一种衍生化测定脂肪酸含量的方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种衍生化测定脂肪酸含量的方法。
背景技术：
：脂肪酸是一类具有脂肪链的羧酸类化合物。根据脂肪族链的长度，脂肪酸可分为：短链脂肪酸、中链脂肪酸、长链脂肪酸和超长链脂肪酸。根据是否含碳碳双键分为饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸。目前低限值脂肪酸的检测方法主要有液相色谱质谱联用技术和气相色谱质谱联用技术。当采用液相色谱质谱联用技术时，由于脂肪酸的化学结构特点，其在电喷雾离子源中的离子化效率较差，且易受空白干扰，重现性较差。当采用气相色谱质谱联用技术时，由于长链脂肪酸的沸点较高，不容易气化，使用气相色谱质谱联用技术进行检测时候，检测的灵敏度和准确度比较低。棕榈酸的学名为十六烷酸，属于饱和脂肪酸的一种。拉考沙胺是一种新型nmda受体甘氨酸位点结合拮抗剂，属于新一类功能性氨基酸，是具有全新双重机制作用的抗癫痫药物。如果拉考沙胺中含有过量的棕榈酸，会对拉考沙胺治疗癫痫的效果产生较大的影响，严重影响用药患者的身体健康状况。但是目前还没有能够准确测定拉考沙胺中棕榈酸含量的测试方法。技术实现要素：为解决上述技术问题，本发明的提供了一种衍生化测定脂肪酸含量的方法，至少包括如下步骤：(1)脂肪酸标准物质溶液的配制：取一定量的脂肪酸标准物质于容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度；(2)标准曲线的绘制：分别移取不同浓度梯度的脂肪酸标准物质溶液于容量瓶中并加入一元醇和催化剂，使脂肪酸反应生成脂肪酸酯，水洗后再加入萃取剂，取萃取层于样品瓶中，加入干燥剂后取上清液使用气相色谱质谱联用仪gc-ms作为检测仪器对线性溶液中的脂肪酸酯进行检测，并以脂肪酸的浓度为横坐标，脂肪酸酯的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并得到线性方程；(3)样品溶液的配制和测定：取待测样品于样品瓶中加入一元醇和催化剂，水洗后再加入萃取剂，取萃取层于样品瓶中，加入干燥剂后取上清液使用gc-ms检测仪器进行检测，并通过线性方程计算脂肪酸的浓度。优选的，所述一元醇与催化剂之间的体积比为100：(0.1-10)。优选的，所述催化剂选自浓硫酸、浓盐酸、对甲基苯磺酸和氯化亚砜中的一种。优选的，所述一元醇的碳链在c1-c30。优选的，所述水洗中所用液体为饱和盐溶液。优选的，所述饱和盐溶液中的酸根离子选自硫酸离子、硝酸离子和氯离子中的至少一种。优选的，所述萃取剂选自含有酯基的液体、脂肪烃、芳香烃、卤代烃和醚中的至少一种。优选的，所述干燥剂选自氯化钙、硫酸镁、硫酸钠和氯化镁中的至少一种。优选的，所述干燥剂为硫酸钠。优选的，所述gc-ms检测仪器的色谱参数如下：进样口温度240℃，进样模式，分流比10：1，进样量1μl，载气he，传输线温度240℃，柱流速1ml/min，色谱柱db-waxui,30m×0.25mm×0.25μm，升温程序：初始温度120℃，以20℃/min升至230℃，保持3min；gc-ms检测仪器的质谱参数如下：扫描离子模式，sim，定量离子：74m/z；定性离子：87m/z、55m/z，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，溶剂延迟3.3min。有益效果：本技术方案中发明人通过将待测样品中的脂肪酸转变成脂肪酸酯类，降低了目标物的沸点，使目标物能够在气相色谱中充分气化，提高了使用气相色谱质谱联用仪检测时的灵敏度和准确度。发明人通过选择合适的一元醇和适量的催化剂，能够使脂肪酸尽完全的、较快的转变为脂肪酸酯，不仅能够提高测试过程的稳定性还能提高测试效率。附图说明图1是试剂空白溶液的色谱图。图2是棕榈酸标准物质的中间浓度标准曲线溶液a的色谱图。图3是样品溶液的色谱图。图4是定量限加标溶液的色谱图。具体实施方式为了下面的详细描述的目的，应当理解，本发明可采用各种替代的变化和步骤顺序，除非明确规定相反。此外，除了在任何操作实例中，或者以其他方式指出的情况下，表示例如说明书和权利要求中使用的成分的量的所有数字应被理解为在所有情况下被术语“约”修饰。因此，除非相反指出，否则在以下说明书和所附权利要求中阐述的数值参数是根据本发明所要获得的期望性能而变化的近似值。至少并不是试图将等同原则的适用限制在权利要求的范围内，每个数值参数至少应该根据报告的有效数字的个数并通过应用普通舍入技术来解释。