本发明涉及医药检验领域，具体涉及一种免疫分析系统中抗生物素干扰的试剂、试剂盒及其方法。
背景技术：
免疫分析仪是医院临床应用最为频繁的仪器之一，临床医生常常依据免疫分析仪对临床病人体液相应生理指标的检测结果，来对患者疾病做出诊断。
生物素-抗生物素蛋白系统是广泛应用于免疫分析系统中的一种生物反应放大系统，该系统通过与示踪物或生物标记物牢固结合及多级放大效应，极大地提高免疫检测分析的灵敏度。生物素-抗生物素蛋白系统广泛的应用于各种免疫分析技术当中，如酶免疫、荧光免疫、放射免疫、胶体金及化学发光免疫检测及自动化分析。国内外厂家也在此基础上开发出一系列的免疫分析产品，如roche公司cobas系列、abbott公司architect系列、fenghua公司的talent系列和maccura公司is1200等。
生物素(biotin)为b族维生素之一，又称维生素h、维生素b7、辅酶r(coenzymer)，是一种水溶性维生素，广泛分布于动物及植物的每一个活细胞中，是一种维持人体自然生长、发育和人体技能健康必要的营养物质。一般人体内不缺乏生物素，在人正常血液中，生物素含量为＜0.1～0.8ng/ml。(paulgrimseyetal.populationpharmacokineticsofexogenousbiotinandtherelationshipbetweenbiotinserumlevelsandinvitroimmunoassayinterference.internationaljournalofpharmacokineticsvol.2,no.4)。但是，生物素作为保健品被广泛应用于维护毛发与皮肤健康方面，如防止落发和少年白发；此外生物素还可用于生物素缺乏症、也可用于脂溢性皮炎和婴儿脱尿性红皮病等。因此生物素现也用作外源补充剂，正常服用微生物制品可摄入生物素约30～60μg。口服生物素可迅速从胃和肠道吸收，血液中生物素有80％是以游离形式存在，因此，若待测样本中存在游离的内源性生物素，就会干扰生物素-抗生物素蛋白免疫分析系统中抗生物素蛋白捕获目标的能力，从而造成检测结果的假性升高或者假性降低，影响临床判断。研究发现：待测样本用生物素-抗生物素蛋白免疫分析系统检测，内源性生物素会干扰常规检测项目(激素、心肌标志物、肿瘤标志物)的检测结果，如：游离甲状腺原氨酸、甲状腺球蛋白抗体、促甲状腺激素、黄体生成素、泌乳素、尿液人绒毛膜促性腺激素、肌钙蛋白、癌胚抗原等。
针对上述问题，现有的消除内源性生物素对生物素-抗生物素蛋白免疫分析系统干扰对策如下：患者暂停生物素的服用、将免疫分析系统更换为非生物素-抗生素蛋白系统、样本稀释后重测、中和法(使用抗生物素蛋白除去样本中生物素)等。上述方法首先需要鉴别样本是否受到生物素干扰；其次需要对样本进行预处理，因此增加了许多额外的工作量，耗时费力！并且均无法在现有试剂盒的基础上从根本解决样本中生物素干扰问题。
技术实现要素：
为了解决上述问题，本发明旨在在生物素-抗生物素蛋白免疫分析系统中，不影响正常检验测定结果的前提下，提供可直接解决样本中内源生物素干扰，从而导致检测结果异常的试剂、试剂盒及其方法。
具体而言，在第一方面，本发明提供了一种免疫分析系统中抗生物素干扰的试剂，该试剂包括生物素或其衍生物。
生物素被理解为天然存在的纯化的化合物(cas：58-85-5)或重合成生物素。生物素衍生物被理解为修饰的生物素分子；更具体地，生物素衍生物是指生物素的氢原子或原子团被其他原子或原子团取代的一类化合物，例如，生物素酯。
在一些实施方式中，所述试剂中生物素或生物素衍生物的浓度为50～100ug/ml。
在另一些实施方式中，所述试剂中还包括可以溶解生物素或生物素衍生物的溶剂；优选地，所述溶剂为不影响免疫分析检测结果的溶剂；更优选地，所述溶剂为二甲基亚枫。
因为生物素微溶于水和乙醇，不溶于其他一般有机溶剂，因此，使用二甲基亚枫既可以溶解生物素或生物素衍生物，又不影响免疫分析检测结果，且该溶剂毒性较小。
在另一些实施方式中，所述免疫分析系统为使用生物素-抗生物素蛋白系统的免疫分析系统。
