一种检测单纯疱疹病毒1+2型IgM抗体的化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法与流程

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。

背景技术：

单纯疱疹病毒i和ii型(hsv-1和hsv-2)是疱疹病毒家族的两个成员。形态上与疱疹病毒科的其它成员相似，具有衣壳、dna核。普通人群中hsv-1感染率约为70-80％，hsv-2感染率约为17-25％。hsv-1和hsv-2通过血清阴性个体和分泌病毒个体之间的密切接触进行传播。hsv-1和hsv-2感染的临床表现较多样，如粘膜和皮肤损害以及眼部、内脏和中枢神经系统(cns)的疾病。免疫抑制的病人感染hsv可表现为严重广泛的损害。尽管hsv-1和hsv-2常通过不同的途径传播并且感染机体的不同部位，但这两种病毒之间流行病学特征和临床表现仍有许多相同之处。通常hsv-1主要引起黏膜感染，如眼、口腔及嘴角黏膜处的感染，它也是引起成人严重散发性脑炎的重要原因之一。hsv-2主要引起生殖器部位的皮肤及粘膜的损伤：生殖器疱疹现已常见的性接触传播疾病之一。但hsv病毒的种类与感染部位的关系并不是绝对的。一旦发生hsv病毒感染，病毒将潜伏在人体的感官神经中枢，多种刺激都会导致病毒周期性复发，可能会带来临床损伤。免疫抑制性病人更容易出现反复感染，这说明血清抗体及病毒特异性细胞介质免疫有助于疾病康复。

感染生殖道疱疹的孕妇流产或早产的概率是正常孕妇的2～3倍。孕妇生殖道病毒活跃可导致生产时婴儿与感染的生殖道接触而引起严重的hsv病毒感染，若孕妇生产时感染了hsv，40％～60％的婴儿也会被感染，如果不及时治疗，会引发婴儿的高发病率和高死亡率。35％的儿童到5岁时具有hsv-1病毒的抗体，80％的成人到25岁时特异性抗hsv-1病毒的抗体。

由于hsv-1和hsv-2具有相同的抗原决定簇，这两种病毒的抗体可能会发生交叉反应。尽管体内有抗病毒抗体，这两种类型的病毒也会经常复发。快速准确地诊断hsv感染有助于及早采用抗病毒治疗，减少感染传播。感染hsv后，人体免疫系统会马上合成特异性抗hsvigm抗体，一周后即可被检测到。

一般hsvigm抗体的存在表示近期感染或复发感染。原发性感染病人2～3周后，体内一般会出现特异性igg抗体，但几个月后其滴度会下降，而复发感染的病人滴度不会增高。通过对igg的检测可评估患者的免疫状态并且提供hsv既往感染的血清学证据。结合hsv-1或hsv-2抗体血清转化的结果可帮助诊断近期(原发性或继发性)hsv感染。

目前常用的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的方法有酶联免疫分析法(elisa)、化学发光酶免疫分析法和胶体金法，但elisa具有操作时间长、检测范围窄、检测时间长、重复性差等；化学发光酶免疫分析法易受酶活性影响；而金标方法灵敏度较低，只能定性，不能定量。

技术实现要素：

本发明要解决现有技术中的技术问题，提供一种检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：

本发明提供一种检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒，包括：r1试剂、r2试剂和r3试剂；

所述r1试剂为含有单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠和人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠的缓冲液；

所述r2试剂为含有化学发光标记物标记的抗人igm抗体的缓冲液；

所述r3试剂为含有阻断剂和人igg吸附剂的缓冲液。

在上述技术方案中，所述r1试剂中的单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠或人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠中，单纯疱疹病毒1型抗原或人单纯疱疹病毒2型抗原与包被磁珠浓度质量比为0.5％～5％；磁珠的粒径是1.0～3.0μm。

在上述技术方案中，所述r1试剂中包被用磁珠为带有tosyl官能团的磁颗粒，包被磁珠所用的抗原分别为单纯疱疹病毒1型抗原和人单纯疱疹病毒2型抗原，试剂质量比为0.01～1％。

