本发明涉及定量检测技术领域，特别涉及一种水果和蔬菜中阿维菌素残留量的测定方法。
背景技术：
阿维菌素(avermectin，简称avm)是从阿维链霉菌的发酵产物中分离出来的大环内酯类化合物，具有抗生素类杀虫、杀螨、杀线虫等生物活性，是一种安全、高效、广谱的新型大环内酯类抗生素，对动、植物的寄生线虫和节肢动物均有高效的驱杀作用。由于长期和大量地使用化学农药，其残留给人畜造成很大的危害。随着人们物质生活水平的提高，人的健康状况越来越受到重视，蔬菜与水果中农药的残留问题越来越引起人们的普遍关注。在我国，蔬菜与水果类食品农药残留测定方法标准尚显滞后，在已制定的50多种农药残留标准中，尚有20多种农药未提供检验方法，这对于蔬菜与水果类食品农药残留限量标准的实施极为不利，也对我国(尤其是加入wto后)的蔬菜与水果类食品进出口贸易带来负面影响。随着avm在我国的广泛使用，迫切需要建立蔬菜与水果中avm残留的分析方法。
技术实现要素：
为解决上述技术问题，本发明提供了一种水果和蔬菜中阿维菌素残留量的测定方法，解决了现有检测方法基线波动过大，无法准确对阿维菌素进行定量和定性的问题。
为达到上述目的，本发明的技术方案如下：一种水果和蔬菜中阿维菌素残留量的测定方法，包括以下步骤：
步骤一，提取；将20g样品置于50ml离心管，加入20ml乙腈，加涡旋充分混匀10分钟，加入1g氯化钠，1g二水柠檬酸三钠，0.5g柠檬酸二钠盐倍半水合物，然后再加入4g无水硫酸镁，涡旋混合5分钟，以4000r/min离心5分钟；
步骤二，净化；取步骤一离心后的上层乙腈清液，旋蒸浓缩并定容至1.0ml，加入装有40mgpsa和225mg无水硫酸镁的2ml离心管中，涡旋20s，掌上离心机离心5分钟，上清液过0.22um滤膜入进样小瓶中；
步骤三，对步骤二进样小瓶内的滤液进行hplc分析。
作为本发明的一种优选方案，步骤一中，加入无水硫酸镁后立即手动振摇。
作为本发明的一种优选方案，步骤三种色谱条件为：
色谱柱：dikmadiamonsilc18柱，
流动相：甲醇/水＝90/10，
流速：1.0ml/min，
进样量：20μl，
柱温：40c，
紫外检测波长：245nm。
作为本发明的一种优选方案，步骤四，绘制标准曲线：配制0mg/l、0.1mg/l、0.2mg/l、0.5mg/l、1.0mg/l、2.0mg/l、5.0mg/l标准梯度溶液，以峰面积为纵坐标，对应的阿维菌素的浓度为横坐标，进行一元线性回归峰面积-浓度绘制标准曲线。
作为本发明的一种优选方案，通过以下公式计算样品中阿维菌素含量:
r＝c×v/m；
r为样品中阿维菌素含量，单位为毫克每千克；
c为由标准曲线得出的样液中阿维菌素的浓度，单位为微克每毫升；
v为提取液体积，单位为毫升；
m为样品质量，单位为克。
通过上述技术方案，本发明技术方案的有益效果是：本发明准确可靠，快速灵敏，操作简便，可满足农药残留的检测要求，通过乙腈溶剂提取，psa与石墨化炭黑净化后，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量，基质效应低，能够准确对阿维菌素进行定性和定量测量，使用效果好。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例中所用设备和试剂：
1、仪器设备
高效液相色谱仪shimadzulc-2030(配紫外检测器)
离心机tgl-10b
涡旋混合器xw-80a
掌上离心机dragonlab型号d1008
2、试剂
乙腈色谱纯
丙酮色谱纯
甲醇色谱纯
无水硫酸镁分析纯
石墨化炭黑农残级
psa农残级
氯化钠分析纯
二水柠檬酸三钠分析纯
柠檬酸二钠盐倍半水合物分析纯
标准物质：阿维菌素；100mg/l于乙腈。
标准曲线的绘制：配制0mg/l、0.1mg/l、0.2mg/l、0.5mg/l、1.0mg/l、2.0mg/l、5.0mg/l标准梯度溶液，以峰面积为纵坐标，对应的阿维菌素的浓度为横坐标，进行一元线性回归峰面积-浓度绘制标准曲线。
具体的，使用高效液相色谱仪shimadzulc-2030进行检测：
色谱柱：dikmadiamonsilc18柱(4.6x250mm,5μm)，
流动相：甲醇/水＝90/10，
流速：1.0ml/min，
进样量：20μl，
柱温：40c，
紫外检测波长：245nm。
实施例1
对苹果中阿维菌素残留量的测定方法，包括以下步骤：
步骤一，提取；将苹果用组织捣碎机捣碎后，将20g苹果样品1置于50ml离心管，加入20ml乙腈，加涡旋充分混匀10分钟，加入1g氯化钠，1g二水柠檬酸三钠，0.5g柠檬酸二钠盐倍半水合物，然后再加入4g无水硫酸镁，涡旋混合5分钟，以4000r/min离心5分钟；
步骤二，净化；取步骤一离心后的上层乙腈清液，旋蒸浓缩并定容至1.0ml，加入装有40mgpsa和225mg无水硫酸镁的2ml离心管中，涡旋20s，掌上离心机离心5分钟，上清液过0.22um滤膜入进样小瓶中；
步骤三，对步骤二进样小瓶内的滤液进行hplc分析。
计算样品1中阿维菌素含量:
r＝c×v/m；
r为样品1中阿维菌素含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
c为由标准曲线得出的样液中阿维菌素的浓度，单位为微克每毫升(μg/ml)；
v为提取液体积，单位为毫升(ml)；
m为样品1质量，单位为克(g)。
实施例2
对青菜中阿维菌素残留量的测定方法，包括以下步骤：
步骤一，提取；将青菜用组织捣碎机捣碎后，将20g青菜样品2置于50ml离心管，加入20ml乙腈，加涡旋充分混匀10分钟，加入1g氯化钠，1g二水柠檬酸三钠，0.5g柠檬酸二钠盐倍半水合物，然后再加入4g无水硫酸镁，涡旋混合5分钟，以4000r/min离心5分钟；
步骤二，净化；取步骤一离心后的上层乙腈清液，旋蒸浓缩并定容至1.0ml，加入装有40mgpsa和225mg无水硫酸镁的2ml离心管中，涡旋20s，掌上离心机离心5分钟，上清液过0.22um滤膜入进样小瓶中；
步骤三，对步骤二进样小瓶内的滤液进行hplc分析。
计算样品2中阿维菌素含量:
r＝c×v/m；
r为样品2中阿维菌素含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
c为由标准曲线得出的样液中阿维菌素的浓度，单位为微克每毫升(μg/ml)；
v为提取液体积，单位为毫升(ml)；
m为样品2质量，单位为克(g)。
通过上述具体实施例，本发明的有益效果是：本发明准确可靠，快速灵敏，操作简便，可满足农药残留的检测要求，通过乙腈溶剂提取，psa与石墨化炭黑净化后，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量，基质效应低，能够准确对阿维菌素进行定性和定量测量，使用效果好。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。