在第二方面，本发明还提供了一种免疫分析用试剂盒，该试剂盒包括上述抗生物素干扰的试剂。
在一些实施方式中，所述试剂盒用于检测样本中的大分子物质和小分子物质，所述小分子物质为分子量小于1000da的天然化合物。
在一些优选实施方式中，所述试剂盒优选用于检测分子量小于1000da的小分子化合物。
在一些优选实施方式中，所述小分子化合物包括雌二醇、睾酮、25羟基～维生素d、孕酮、皮质醇和甲功标志物等。小分子物质的免疫检测通常为竞争法免疫检测。
在一些实施方式中，所述试剂盒为酶免疫分析试剂盒、荧光免疫分析试剂盒、放射免疫分析试剂盒、胶体金免疫分析试剂盒、化学发光免疫分析试剂盒或自动化免疫分析试剂盒。优选地，所述试剂盒为酶免疫分析试剂盒或化学发光免疫分析试剂盒。更优选地，所述试剂盒为化学发光免疫分析试剂盒。
在第三方面，生物素或生物素衍生物在免疫分析系统中抗生物素干扰的应用。
在一些实施方式中，所述生物素或生物素衍生物优选用于使用生物素-抗生物素蛋白系统的免疫分析。
优选地，所述免疫分析为酶联免疫分析、荧光免疫分析、放射免疫分析、胶体金免疫分析或化学发光免疫分析；更优选地，所述免疫分析为化学发光免疫分析。
在第四方面，一种免疫分析系统中抗生物素干扰的方法，该方法具体如下：
在样本内的被检物质与，(i)用于捕获的特异性结合物质和(ii)被可检测标记物标记的特异性结合物质同时接触时；将生物素或生物素衍生物预先添加至含有(i)用于捕获的特异性结合物质的溶液，和/或含有(ii)被可检测标记物标记的特异性结合物质的溶液中；或者，
在样本内的被检物质与，(i)用于捕获的特异性结合物质和(ii)被可检测标记物标记的特异性结合物质同时接触时；将生物素或生物素衍生物预先添加至含有(i)用于捕获的特异性结合物质的溶液、含有(ii)被可检测标记物标记的特异性结合物质的溶液、第三溶液中的一种或多种中；
所述第三溶液为，在样本内被检物质与(i)用于捕获的特异性结合物质和(ii)被可检测标记物标记的特异性结合物质同时接触时，一同加入的溶液。
上述方法的具体实现方式可举例：一种试剂盒，其包括含有(i)用于捕获的特异性结合物质的溶液r1、含有(ii)被可检测标记物标记的特异性结合物质的溶液r2和溶液r3；
当样本与，溶液r1、溶液r2、溶液r3同时或分次添加至反应容器中时，过程中不经过洗涤；即在样本内的被检物质与，(i)用于捕获的特异性结合物质和(ii)被可检测标记物标记的特异性结合物质同时接触时，可以将生物素或生物素衍生物预先添加至溶液r1、溶液r2、溶液r3中的一种或多种；
当样本先与溶液r1混合反应一段时间，经洗涤后，再加入r2和r3进行混合反应时，可以将生物素或生物素衍生物预先添加至溶液r2和/或溶液r3中。
上述举例是解释说明目的，而不是意欲限制本发明的范围。
在一些实施方式中，所述免疫分析为使用生物素-抗生物素蛋白系统的免疫分析。
在另一些实施方式中，所述生物素或生物素衍生物的添加量按照其在各溶液中的终浓度为0.3ng/ml～5mg/ml添加。
本发明中，只有在生物素或生物素衍生物的添加量为各溶液中终浓度的0.3ng/ml～5mg/ml时，才能达到更好的抗生物素干扰的效果。
在另一些优选实施方式中，所述生物素或生物素衍生物的添加量为各溶液体积的00001％～1％(v/v)。
在另一种实施方式中，所述用于捕获的特异性结合物质为亲和素或链霉亲和素包被的固相载体；所述可检测的标记物为酶、荧光染料、放射性标记物、同位素标记物或发光物质。
下面将详细地解释本发明。
在免疫分析试剂分析样本中被检物质时，样本中的内源生物素往往会导致检测结果不准确。本发明通过将生物素或生物素衍生物应用在免疫分析试剂中，出人意料地发现，生物素或生物素衍生物可以避免免疫分析过程中内源生物素的干扰，特别是在使用生物素-抗生物素蛋白系统时，可以显著避免内源生物素干扰。因此，本发明还涉及避免使用生物素-抗生物素蛋白系统的测定中抗内源生物素干扰的试剂的应用。根据本发明，生物素或生物素衍生物以可溶形式使用。