在上述技术方案中，所述r2试剂中抗人igm抗体与化学发光标记物的标记比例是1:3～1:10。

在上述技术方案中，所述r2试剂中抗人igm抗体为鼠抗人igm抗体或羊抗人igm抗体。

在上述技术方案中，所述r2试剂中化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。

在上述技术方案中，所述吖啶酯的结构式如下：

在上述技术方案中，所述r3试剂中阻断剂为非特异性小鼠igg抗体或羊igg抗体；所述人igg吸附剂为羊抗人igg抗体或兔抗人igg抗体。

在上述技术方案中，所述r1试剂的缓冲液为25mmtris、0.05％吐温-20、0.05％proclin300和0.02％迭氮钠，ph7.2的缓冲液，磁珠总浓度为0.01％～1％；所述r2试剂的缓冲液为100～400mmpb、bistris丙烷或者hepes，0.05％～0.1％pc300、0.01％～0.03％迭氮钠、或者0.05％～0.1％吐温-20，1％～3％的bsa，0.5％-2％bgg，ph6.0～7.0，化学发光标记物标记的抗人igm抗体的终浓度为0.1～1.0μg/ml；所述r3试剂的缓冲液为100～400mmpb、bistris丙烷、或者hepes，0.05％～0.1％pc300、0.01％～0.03％迭氮钠、或者0.05％～0.1％吐温-20，1％～3％的bsa，0.5％～2％bgg，ph7.0～8.0，阻断剂终浓度为0.1～1.0μg/ml，人igg吸附剂终浓度为50～200μg/ml。

本发明提供一种检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、r1试剂的制备

取磁颗粒，加入自带清洗液清洗后，分别加入单纯疱疹病毒1型抗原、单纯疱疹病毒2型抗原后，室温下混悬4-12小时，磁分离，去上清，用缓冲液清洗后加入bsa进行封闭，混悬4-6小时，磁分离，清洗后，分别得到单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠或人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠；用25mmtris、0.05％吐温-20、0.05％proclin300和0.02％迭氮钠，ph7.2的缓冲液将单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠和人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠按照混合比例为1:1混合配成磁珠总浓度为0.01％～1％的固相试剂，即为r1试剂；

步骤2、r2试剂的制备

用超滤离心管将抗人igm抗体缓冲液置换为pbs，加入化学发光标记物dmf溶液，充分混匀，室温放置2-4小时后，akta蛋白纯化仪纯化标记抗人igm抗体；将收集到的化学发光标记物标记的抗人igm抗体放置于2～8℃保存，使用时将纯化后的化学发光标记物标记的抗人igm抗体浓溶液用100～400mmpb、bistris丙烷或者hepes，0.05％～0.1％pc300、0.01％～0.03％迭氮钠、或者0.05％～0.1％吐温-20，1％～3％的bsa，0.5％-2％bgg，ph6.0～7.0的缓冲液稀释化学发光标记物标记的抗人igm抗体的终浓度为0.1～1.0μg/ml，即为r2试剂；

步骤3、r3试剂的制备

使用缓冲液配制含有阻断剂和人igg吸附剂的缓冲液，即为r3试剂；

缓冲液为100～400mmpb、bistris丙烷、或者hepes，0.05％～0.1％pc300、0.01％～0.03％迭氮钠、或者0.05％～0.1％吐温-20，1％～3％的bsa，0.5％～2％bgg，ph7.0～8.0，阻断剂终浓度为0.1～1.0μg/ml，人igg吸附剂终浓度为50～200ug/ml。

本发明的试剂盒测定原理是间接法。样本与r3溶液(50μl)和单纯疱疹病毒1型抗原和单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁颗粒的r1溶液(40μl)共同孵育18min，清洗5min，再与化学发光标记物标记抗人igm抗体溶液(50μl)反应，形成单纯疱疹病毒包被的磁颗粒-人hsv-1+2型igm抗体-吖啶酯标记的抗人igm抗体复合物，通过磁分离器分离免疫复合物，洗掉游离的成分。通过酸碱激发液激发化学发光标记物发光，记录相对发光强度(rlu)，仪器(比较由样本反应产物获得的化学发光信号值和先前定标获得的cutoff值)自动计算检测结果。