尽管阐述本发明的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但是具体实例中列出的数值尽可能精确地报告。然而，任何数值固有地包含由其各自测试测量中发现的标准偏差必然产生的某些误差。当本文中公开一个数值范围时，上述范围视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。例如，从“1至10”的指定范围应视为包括最小值1与最大值10之间的任何及所有的子范围。范围1至10的示例性子范围包括但不限于1至6.1、3.5至7.8、5.5至10等。为解决上述技术问题，本发明提供了一种衍生化测定脂肪酸含量的方法，至少包括如下步骤：(1)脂肪酸标准物质溶液的配制：取一定量的脂肪酸标准物质于容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度；(2)标准曲线的绘制：分别移取不同浓度梯度的脂肪酸标准物质溶液于容量瓶中并加入一元醇和催化剂，使脂肪酸反应生成脂肪酸酯，水洗后再加入萃取剂，取萃取层于样品瓶中，加入干燥剂后取上清液使用气相色谱质谱联用仪gc-ms作为检测仪器对线性溶液中的脂肪酸酯进行检测，并以脂肪酸的浓度为横坐标，脂肪酸酯的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并得到线性方程；(3)样品溶液的配制和测定：取待测样品于样品瓶中加入一元醇和催化剂，水洗后再加入萃取剂，取萃取层于样品瓶中，加入干燥剂后取上清液使用gc-ms检测仪器进行检测，并通过线性方程计算脂肪酸的浓度。作为一种优选的技术方案，所述步骤(2)和步骤(3)中加入一元醇和催化剂后，在低温恒温槽50-60℃条件下放置30-50min，再进行后续操作。作为一种优选的技术方案，所述脂肪酸为棕榈酸。作为一种优选的技术方案，所述一元醇的碳链在c1-c30。作为一种优选的技术方案，所述一元醇选自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇、庚醇、辛醇和壬醇中的至少一种。作为一种优选的技术方案，所述催化剂选自浓硫酸、浓盐酸、对甲基苯磺酸和氯化亚砜中的一种。作为一种优选的技术方案，所述一元醇与催化剂之间的体积比为100：(0.1-10)。作为一种优选的技术方案，所述一元醇与催化剂之间的体积比为100：1，所述一元醇为甲醇，所述催化剂为浓硫酸，所述浓硫酸的浓度为98wt％。棕榈酸学名为十六烷酸，是一种高级饱和脂肪酸，呈白色带珠光的鳞片。棕榈酸的沸点为351.5℃，由于棕榈酸的沸点较高，在气相色谱中不容易气化进行测试，发明人尝试使用衍生化的方法，将棕榈酸转化成棕榈酸酯类，降低目标物的沸点，使用气相色谱质谱联用仪对棕榈酸酯类进行测试。发明人使用浓硫酸作为催化剂和吸水剂，将羧酸的羰基质子化，增强羰基碳的亲电性，使反应速率加快，同时除去反应的副产物水，使平衡向酯化的方向移动，提高酯的产率。但是浓硫酸过少会使棕榈酸转化为棕榈酸酯产率降低，并影响反应的重现性；浓硫酸过多时并没有使反应速率提高，反而会对后续的除酸步骤产生较大的影响。发明人发现当使用甲醇作为一元醇，并添加一定量的浓硫酸，能够将棕榈酸尽完全的转化为棕榈酸酯类，能降低气相色谱质谱联用仪测试的难易程度，还能提高测试过程的灵敏度。发明人认为可能的原因是甲醇的分子量较小，在一定量浓硫酸的存在下会快速的和棕榈酸进行反应，生成棕榈酸甲酯，一定量浓硫酸能尽完全的将待测品中的棕榈酸反应完全，棕榈酸甲酯的沸点较低，气相色谱质谱联用仪能使棕榈酸甲酯完全气化，提高测试过程的灵敏度、线性和精密度。但是发明人少量浓硫酸的存在会使棕榈酸甲酯分解，会使测试过程中稳定性较差。作为一种优选的技术方案，所述水洗中所用液体为饱和盐溶液。作为一种优选的技术方案，所述饱和盐溶液中的酸根离子选自硫酸离子、硝酸离子和氯离子中的至少一种。作为一种优选的技术方案，所述萃取剂选自含有酯基的液体、脂肪烃、芳香烃、卤代烃和醚中的至少一种。作为一种优选的技术方案，所述萃取剂选自乙酸乙酯、乙酸己酯、异丁酸异戊酯、丁酸甲酯、甲基丙烯酸丁酯、丙二酸二甲酯、丙酸异丁酯、丁酸丁酯和丙酸丁酯中的至少一种。发明人尝试使用纯水洗去浓硫酸，减少棕榈酸甲酯的分解，发明人发现虽然使用纯水能够洗去浓硫酸，但是仍然会有微量的棕榈酸甲酯溶解到水中，降低测试的准确度。发明人意外的发现使用酸根离子为硫酸离子、硝酸离子和氯离子的饱和盐溶液进行水洗时，不仅能够除去硫酸提高测试过程中的稳定性和重复性，还能够减少棕榈酸甲酯在水洗过程中的损失，提高测试过程的准确度。