本发明的试剂、试剂盒及其方法可以在不影响检测结果准确性的前提下，具有抗样本中内源生物素干扰和提高检测结果灵敏度的特点，且试剂的抗生物素干扰的能力可以通过添加该试剂的量进行调节；本发明的试剂原料易得、成本低；试剂盒适于工业化生产，抗干扰效果好，检测灵敏度高；本发明的抗干扰方法简单，易操作。
具体实施方式
在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
定义
对于本文数值范围的描述，明确涵盖了该范围中具有同样精度的各个中间值。例如，对于范围6～9，除了6和9之外还涵盖数字7和8，对于范围6.0～7.0，明确涵盖数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0。
本文中使用的术语“免疫分析”为使用抗原和抗体特异性结合的原理进行的待测物质的分析。具体地，免疫分析包括酶联免疫分析法、荧光免疫分析法、化学发光免疫分析法。
本文中涉及的被检物质的检测方法包括双抗体夹心法、双抗原夹心法、间接法。
本文中使用的术语“待测物质”，例如，可举出抗体、抗原、核酸、生物活性物质、细菌、病毒、肽、治疗药剂等，但不特别限定。再者，抗体也可成为抗原。作为抗体，可举出对抗原的抗体、对抗体的抗体等，但不特别限定。作为抗原，可举出核酸、生理活性物质、细菌、病毒、肽等，但不特别限定。作为核酸，例如，可举出编码疾病成因基因等的核酸、编码细菌或病毒的基因的核酸等，但不特别限定。作为生理活性物质，例如，可举出细胞生长因子、分化诱导因子、细胞粘接因子、酶、细胞因子、激素、糖链等，但不特别限定。
本文所用术语“样品”，表示含有被检测物质的任何组合物，样品来源于生物来源(“生物样品”)，例如组织(例如活组织检查样品)、提取物或培养物和生物或生理流体等。例如，样品一般包括体液，如血液、血清、或血浆，唾液，尿，或其它体液。
本文中术语“特异性结合”、“特异性”、“特异结合”，表征了作为配对具有相互选择性反应的能力的两种分子(例如抗原和抗体)之间的相互作用。词语“与……特异性结合”例如是指抗体与其靶抗原特异性结合、而与其它实体不特异性结合的能力。术语“特异性结合”是指对靶分子/序列的结合优先性(例如亲和性)是非特异性靶分子(缺乏特异性识别位点的随机生成的分子)的至少2倍，更优选至少5倍，最优选至少10倍或20倍。此处的特异性结合包括但不限于抗原抗体的结合、亲和素生物素的结合。
本文中所述固相是指不可溶或能够通过随后的反应变得不可溶的任何材料。可以针对其固有能力选择固相，以吸引和固定捕获剂。作为选择，固相可以固定有交联剂，所述交联剂具有吸引和固定捕获剂的能力，其能够使捕获剂间接集合至固相材料。固相可以例如塑料、衍生塑料、磁性或非磁性金属、玻璃或硅，包括但不限于，例如试管、微量滴定孔、板、珠、微粒、芯片和本领域普通技术人员已知的其它构造。
本文所述“可检测标记物”包括通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、电、光学或化学手段可检测的任何组成。本发明中有用的标记物包括磁珠(例如dynabeadstm)、荧光染料(例如荧光素、德克萨斯红、罗丹明和绿色荧光蛋白等，参见例如molecularprobes,eugene,oreg.,usa)；化学发光化合物，例如吖啶(例如吖啶-9-羧酰胺)、啡啶(phenanthridinium)、二氧杂环丁烷(dioxetanes)和鲁米诺等；放射性标记物(例如3h、125i、35s、14c或32p)；催化剂，例如酶(例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和elisa中常用的其它酶)；和比色标记物，例如胶体金(例如粒径为40nm～80nm的金颗粒高效地散射绿光)或有色玻璃或塑料(例如聚苯乙烯、聚丙烯、胶乳等)珠子。