本发明的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒用于hsv-1+2型igm抗体检测时，利用全自动化学发光免疫分析仪对大量样本进行检测，通过统计学方法计算出公式，内置于射频卡；接着测试两点校准，对主校准曲线进行校准；接着测试质控品，质控品测试结果落在靶值范围内认为校准合格。测试实际临床样本，根据样本发光值计算样本浓度；样本的结果以有反应性或无反应性以及cutoff指数(样本信号值/cutoff值，s/co)表示，最后对单纯疱疹病毒1+2型igm抗体检测试剂盒进行性能的评价。

本发明的有益效果是：

1、选择吖啶酯等为化学发光免疫分析系统的标记材料，该材料有激发态回到基态时产生的能量跃迁为直接化学发光，降低了本底空白，提高了灵敏度；不需要酶的参与，节约时间及成本。采用磁微粒作为固相载体，其比表面积大，进一步提高了检测的灵敏度。

2、单纯疱疹病毒1+2型igm抗体化学发光免疫检测试剂盒为全自动的测量样本，并直接给出数值，减少人为操作误差，并且实现无人值守。如可直接用于全自动生化分析仪上，无需大型仪器设备配合，成本较低，且无放射性污染，可大规模的开展和推广。

3、试剂与仪器组成封闭系统，系统误差小。化学发光免疫检测试剂盒在准确度方面可以替代市面上的elisa法等试剂盒，为客户提供更加快速、准确的测量数据。

4、这种单纯疱疹病毒1+2型igm抗体检测试剂盒中使用的校准品和质控品，均由其他商品化单纯疱疹病毒1+2型igm抗体检测试剂盒(索灵诊断(意大利)有限公司生产的单纯疱疹病毒1+2型igm抗体检测试剂盒)进行赋值保证了测试结果的准确度。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。

图1为本发明的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒的制备流程图。

具体实施方式

本发明提供一种检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒，包括：r1试剂、r2试剂和r3试剂；所述r1试剂为含有单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠和人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠的缓冲液；所述r2试剂为含有化学发光标记物标记的抗人igm抗体的缓冲液；所述r3试剂为含有阻断剂和人igg吸附剂的缓冲液。

所述r1试剂中的单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠或人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠中，单纯疱疹病毒1型抗原或人单纯疱疹病毒2型抗原与包被磁珠浓度质量比为0.5％～5％；所述磁珠的粒径是1.0～3.0μm；包被用磁珠为带有tosyl官能团的磁颗粒，包被磁珠所用的抗原分别为单纯疱疹病毒1型抗原和人单纯疱疹病毒2型抗原，试剂质量比为0.01～1％；缓冲液为25mmtris、0.05％吐温-20、0.05％proclin300和0.02％迭氮钠，ph7.2的缓冲液，磁珠总浓度为0.01％～1％。

所述r2试剂中抗人igm抗体与化学发光标记物的标记比例是1:3～1:10；抗人igm抗体为鼠抗人igm抗体或羊抗人igm抗体；化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌，优选为吖啶酯，进一步优选结构式如下的吖啶酯；所述r2试剂的缓冲液为100～400mmpb、bistris丙烷或者hepes，0.05％～0.1％pc300、0.01％～0.03％迭氮钠、或者0.05％～0.1％吐温-20，1％～3％的bsa，0.5％-2％bgg，ph6.0～7.0，化学发光标记物标记的抗人igm抗体的终浓度为0.1～1.0μg/ml；

所述r3试剂中阻断剂为非特异性小鼠igg抗体或羊igg抗体；人igg吸附剂为羊抗人igg抗体或兔抗人igg抗体，缓冲液为100～400mmpb、bistris丙烷、或者hepes，0.05％～0.1％pc300、0.01％～0.03％迭氮钠、或者0.05％～0.1％吐温-20，1％～3％的bsa，0.5％～2％bgg，ph7.0～8.0，阻断剂终浓度为0.1～1.0μg/ml，人igg吸附剂终浓度为50～200ug/ml。

优选地，上述的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒，还包括2.0s/co和0.0s/co的校准品。

优选地，上述的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒，还包括2.0s/co和0.5s/co的质控品。

优选地，上述的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒，还包括化学发光底物液a液和b液，其中，a液为过氧化氢和硝酸溶液，b液为氢氧化钠溶液。

优选地，上述的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒，还包括清洗液，所述清洗液为pb缓冲液。

