一种二维薄层色谱分离沉香的方法与流程

本发明涉及薄层色谱分析技术领域，特别涉及一种二维薄层色谱分离沉香的方法。

背景技术：

沉香树是瑞香科、沉香属的一种乔木，高5～15米。沉香树的老茎受伤后所得树脂即为沉香。现有的沉香品种有叶子香、水盘香、黄熟沉香、海南栈香、越南香等，不同种类的沉香品质不同，市场价格相差甚远。

在对沉香进行分析鉴定时，广泛使用的方法为一维薄层色谱分析方法。薄层色谱是一种快速的定性化学分析方法，相对于气相色谱和液相色谱法，所需设备少，操作简单，广泛应用于有机化学分析，是药典等多个国家和行业标准中最常用的化学分析方法。由于沉香提取液的成分复杂，在进行一维薄层色谱分析时，一些色酮类及黄酮类化合物分离效果不佳，存在斑点不清晰的问题，不利于不同种类沉香的快速鉴别和鉴定。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明目的在于提供一种二维薄层色谱分离沉香的方法。本发明提供方法能够提高沉香提取液的分离效果，所得二维薄层色谱图的特征斑点清晰、数量多。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种二维薄层色谱分离沉香的方法，包括以下步骤：

(1)提供沉香极性有机溶剂提取液；

(2)在薄层板表面对所述沉香提取液进行点样，使用第一展开剂对所得点样样品进行第一展开，得到第一展开样品，所述第一展开剂包括三氯甲烷和乙醚；

(3)沿所述第一展开的垂直方向，使用第二展开剂对所述第一展开样品进行第二展开，得到第二展开样品；所述第二展开剂包括正己烷、乙酸乙酯和第三组分，所述第三组分包括甲醇或苯。

优选的，所述第一展开剂中三氯甲烷和乙醚的体积比为5～10:1。

优选的，所述第一展开剂中还包括苯，所述三氯甲烷、乙醚和苯的体积比为(5～10)：1：(0～2)。

优选的，所述第二展开剂中正己烷、乙酸乙酯和第三组分的体积比为(3～10)：(1～7)：(0.5～4)。

优选的，所述步骤(2)中点样的体积为4～20μl。

优选的，得到第二展开样品后，还包括将第二展开剂置于紫外光下进行显色，得到二维薄层色谱图。

优选的，所述紫外光的波长为365nm或254nm。

优选的，所述沉香极性有机溶剂提取液的制备方法，包括以下步骤：

采用第一极性有机溶剂对沉香粉末进行超声提取，固液分离所述超声提取的料液，得到液相组分，去除所述液相组分中的溶剂，得到第一提取物；

将所述第一提取物与第二极性有机溶剂混合，进行微滤，得到沉香极性有机溶剂提取液。

优选的，所述第一极性有机溶剂和第二极性有机溶剂独立为乙酸乙酯、三氯甲烷和甲醇中的一种或几种。

优选的，所述微滤用微滤膜的孔径为0.22～0.45μm。

本发明提供了一种沉香的二维薄层色谱分离方法，本发明在薄层板表面对沉香提取液进行点样，使用第一展开剂对所得点样样品进行第一展开，得到第一展开样品；之后沿所述第一展开的垂直方向，使用第二展开剂对所述第一展开样品进行第二展开，得到第二展开样品。本发明使用两种不同的展开剂体系、沿不同的展开方向对沉香提取液进行二维薄层色谱分离，能够在两个维度对沉香中的有机成分(如色酮类及黄酮类化合物)进行分离，提高色谱斑点的分离度，从而获得清晰的薄层色谱图。本发明通过使用正己烷、乙酸乙酯和甲醇的混合液，或正己烷、乙酸乙酯和苯的混合液作为第二展开剂，其种类与第一展开剂不同，在第一维度的分离效果的基础上，让化合物在不同的有机体系沿第二维度中进一步展开，能够根据不同化合物的极性、溶解性及特征结构等特征，进一步将样品中的不同化合物区分开，从而保留一维薄层色谱分析时显示清晰的斑点，并且将原有不清晰的部分进一步分离，显示更多的斑点。本发明提供的分离方法能够提高沉香中不同化合物的分离效果，可以对照现有品种沉香的薄层色谱图对待测沉香的品种进行分析鉴定，也可以为沉香中的具体化合物成分分析提供更多有用信息。