在本说明书中，生物素-抗生物素蛋白系统中，抗生物素蛋白包括链霉亲和素(streptavidin)、亲和素(avidin)和neutravidin蛋白，每个蛋白都能够以高度的亲和力和特异性结合四个生物素分子。其中最常使用的是链霉亲和素，它未经糖基化且具有很低的非特异性结合水平。优选地，所述的生物素-抗生物素蛋白系统包括了生物素-亲和素系统(biotin～avidin～system，bas)、生物素-链霉亲和素系统。更优选地，所述的生物素-抗生物素蛋白系统为生物素-链霉亲和素系统。
亲和素(avidin)，是一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白，分子量为68kda，等电点pi为10.5；耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用。而链霉亲和素(streptavidin下称sa)是与亲和素(avidin下称av)有相似生物学特性的一种蛋白质，是streptomycesavidinii菌的分泌物，其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似，等电点6.0，非特异性结合远比亲和素低。
本发明公开内容还提供检验测试样本的测试试剂盒。试剂盒包括用于实施根据本申请公开内容的一种或多种免疫检验的一种或多种试剂。试剂盒通常包括具有容纳所述试剂的一个或多个容器的包装作为一种或多种单独的组分，或可选的是，作为其中所述试剂可相容的混合物。所述试剂盒还包括其它材料，从用户立场来看它们可能是需要的，例如缓冲剂、稀释液、标准品和/或用于样品处理、洗涤或执行任何其它检验步骤的任何其它材料。
为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合实施例对本发明作进一步说明，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都应当属于本申请保护的范围。
本文免疫检测试剂盒优选以检测分子量小于1000da的小分子检测试剂盒为例。
以雌二醇的化学发光检测试剂盒为例，该试剂盒包括试剂r1、试剂r2和试剂r3；所述试剂r1中包含由亲和素或链霉亲和素包被的固相载体；试剂r2包括可检测标记物标记的特异性结合配体；试剂r3包括生物素标记的雌二醇。
该雌二醇的化学发光检测步骤：先加入样本，第一步加入生物素化雌二醇(试剂r3)和吖啶酯标记的抗雌二醇单克隆抗体(试剂r2)，将样本与两个组份一同孵育,雌二醇释放剂使样本中的雌二醇释放，使其与生物素化雌二醇竞争性地与吖啶酯标记的抗体结合；第二步加入链霉亲和素磁微粒(试剂r1)，孵育，然后与链霉亲和素磁微粒形成免疫复合物，洗涤，将未结合的样本试剂去除。加入发光底物，检测相对发光值(rlu)，本文中检测用设备为迈克生物i3000全自动化学发光仪。
上述样本与试剂r2、试剂r3按体积比为1：1：1混合，具体地，所述样本体积为50μl，并孵育10min后，再添加与样本相同体积的试剂r1继续孵育10min时间；洗涤后，加入发光底物，检测相对发光值(rlu)。更具体地，
雌二醇的化学发光检测试剂盒具体成分如下表：
本发明中，所述缓冲盐为磷酸缓冲体系、tris缓冲体系、mes缓冲体系或hepes缓冲体系；所述无机盐为氯化钠；所述稳定剂优选蛋白类物质和/或糖类物质，所述蛋白类物质选自bsa、酪蛋白、牛血清、羊血清中的一种或多种；所述糖类物质选自甘露醇、海藻糖、葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖或蔗糖；所述表面活性剂为非离子表面活性剂；所述防腐剂为proclin系列防腐剂、krovin系列防腐剂、kathon或叠氮钠。
实验材料：
以下实施例1～4和对照实施例1～2均使用的上述方法和试剂盒进行。
本文中用到的雌二醇测定试剂盒的具体配方如下：
首先，用生物素和二甲基亚枫配制成浓度为50ug/ml的溶液a。
一、生物素的添加方式的
实施例1：
一种雌二醇测定试剂盒，其包含3种独立而不交叉的三种试剂(r1、r2和r3)。向试剂r1中添加溶液a，使试剂中的生物素终浓度为50ng/ml。