本发明的试剂盒测定原理是间接法。样本与r3溶液(50μl)和单纯疱疹病毒1型抗原和单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁颗粒的r1溶液(40μl)共同孵育18min，清洗5min，再与化学发光标记物标记抗人igm抗体溶液(50μl)反应，形成单纯疱疹病毒包被的磁颗粒-人hsv-1+2型igm抗体-吖啶酯标记的抗人igm抗体复合物，通过磁分离器分离免疫复合物，洗掉游离的成分。通过酸碱激发液激发化学发光标记物发光，记录相对发光强度(rlu)，仪器(比较由样本反应产物获得的化学发光信号值和先前定标获得的cutoff值)自动计算检测结果。

本发明的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒用于hsv-1+2型igm抗体检测时，利用全自动化学发光免疫分析仪对大量样本进行检测，通过统计学方法计算出公式，内置于射频卡；接着测试两点校准，对主校准曲线进行校准；接着测试质控品，质控品测试结果落在靶值范围内认为校准合格。测试实际临床样本，根据样本发光值计算样本浓度；样本的结果以有反应性或无反应性以及cutoff指数(样本信号值/cutoff值，s/co)表示，最后对单纯疱疹病毒1+2型igm抗体检测试剂盒进行性能的评价。

本发明的r1、r2、r3试剂的制备过程如图1所示，首先是对抗原抗体的筛选，之后分别进行磁珠包被，化学发光标记物(如吖啶酯)标记抗体，配制r3试剂，再根据抗原包被磁珠和化学发光标记物(如吖啶酯)标记抗体的浓度进行调配，最后试剂分装。本发明提供一种检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、r1试剂的制备

取浓度是10mg/ml的带有tosyl官能团的磁颗粒(本品为商购)，加入5ml的自带清洗液清洗后，分别加入单纯疱疹病毒1型抗原、单纯疱疹病毒2型抗原后，室温下混悬4-12小时，磁分离，去上清，用0.1-10mmpb，ph6.0-8.0的缓冲液清洗后加入5％的bsa进行封闭，混悬4-6小时，磁分离，清洗后，分别得到单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠或人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠；用25mmtris、0.05％吐温-20、0.05％proclin300和0.02％迭氮钠，ph7.2的缓冲液将单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠和人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠按照混合比例为1:1混合配成磁珠总浓度为0.01％～1％的固相试剂，即为r1试剂；

本发明的单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠和人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠是分别参照步骤1制备得到的，然后将得到的单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠和人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠按照混合比例为1:1、使用缓冲液配成磁珠总浓度为0.01％～1％的固相试剂，即r1试剂。其中磁珠总浓度是单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠和人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠的浓度之和。

步骤2、r2试剂的制备

用超滤离心管将抗人igm抗体缓冲液置换为pbs(抗体量为500μg)，加入化学发光标记物dmf溶液，充分混匀，室温放置2-4小时后，akta蛋白纯化仪纯化标记抗人igm抗体；将收集到的化学发光标记物标记的抗人igm抗体放置于2～8℃保存，使用时将纯化后的化学发光标记物标记的抗人igm抗体浓溶液用100～400mmpb、bistris丙烷或者hepes，0.05％～0.1％pc300、0.01％～0.03％迭氮钠、或者0.05％～0.1％吐温-20，1％～3％的bsa，0.5％-2％bgg，ph6.0～7.0的缓冲液稀释化学发光标记物标记的抗人igm抗体的终浓度为0.1～1.0μg/ml，即为r2试剂；

步骤3、r3试剂的制备

使用缓冲液配制含有阻断剂和人igg吸附剂的缓冲液，即为r3试剂；

缓冲液为100～400mmpb、bistris丙烷、或者hepes，0.05％～0.1％pc300、0.01％～0.03％迭氮钠、或者0.05％～0.1％吐温-20，1％～3％的bsa，0.5％～2％bgg，ph7.0～8.0，阻断剂终浓度为0.1～1.0μg/ml，人igg吸附剂终浓度为50～200ug/ml。

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合实施例对本发明作进一步的详细介绍。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂商店购买得到的。

以下实施例所用的吖啶酯的结构式如下：

实施例1本发明的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒

(1)单纯疱疹病毒1+2型igm抗体校准品、质控品的制备

取单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的蛋白溶液，用商品化单纯疱疹病毒1+2型igm抗体检测试剂盒(索灵诊断(意大利)有限公司生产的单纯疱疹病毒1+2型igm抗体检测试剂盒)进行赋值，取赋值结果为5.0s/co的单纯疱疹病毒1+2型igm抗体蛋白溶液，用校准品基质稀释成2.0s/co，作为高浓度校准品。