发明人认为饱和盐溶液不仅能够带走硫酸，而且酸根离子为硫酸离子、硝酸离子和氯离子的饱和盐溶液中电解质的浓度较高，能够降低棕榈酸甲酯在饱和盐溶液中的溶解度，并且酸根离子为硫酸离子、硝酸离子和氯离子的盐溶液基本呈中性，不会对棕榈酸甲酯造成影响。虽然水洗过程能够除去硫酸，但是当使用萃取剂萃取棕榈酸甲酯时，不可避免的会给待测样品中带入水分，会对测试过程的准确性造成比较大的影响。作为一种优选的技术方案，所述干燥剂选自氯化钙、硫酸镁、硫酸钠和氯化镁中的至少一种。作为一种优选的技术方案，所述干燥剂为硫酸钠。作为一种优选的技术方案，所述干燥剂为硫酸钠，所述硫酸钠为无水硫酸钠。发明人使用干燥剂将待测样品中的水分吸收，减少待测样品中的水分对测试的影响。当加入无水硫酸钠过量时，无水硫酸钠在待测样品中呈流沙状，尽完全的吸收掉待测样品中的水分，降低衍生物在微量水中的降解，提高样品溶液的稳定性，并且无水硫酸钠也不会给待测样品中引入杂质，在保证测试结果稳定性的同时也能保证测试结果的准确度和专属性。作为一种优选的技术方案，所述gc-ms检测仪器的色谱参数如下：进样口温度240℃，进样模式，分流比10：1，进样量1μl，载气he，传输线温度240℃，柱流速1ml/min，色谱柱db-waxui,30m×0.25mm×0.25μm，升温程序：初始温度120℃，以20℃/min升至230℃，保持3min。gc-ms检测仪器的质谱参数如下：扫描离子模式，sim，定量离子：74m/z；定性离子：87m/z、55m/z，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，溶剂延迟3.3min。另外，如果没有其它说明，所用原料都是市售得到的。实施例1试剂空白溶液的配制：量取纯化水100.0μl于20ml样品瓶中，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml，在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，使用gc-ms检测仪器进行检测,测试谱图如图1所示，所述纯化水由超纯水仪，所述超纯水仪购自厦门锐思捷水纯化技术有限公司，型号：unique-r20，所述gc-ms检测仪器购自安捷伦科技有限公司，型号：7890b-5977b,所述智能低温恒温槽购自南京舜玛仪器设备有限公司，型号：dcw-0506。甲醇-硫酸溶液的配制：量取50ml甲醇于容量瓶中，加入0.5ml的浓硫酸，摇晃30s即得到，所述浓硫酸的浓度为98％wt，所述浓硫酸购自国药基团化学试剂有限公司，货号：20191210，纯度：gr。所述gc-ms检测仪器的色谱参数如下：进样口温度240℃，进样模式，分流比10：1，进样量1μl，载气he，传输线温度240℃，柱流速1ml/min，色谱柱db-waxui,30m×0.25mm×0.25μm，升温程序：初始温度120℃，以20℃/min升至230℃，保持3min。gc-ms检测仪器的质谱参数如下：扫描离子模式，sim，定量离子：74m/z；定性离子：87m/z、55m/z，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，溶剂延迟3.3min。棕榈酸标准物质溶液的配制：棕榈酸标准物质溶液配制两份，分别为棕榈酸标准物质溶液a和棕榈酸标准物质溶液b。棕榈酸标准物质溶液a的配制：称取棕榈酸标准物质51.130mg于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；量取上述溶液198.0μl于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到浓度为100.2μg/ml的棕榈酸标准物质溶液a，所述棕榈酸标准物质购自anpel，批号：a6360010，cas号：57-10-3，所述甲醇购自sigma-aldrich，批号：wxbd1778v，纯度：hplc。棕榈酸标准物质溶液b的配制：称取棕榈酸标准物质34.725mg于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；量取上述溶液291.5μl于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到浓度为100.2μg/ml的棕榈酸标准物质溶液b，所述棕榈酸标准物质购自anpel，批号：a6360010，cas号：57-10-3，所述甲醇购自sigma-aldrich，批号：wxbd1778v，纯度：hplc。