实施例2：
一种的雌二醇测定试剂盒，其包含3种独立而不交叉的三种试剂(r1、r2和r3)。向试剂r2中添加溶液a，使试剂中的生物素终浓度为50ng/ml。
实施例3：
一种的雌二醇测定试剂盒，其包含3种独立而不交叉的三种试剂(r1、r2和r3)。向试剂r3中添加溶液a，使试剂中的生物素终浓度为50ng/ml。
实施例4：
一种雌二醇测定试剂盒，其包含3种独立而不交叉的三种试剂(r1、r2和r3)。向试剂r2中添加溶液a，使试剂中的生物素终浓度为30ng/ml；向试剂r3中添加溶液a，使试剂中的生物素终浓度为30ng/ml。
对照实施例1：
一种雌二醇测定试剂盒，其包含3种独立而不交叉的三种试剂(r1、r2和r3)。向试剂r2中添加溶液a，使试剂中的生物素终浓度为25ng/ml。
对照实施例2：
一种雌二醇测定试剂盒，其包含3种独立而不交叉的三种试剂(r1、r2和r3)。向试剂r2中添加溶液a，使试剂中的生物素终浓度为100ng/ml。
将不做任何添加的雌二醇测定试剂盒作为对照，同实施例1～4和对照实施例1～2的试剂盒进行如下实验，实验数据均是测量三次后的数值平均值：
一、主校准品信号值测定实验
利用校准品进行不同试剂盒的校准试验，检测各试剂盒得到的校准曲线，具体如表1所示；并且计算各校准点的曲线斜率，曲线斜率的计算方法是使用相近的两个校准点吸光值进行除法运算，具体如表2所示：
表1为不同雌二醇测定试剂盒的主校准品信号值
表2为不同雌二醇测定试剂盒的主校准品曲线斜率
从表1和表2中可以看出，在试剂盒中任意一个或多个试剂中添加生物素均可以提高整体试剂盒主校准品的测定信号值，且不改变试剂盒主校准品的曲线曲率，从而提高灵敏度。
因此，猜测在进行小分子物质检测时，可能由于样本中的内源生物素会使信号值升高，从而导致得到的结果偏低；而在检测试剂中添加生物素后，会使各校准点的信号值上升1.6倍左后，到一定高的信号值达到巅峰而不在上升；所以试剂中添加一种量的生物素会通过提高测试结果的信号值从而掩盖样本中生物素对测试结果的干扰。
二、质控品浓度测定实验
分别测定复合质控品1、2、3的雌二醇测定值，然后计算添加生物素与不添加生物素的雌二醇试剂盒的检测结果相对偏差。具体如表3所示。
复合质控品为用于多种检测项目的质控品。本文中的复合质控品为迈克生物生产的含蛋白的缓冲物，不同质控品包括不同浓度的检测物质比如雌二醇、皮质醇。
表3为不同雌二醇测定试剂盒质控品的检测结果
从质控品的检测结果可以看出，在试剂盒中的一种或多种检测试剂中添加生物素，其检测结果偏差＜4％，因此认为均不影响正常样本的测定结果。
三、抗生物素抗扰能力的测试
准备一份无明显溶血、脂血的血清样本，平均分为4份，每份1ml。向上述四份样本中添加生物素，用以模拟含内源生物素的临床样本(血液样本)，使各模拟样本中内源生物素的浓度分别为0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml和30ng/ml。然后利用不同的雌二醇测定试剂盒对该四份模拟的血液样本进行雌二醇浓度的检测，具体检测结果如表4所示。
表4为不同雌二醇测定试剂盒对临床模拟样本的雌二醇检测结果
临床模拟样本中的内源生物素含量为0ng/ml时，将生物素添加至试剂盒中的一个或多个检测试剂中，检测得到的被检物质浓度均有小幅度上涨，但是整体数据偏差在10％以内，因此认为对临床样本的检测结果没有影响。
当模拟样本中的内源生物素含量上升时，将生物素添加至试剂盒中的一个或多个检测试剂中，均能有效地消除内源生物素对检测结果的干扰。并且从对照实施例1和对照实施例2可以看出，在雌二醇的检测试剂盒中，当添加的溶液a过少或过多时，虽然可以具有消除干扰的效果，但是效果并不是最佳。也因此，生物素或生物素衍生物的添加量需要根据项目的生物学特征、反应原理等进行调试才能在具体检测项目上得到最好的抗干扰效果。
下面以皮质醇测定试剂盒为例，该皮质醇测定试剂盒的具体成分如下表：
该皮质醇的材料如下：