取校准品基质赋值结果为0.0s/co，作为低浓度校准品。

取赋值结果为5.0s/co的单纯疱疹病毒1+2型igm抗体蛋白溶液，用质控品基质稀释成2.0s/co，作为高浓度质控品。

取赋值结果为5.0s/co的单纯疱疹病毒1+2型igm抗体蛋白溶液，用质控品基质稀释成0.5s/co，作为低浓度质控品。

(2)试剂r1的配制

取浓度是10mg/ml的带有tosyl官能团的磁颗粒(本品为商购)，加入5ml的自带清洗液清洗后，分别加入单纯疱疹病毒1型抗原、单纯疱疹病毒2型抗原后，室温下混悬4小时，磁分离，去上清，用0.1mmpb，ph6.0的缓冲液清洗后加入5％的bsa进行封闭，混悬4小时，磁分离，清洗后，分别得到单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠或人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠；用25mmtris、0.05％吐温-20、0.05％proclin300和0.02％迭氮钠，ph7.2的缓冲液将单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠和人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠按照混合比例为1:1混合配成磁珠总浓度为0.05％的固相试剂，2～8℃保存。

(3)试剂r2的配制

用超滤离心管将抗人igm抗体缓冲液置换为pbs(抗体量为500μg)，加入吖啶酯dmf溶液，抗体和吖啶酯标记比例为1：3，充分混匀，室温放置2小时后，akta蛋白纯化仪纯化标记抗人igm抗体。将收集到的吖啶酯标记的抗人igm抗体放置于2～8℃保存，使用时将纯化后的抗人igm抗体浓溶液用100mmpb、0.05％吐温-20，1％bsa，0.5％bgg，ph6.5的缓冲液稀释抗体终浓度为0.1μg/ml即为r2试剂。

(4)试剂r3的配制

终浓度为0.1μg/ml非特异性小鼠igg抗体和50μg/ml羊抗人igg、100mmpb，0.05％吐温-20，1％的bsa，0.5％bgg，ph8.0的100mmpb溶液。

实施例2本发明的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒

(1)校准品及质控品的制备

同实施例1。

试剂r1的配制

取浓度是10mg/ml的带有tosyl官能团的磁颗粒(本品为商购)，加入5ml的自带清洗液清洗后，分别加入单纯疱疹病毒1型抗原、单纯疱疹病毒2型抗原后，室温下混悬8小时，磁分离，去上清，用5mmpb，ph7.0的缓冲液清洗后加入5％的bsa进行封闭，混悬5小时，磁分离，清洗后，分别得到单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠或人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠；用25mmtris、0.05％吐温-20、0.05％proclin300和0.02％迭氮钠，ph7.2的缓冲液将单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠和人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠按照混合比例为1:1混合配成磁珠浓度为0.007％的固相试剂，2～8℃保存。

(3)试剂r2的配制

用超滤离心管将抗人igm抗体缓冲液置换为pbs(抗体量为500μg)，加入吖啶酯dmf溶液，抗体和吖啶酯标记比例为1：5，充分混匀，室温放置3小时后，akta蛋白纯化仪纯化标记抗人igm抗体。将收集到的吖啶酯标记的抗人igm抗体放置于2～8℃保存，使用时将纯化后的抗人igm抗体浓溶液用100mmpb、0.05％吐温-20，1％bsa，0.5％bgg，ph6.5的缓冲液稀释抗体终浓度为0.1μg/ml即为r2试剂。

(4)试剂r3的配制

终浓度为0.5μg/ml非特异性小鼠igg抗体和100ug/ml羊抗人igg、100mmpb，0.05％吐温-20，1％的bsa，0.5％bgg，ph8.0的100mmpb溶液。