棕榈酸标准物质溶液a绘制标准曲线：分别量取棕榈酸标准物质溶液a45μl、100μl、150μl、250μl和350μl于20ml样品瓶中，分别加入甲醇-硫酸溶液2.0ml在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，分别加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再分别加入乙酸乙酯10.0ml，得到棕榈酸标准物质浓度分别为451μg/l、1002μg/l、1503μg/l、2505μg/l、3507μg/l，振摇30s，静置1min后，分别取上层溶液于另一20ml样品瓶中，均加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，均取上清液约1ml于进样瓶中，使用gc-ms检测仪器分别进行检测，以棕榈酸标准物质的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并得到线性方程a:y＝83.0890x+2811.8065，相关系数为0.9998，其中棕榈酸浓度为1503μg/l时的谱图如图2所示。棕榈酸标准物质溶液b绘制标准曲线：分别量取棕榈酸标准物质溶液b45μl、100μl、150μl、250μl和350μl于20ml样品瓶中，分别加入甲醇-硫酸溶液2.0ml在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，分别加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再分别加入乙酸乙酯10.0ml，得到棕榈酸标准物质浓度分别为451μg/l、1002μg/l、1503μg/l、2505μg/l、3507μg/l振摇30s，静置1min后，分别取上层溶液于另一20ml样品瓶中，均加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，均取上清液约1ml于进样瓶中，使用gc-ms检测仪器分别进行检测，以棕榈酸标准物质的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并得到线性方程b:y＝31.4314x+831.9192，相关系数为0.9987。样品母液的配制：取拉考沙胺注射液1瓶(20ml),将所有内容物全部转移至20ml样品瓶中，备用，所述拉考沙胺注射液购自石药欧意，批号：q93200502。样品溶液的配制：量取样品母液100.0μl于20ml样品瓶中，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml，在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，同法平行制备2份溶液，分别为样品溶液1和样品溶液2，使用gc-ms检测仪器进行检测，并通过线性方程a计算相关浓度，测试结果如表1所示，样品溶液1的测试谱图如图3所示，所述饱和氯化钠溶液购自general-reagent，批号：p1666789，纯度：ar，所述乙酸乙酯购自cnw，批号：66370432，纯度：uv-hplc-hplc，所述无水硫酸钠购自general-reagent，批号：p1612665，纯度：ar。表1名称样品溶液1的含量(μg/l)样品溶液1的含量(μg/l)棕榈酸0.000.00对上述方法进行方法学验证，验证该方法的专属性、线性、定量限、准确度、精密度(重复性)、精密度(中间精密度)、溶液稳定性和耐用性。系统适用性溶液：量取棕榈酸标准物质溶液a150μl于20ml样品瓶中，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，同法平行制备6份溶液，分别为溶液1、溶液2、溶液3、溶液4、溶液5和溶液6并使用gc-ms检测仪器分别进行检测，测试结果如表2所示。表2量取棕榈酸标准物质溶液b150μl于20ml样品瓶中，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，同法平行制备6份溶液，并使用gc-ms检测仪器分别进行检测。棕榈酸标准物质溶液a质控(qc)溶液：量取棕榈酸标准物质溶液a150μl于20ml样品瓶中，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，同法平行制备4份溶液，分别记为qc-1、qc-2、qc-3、qc-4，使用gc-ms检测仪器分别进行检测,检测结果如表3所示。