该皮质醇试剂盒的检测原理为磁微粒化学发光检测法，具体步骤如下：先加入样本，第一步加入生物素化皮质醇(试剂r3)和吖啶酯标记的抗皮质醇单克隆抗体(试剂r2)，将样本与两个组份一同孵育，皮质醇释放剂使样本中的皮质醇释放，使其与生物素化皮质醇竞争性地与吖啶酯标记的抗体结合；第二步加入链霉亲和素磁微粒(试剂1)，孵育，然后与链霉亲和素磁微粒形成免疫复合物，洗涤，将未结合的样本试剂去除。加入发光底物，检测相对发光值(rlu)，本文中检测用设备为迈克生物i3000全自动化学发光仪。
上述样本与试剂r2、试剂r3按体积比为1：1：1混合，具体地，所述样本体积为50μl，并孵育10min后，再添加与样本相同体积的试剂r1继续孵育10min时间；洗涤后，加入发光底物，检测相对发光值(rlu)。
以下实施例5和对照实施例3～4均使用的上述方法和试剂盒进行。
本文中用到的皮质醇而具体配方如下：
首先，用生物素和二甲基亚枫配制浓度为100μg/ml的溶液b。
实施例5
一种生物素-链霉亲和素系统的皮质醇免疫测定试剂盒，其包含3中独立而不交叉的三种试剂(r1、r2和r3)。向试剂r2中添加溶液b，使试剂r2中的生物素终浓度为100ng/ml。
对照实施例3
一种生物素-链霉亲和素系统的皮质醇测定试剂盒，其包含3种独立而不交叉的三种试剂(r1、r2和r3)。向试剂r1中添加溶液b，使试剂r1中的生物素终浓度为70ng/ml。
对照实施例4
一种生物素-链霉亲和素系统的皮质醇测定试剂盒，其包含3种独立而不交叉的三种试剂(r1、r2和r3)。向试剂r1中添加溶液b，使试剂r1中的生物素终浓度为150ng/ml。
将不做任何添加的皮质醇测定试剂盒作为对照，同时与实施例5、对照实施例3和4进行如下实验。
一、主校准品信号值测定影响实验
利用校准品进行不同试剂盒的校准试验，检测各试剂盒得到的校准曲线，具体如表5所示；并且计算各校准点的曲线斜率，曲线斜率的计算方法是使用相近的两个校准点吸光值进行除法运算，具体如表6所示：
表5为不同皮质醇测定试剂盒的主校准品信号值
表6为不同皮质醇测定试剂盒的主校准品曲线斜率
从表5和表6可以看出，在皮质醇测定试剂盒中的不同试剂中添加生物素，均可以提高试剂盒主校准品的测定信号值，从而提高灵敏度。
二、质控品浓度测定实验
分别测定复合质控品1、2、3(该复合质控品同上文所述)的皮质醇测定值，然后计算添加生物素与不添加生物素的皮质醇试剂盒的检测结果相对偏差。具体如表7所示。
表7为不同皮质醇测定试剂盒的质控品测定结果
从表7中可以看出，在皮质醇的测定试剂盒中的不同试剂中添加生物素均其质控品检测结果与未添加的对照试剂盒检测结果比较均不超过±5％，因此认为不影响正常样本的测定结果。
三、抗生物素抗扰能力的测试
准备一份无明显溶血、脂血的血清样本，平均分为4份，每份1ml。向上述四份样本中添加生物素，用以模拟含内源生物素的临床样本(血液样本)，使各模拟样本中内源生物素的浓度分别为0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml和30ng/ml。然后利用不同的皮质醇测定试剂盒对该四份模拟的血液样本进行皮质醇浓度的检测，具体检测结果如表8所示。
表8为不同皮质醇测定试剂盒对临床模拟样本的皮质醇检测结果
从表8可以看出，在皮质醇测定试剂盒中的不同试剂中添加生物素，均可以有效的消除样本中生物素对检测结果的干扰，并且添加的生物素量过多或过少，都不能达到最佳的消除干扰的效果。结合雌二醇试剂盒的相应检测结果可以进一步确认。生物素的添加浓度需根据各项目的生物学特诊、反应原理等进行适当调整。
应该理解到披露的本发明不仅仅限于描述的特定的方法、方案和物质，因为这些均可变化。还应理解这里所用的术语仅仅是为了描述特定的实施方式方案的目的，而不是意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅受限于所附的权利要求。
本领域的技术人员还将认识到，或者能够确认使用不超过常规实验，在本文中所述的本发明的具体的实施方案的许多等价物。这些等价物也包含在所附的权利要求中。