实施例3本发明的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒

(1)校准品及质控品的制备

同实施例1。

(2)试剂r1的配制

取浓度是10mg/ml的带有tosyl官能团的磁颗粒(本品为商购)，加入5ml的自带清洗液清洗后，分别加入单纯疱疹病毒1型抗原、单纯疱疹病毒2型抗原后，室温下混悬12小时，磁分离，去上清，用10mmpb，ph8.0的缓冲液清洗后加入5％的bsa进行封闭，混悬6小时，磁分离，清洗后，分别得到单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠或人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠；用25mmtris、0.05％吐温-20、0.05％proclin300和0.02％迭氮钠，ph7.2的缓冲液将单纯疱疹病毒1型抗原包被的磁珠和人单纯疱疹病毒2型抗原包被的磁珠按照混合比例为1:1混合配成磁珠总浓度为1％的固相试剂，2～8℃保存。

(3)试剂r2的配制

用超滤离心管将抗人igm抗体缓冲液置换为pbs(抗体量为500μg)，加入吖啶酯dmf溶液，抗体和吖啶酯标记比例为1：10，充分混匀，室温放置4小时后，akta蛋白纯化仪纯化标记抗人igm抗体。将收集到的吖啶酯标记的抗人igm抗体放置于2～8℃保存，使用时将纯化后的抗人igm抗体浓溶液用100mmpb、0.05％吐温-20，1％bsa，0.5％bgg，ph6.5的缓冲液稀释抗体终浓度为0.1μg/ml即为r2试剂。

(4)试剂r3的配制

终浓度为1.0μg/ml非特异性小鼠igg抗体和200ug/ml羊抗人igg、100mmpb，0.05％吐温-20，1％的bsa，0.5％bgg，ph8.0的100mmpb溶液。

实施例4本发明的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体的化学发光免疫分析试剂盒性能评估

采用发明实施例1的检测单纯疱疹病毒1+2型igm抗体化学发光免疫分析试剂盒对单纯疱疹病毒1+2型igm抗体临床样本进行检测，以商品化单纯疱疹病毒1+2型igm抗体检测试剂盒(索灵诊断(意大利)有限公司生产的单纯疱疹病毒1+2型igm抗体检测试剂盒)为对比试剂。

检测方法为：

以迪瑞全自动化学发光免疫分析仪(cm-180)为检测仪器，方法学为间接法，样本量10μl，单纯疱疹病毒1型抗原和单纯疱疹2型抗原包被的磁颗粒试剂(r1)量40μl和中间项试剂(r3)量50μl，化学发光物质标记的抗人igm抗体试剂(r2)量50μl。首先，加入样本10μl，加入90μl稀释液，稀释10倍，然后分别加入r3、r1试剂孵育18min，洗涤5min(清洗液为pb缓冲液)，加入r2试剂孵育5min，洗涤5min(清洗液为pb缓冲液)。仪器将反应物送入暗室，一次加入发光激发液a液(h2o2和hno3溶液)和b液(naoh溶液)进行反应，最后记录相对发光强度(rlu)。仪器(比较由样本反应产物获得的化学发光信号值和先前定标获得的cutoff值)自动计算检测结果。

检测结果如下：

(1)阴性临床样本符合率

用制备的试剂盒测定阴性临床样本，结果如表1，测试结果均为阴性，与对照试剂完全符合。

表1性参考品测定结果

(2)阳性临床样本符合率

采用制备的试剂盒测定阳性临床样本，结果如表2，测试结果均为阳性，与对照试剂完全符合。

表2阳性参考品测定结果

(4)重复性参考品(r)

用本发明的试剂盒对配置的重复性样本进行检测，重复测定10次，计算10次测量结果的平均值和标准差sd，根据公式(1)计算变异系数(cv)不大于15％，测试结果如表4：变异系数为4.44％。

式中：cv—变异系数；

sd—测量结果的标准差；

—测量结果的平均值

表4重复性测定结果

本发明的试剂盒为化学发光免疫分析法，该方法具有种操作简单，检测范围宽及其检测时间短，无需酶参与，精准定量，并且可以对抗原、抗体类目标物质进行检测；另一方面，单纯疱疹病毒1+2型igm化学发光免疫测试剂盒与化学发光免疫检测仪器组成封闭系统，降低了人为操作的误差，提高了整个系统的灵敏度与准确度。

以上只通过说明的方式描述了本发明的某些示范性实施例，毋庸置疑，对于本领域的普通技术人员，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以用各种不同的方式对所描述的实施例进行修正。因此，上述附图和描述在本质上是说明性的，不应理解为对本发明权利要求保护范围的限制。