表3：名称目标物峰面积trsd(％)qc-1133527.003qc-2123422.284qc-3120018.974qc-4117961.515棕榈酸标准物质溶液b质控(qc)溶液：量取棕榈酸标准物质溶液b150μl于20ml样品瓶中，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，同法平行制备2份溶液，分别记为qc-5、qc-6，使用gc-ms检测仪器分别进行检测,检测结果如表4所示。表4名称目标物峰面积trsd(％)qc-549659.443qc-649461.313定量限(loq)溶液：量取棕榈酸标准物质溶液a45μl于20ml样品瓶中，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，并使用gc-ms检测仪器分别进行检测，检测结果如表5所示。表5准确度溶液：所述准确度溶液分别为低浓度水平准确度溶液、中浓度水平准确度溶液和高浓度水平准确度浓度。低浓度水平准确度溶液：量取样品母液100.0μl于20ml样品瓶中，加入棕榈酸标准物质溶液a45.0μl，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml，在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，同法平行制备共3份溶液，依次得到低浓度水平准确度溶液1、低浓度水平准确度溶液2和低浓度水平准确度溶液3，使用gc-ms检测仪器分别进行检测,检测结果如表6所示。中浓度水平准确度溶液：量取样品母液100.0μl于20ml样品瓶中，加入棕榈酸标准物质溶液a150.0μl，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml，在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，同法平行制备共3份溶液，依次得到中浓度水平准确度溶液1、中浓度水平准确度溶液2和中浓度水平准确度溶液3，使用gc-ms检测仪器分别进行检测,检测结果如表6所示。高浓度水平准确度浓度：量取样品母液100.0μl于20ml样品瓶中，加入棕榈酸标准物质溶液a250.0μl，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml，在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，同法平行制备共3份溶液，依次得到高浓度水平准确度溶液1、高浓度水平准确度溶液2和高浓度水平准确度溶液3，使用gc-ms检测仪器分别进行检测,检测结果如表6所示。表6定量限加标溶液：量取样品母液100.0μl于20ml样品瓶中，加入棕榈酸标准物质溶液a45.0μl，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml，在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，同法平行制备共3份溶液，依次得到定量限加标溶液1、定量限加标溶液2和定量限加标溶液3，加标浓度为451μg/l，使用gc-ms检测仪器分别进行检测，检测结果如表7所示，定量限加标溶液2的测试谱图如图4所示。表7专属性溶液：以试剂空白溶液、样品溶液1、浓度为1503μg/l的棕榈酸标准物质溶液a和定量限加标溶液作为专属性溶液。重复性溶液：量取样品母液100.0μl于20ml样品瓶中，加入棕榈酸标准物质溶液a150.0μl，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml，在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，同法平行制备共6份溶液，依次得到重复性溶液1、重复性溶液2、重复性溶液3、重复性溶液4、重复性溶液5和重复性溶液6，使用gc-ms检测仪器分别进行检测，结果如表8所示。表8：耐用性溶液：量取棕榈酸标准物质溶液a150μl于20ml样品瓶中，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后，加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，同法平行制备共6份溶液，分别为耐用性溶液1、耐用性溶液2、耐用性溶液3、耐用性溶液4、耐用性溶液5和耐用性溶液6，当流速为0.9ml/min时进行一次测试，流速为1.1ml/min时进行一次测试，使用gc-ms检测仪器分别进行检测，检测结果如表9所示。