用流动相定容，过0.45μm滤膜，得到样品液；3)将样品液上样至高效液相色谱仪，检测样品液中喹诺酮类含量。所述高效液相色谱仪色谱分析条件为：色谱柱为chromatoraxc18column4.6mm×150mm，5μm；流动相：体积比为85:15的0.05mol/l柠檬酸溶液和乙腈的混合液，三乙胺调ph至3.5；流速1.0ml/min；柱温30℃；进样量20μl；荧光检测器，激发波长280nm，发射波长360nm。所述提取液是乙腈和乙酸的混合液，所述乙腈和乙酸的体积比为9:1。所述稀盐酸是浓度为0.15mol/l的盐酸溶液。所述鱼肉浆液是将活鱼宰杀，去除内脏和硬组织，将鱼肉切碎，进行匀浆后制得。所述离心条件为5000rpm离心5-10min。所述浓缩干燥是将第二上清液在45-55℃水浴中氮气吹至近干。由上述技术方案可知，本发明针对现有技术具有如下有益效果：本发明前处理采用酸性提取液，可以使喹诺酮类更好的溶解进提取液中，采用n-丙基乙二胺作为净化剂，净化效果好，n-丙基乙二胺不对喹诺酮类产生吸附，去除样品液中的残留基质效果好，可以将提取、基质去除与净化一次完成，本方法与传统的前处理相比，大大缩短了样品前处理的时间，操作简便、快速、高效，提取完全，适合推广使用；本方法的加标回收率在87.6-105.7％之间，rsd≤2.3，说明本方法具有较高的准确度和重现性的优点。具体实施方式下面结合具体实施例，对本发明做进一步详细叙述。实施例11)市场购买活鲤鱼，将活鲤鱼宰杀，去除内脏和硬组织，将鲤鱼肉切碎，进行匀浆后制得鱼肉浆液，称取鱼肉浆液样品2.5g于离心管中，加入1ml的0.15mol/l的盐酸溶液，旋涡振荡1min，再加入10ml体积比为9:1乙腈和乙酸的混合液的提取液，混匀，5000rpm离心5min，得到第一上清液；2)向步骤1)的第一上清液中加入0.2g的n-丙基乙二胺，旋涡振荡1min后，5000rpm离心5min，得到第二上清液，将第二上清液在45℃水浴中氮气吹至近干后，用流动相定容，过0.45μm滤膜，得到样品液；3)将样品液上样至高效液相色谱仪，检测样品液中喹诺酮类含量；所述高效液相色谱仪色谱分析条件为：色谱柱为chromatoraxc18column4.6mm×150mm，5μm；流动相：体积比为85:15的0.05mol/l柠檬酸溶液和乙腈的混合液，三乙胺调ph至3.5；流速1.0ml/min；柱温30℃；进样量20μl；荧光检测器，激发波长280nm，发射波长360nm。实施例21)市场购买活鲫鱼，将活鲫鱼宰杀，去除内脏和硬组织，将鲫鱼肉切碎，进行匀浆后制得鱼肉浆液，称取鱼肉浆液样品3.5g于离心管中，加入1.5ml的0.15mol/l的盐酸溶液，旋涡振荡2min，再加入15ml体积比为9:1乙腈和乙酸的混合液的提取液，混匀，5000rpm离心7min，得到第一上清液；2)向步骤1)的第一上清液中加入0.3g的n-丙基乙二胺，旋涡振荡2min后，5000rpm离心7min，得到第二上清液，将第二上清液在50℃水浴中氮气吹至近干后，用流动相定容，过0.45μm滤膜，得到样品液；3)将样品液上样至高效液相色谱仪，检测样品液中喹诺酮类含量；所述高效液相色谱仪色谱分析条件为：色谱柱为chromatoraxc18column4.6mm×150mm，5μm；流动相：体积比为85:15的0.05mol/l柠檬酸溶液和乙腈的混合液，三乙胺调ph至3.5；流速1.0ml/min；柱温30℃；进样量20μl；荧光检测器，激发波长280nm，发射波长360nm。实施例31)市场购买活黑鱼，将活黑鱼宰杀，去除内脏和硬组织，将黑鱼肉切碎，进行匀浆后制得鱼肉浆液，称取鱼肉浆液样品5g于离心管中，加入2ml的0.15mol/l的盐酸溶液，旋涡振荡3min，再加入20ml体积比为9:1乙腈和乙酸的混合液的提取液，混匀，5000rpm离心10min，得到第一上清液；2)向步骤1)的第一上清液中加入0.4g的n-丙基乙二胺，旋涡振荡3min后，5000rpm离心10min，得到第二上清液，将第二上清液在55℃水浴中氮气吹至近干后，用流动相定容，过0.45μm滤膜，得到样品液；3)将样品液上样至高效液相色谱仪，检测样品液中喹诺酮类含量；所述高效液相色谱仪色谱分析条件为：色谱柱为chromatoraxc18column4.6mm×150mm，5μm；流动相：体积比为85:15的0.05mol/l柠檬酸溶液和乙腈的混合液，三乙胺调ph至3.5；流速1.0ml/min；柱温30℃；进样量20μl；荧光检测器，激发波长280nm，发射波长360nm。用高效液相色谱仪测定实施例1-3鲤鱼、鲫鱼、黑鱼中的喹诺酮类中的氧氟沙星(ofl)、诺氟沙星(nor)、双氟沙星(dif)、沙拉沙星(sar)的含量，结果如下表1所述：表1表1可以看出，用高效液相色谱仪测定实施例1-3鲤鱼、鲫鱼、黑鱼中的喹诺酮类中的氧氟沙星(ofl)、诺氟沙星(nor)、双氟沙星(dif)、沙拉沙星(sar)的含量均为超标，符合国家标准，可以放心食用。配制氧氟沙星(ofl)、诺氟沙星(nor)、双氟沙星(dif)、沙拉沙星(sar)的标准溶液，检测本发明方法的加标回收率和rsd(％)结果见表2所示：表2项目氧氟沙星诺氟沙星双氟沙星沙拉沙星回收率(％)91.3105.787.6104.2rsd(％)1.82.02.31.4表2可以看出，用高效液相色谱仪测定氧氟沙星(ofl)、诺氟沙星(nor)、双氟沙星(dif)、沙拉沙星(sar)的加标回收率在87.6-105.7％之间，rsd≤2.3，说明本方法具有较高的准确度和重现性的优点。以上所述实施方式仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。当前第1页12