表9稳定性溶液：取重复性溶液1、重复性溶液2、重复性溶液3、重复性溶液4、重复性溶液5和重复性溶液6的取上清液约1ml于进样瓶中，5℃的条件下放置22h，得到稳定性溶液1、稳定性溶液2、稳定性溶液3、稳定性溶液4、稳定性溶液5和稳定性溶液6，使用gc-ms检测仪器分别进行检测,检测结果如表10所示。表10中间精密度溶液：由第二名分析员于不同天配制，取拉考沙胺注射液1瓶，将内容物全部转移至一20ml样品瓶中，量取上述溶液100.0μl于20ml样品瓶中，加入棕榈酸标准物质溶液b150.0μl，加入甲醇-硫酸溶液2.0ml，在低温恒温槽60℃条件下放置45min，取出冷却至室温后加入饱和氯化钠水溶液5.0ml，再加入乙酸乙酯10.0ml，振摇30s，静置1min后，取上层溶液于另一20ml样品瓶中，加入无水硫酸钠至其在瓶底呈流沙状，取上清液约1ml于进样瓶中，同法平行制备6份溶液，依次得到中间精密度溶液1、中间精密度溶液2、中间精密度溶液3、中间精密度溶液4、中间精密度溶液5和中间精密度溶液6，使用gc-ms检测仪器分别进行检测分析样品,测试结果如表11所示，所述gc-ms检测仪器购自安捷伦科技有限公司，型号：7697a-7890b-5977b。表11验证总结：通过验证总结表格可以看出，发明人通过将待测样品中的棕榈酸酸转变成棕榈酸酯类，降低了目标物的沸点，使目标物能够在气相色谱中充分气化，提高了检测的灵敏度和准确度。通过选择合适的一元醇和适量的催化剂，能够使棕榈酸尽完全的、较快的转变为棕榈酸酯，不仅能够提高测试过程的稳定性还能提高测试效率。通过使用饱和氯化钠溶液洗去硫酸，提高了测试结果的系统适应性，通过加入无水硫酸钠进一步提高检测结果的准确度。实施例2实施例2中与实施例1不同的点在于，该实施例中的一元醇为乙醇，所述乙醇，所述乙醇购自sigma-aldrich，cas号：64-17-5。当该实施例进行方法学验证时，依次按照专属性、线性、定量限、准确度、精密度(重复性)、精密度(中间精密度)、稳定性和耐用性依次进行验证，如果上一项验证未通过，则不进行下一项验证，该实施例中的验证结果中的线性，不能通过方法学验证。实施例3实施例3中与实施例1不同的点在于，该实施例中的甲醇与浓硫酸的体积比为100：0.1，其余操作步骤均与实施1中相同，当该实施例进行方法学验证时，与实施例1不同的点在于，该实施例中的准确度偏低，准确度(中浓度水平)：目标物的回收率在76％-80％之间。实施例4实施例4中与实施例1不同的点在于，该实施例中配制的各溶液中不加入饱和氯化钠溶液，其余操作步骤均与实施1中相同，当该实施例进行方法学验证时，该实施例中的验证结果中的系统适用性不能通过方法学验证。实施例5该实施5中与实施例1不同的点在于，该实施例中配制的各溶液中使用纯水代替饱和盐溶液进行水洗，所述纯水为自制，所述制备纯水的设备购自厦门锐思捷水纯化技术有限公司，型号：unique-r20。其余操作条件均与实施例1中相同，当该实施例进行方法学验证时，依次按照专属性、线性、定量限、准确度、精密度(重复性)、精密度(中间精密度)、稳定性和耐用性依次进行验证，如果上一项验证未通过，则不进行下一项验证，该实施例中的验证结果中的准确度，不能通过方法学验证。实施例6该实施6中与实施例1不同的点在于，该实施例中配制的各溶液在放置低温恒温槽中时，低温恒温槽的温度为50℃，其余操作条件均与实施例1中相同，当该实施例进行方法学验证时，依次按照专属性、线性、定量限、准确度、精密度(重复性)、精密度(中间精密度)、稳定性和耐用性依次进行验证，如果上一项验证未通过，则不进行下一项验证，该实施例中的验证结果中的线性，不能通过方法学验证。实施例7该实施7中与实施例1不同的点在于，该实施例中配制的各溶液中不加入干燥剂，其余操作条件均与实施例1中相同，当该实施例进行方法学验证时，依次按照专属性、线性、定量限、准确度、精密度(重复性)、精密度(中间精密度)、稳定性和耐用性依次进行验证，如果上一项验证未通过，则不进行下一项验证，该实施例中的验证结果中的稳定性，不能通过方法学验证。以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对发明作其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或更改为等同变化的等效实施例，但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改，等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。当前第1页12