附图说明

图1为实施例1所得二维薄层色谱分离谱图，其中(a)#1组结果，(b)为#2组结果，(c)为#3组结果，(d)为#4组结果；

图2为实施例2所得二维薄层色谱分离谱图，其中(a)为嫁接奇楠沉香的薄层色谱图，(b)为普通人工沉香的薄层色谱图；

图3为实施例3所得薄层色谱分离谱图，其中(a)为365nm的紫外灯一维薄层色谱图，(b)为365nm的紫外灯下二维薄层色谱图；(c)为254nm的紫外灯下二维薄层色谱图。

具体实施方式

本发明提供了一种二维薄层色谱分离沉香的方法，包括以下步骤：

(1)提供沉香极性有机溶剂提取液；

(2)在薄层板表面对所述沉香提取液进行点样，使用第一展开剂对所得点样样品进行第一展开，得到第一展开样品，所述第一展开剂包括三氯甲烷和乙醚；

(3)沿所述第一展开的垂直方向，使用第二展开剂对所述第一展开样品进行第二展开，得到第二展开样品；所述第二展开剂包括正己烷、乙酸乙酯和第三组分，所述第三组分包括甲醇或苯。

本发明先提供沉香极性有机溶剂提取液。在本发明中，所述沉香极性有机溶剂提取液的制备方法优选包括以下步骤：

采用第一极性有机溶剂对沉香粉末进行超声提取，固液分离所述超声提取的料液，得到液相组分，去除所述液相组分中的溶剂，得到第一提取物；

将所述第一提取物与第二极性有机溶剂混合，进行微滤，得到沉香极性有机溶剂提取液。

本发明对所述沉香的种类和来源没有特殊的要求，任意种类的沉香均能使用本发明提供的方法进行二维薄层色谱分离。在本发明中，所述沉香粉末的粒径优选为20～50目。在本发明中，所述第一极性有机溶剂优选为乙酸乙酯、三氯甲烷和甲醇中的一种或几种。在本发明中，所述沉香粉末的质量与第一极性有机溶剂的体积比优选为0.2g：5～10ml，更优选为0.2g：6～8ml。

在本发明中，所述超声提取的功率优选为20～40mhz，更优选为30mhz；时间优选为1h。

在本发明中，所述固液分离的方式优选为过滤。本发明优选使用定性滤纸进行所述过滤。在本发明中，所述去除溶剂的方式优选为静置挥发溶剂，所述挥发溶剂的温度优选为室温。

在本发明中，所述第二极性有机溶剂优选为乙酸乙酯、三氯甲烷和甲醇中的一种或几种；所述第二有机溶剂与第一有机溶剂的体积比优选为1:5。

在本发明中，所述微滤用微滤膜的孔径优选为0.22～0.45μm。

得到所述沉香提取液后，本发明在薄层板表面对所述沉香提取液进行点样，使用第一展开剂对所得点样样品进行第一展开，得到第一展开样品。在本发明中，所述薄层板优选为硅胶板，进一步优选为gf254硅胶板。在本发明中，所述点样的体积优选为4～20μl，更优选为8～15μl，进一步优选为10～12μl。在本发明中，所述点样的方式优选为薄层自动点样设备点样或毛细管手动点样。

在本发明中，所述第一展开剂包括三氯甲烷和乙醚。在本发明中，所述三氯甲烷与乙醚的体积比优选为5～10:1，更优选为6～8:1。在本发明中，所述第一展开剂中还优选包括苯，所述三氯甲烷、乙醚和苯的体积比优选为(5～10)：1：(0～2)，更优选为(6～8):1:(0.5～1.5)。

在本发明中，所述第一展开的方式优选为：将薄层板置于第一展开剂中，点样样品靠近第一展开剂但不与第一展开剂接触，点样样品与第一展开剂液面的距离优选为5mm。

得到所述第一展开样品后，本发明沿所述第一展开的垂直方向，使用第二展开剂对所述第一展开样品进行第二展开，得到第二展开样品。所述第二展开剂包括正己烷、乙酸乙酯和第三组分，所述第三组分包括甲醇或苯。在本发明中，所述正己烷、乙酸乙酯和第三组分的体积比优选为(3～10)：(1～7)：(0.5～4)，更优选为(5～8):(2～6):(1～3)，进一步优选为8:2:1。

在本发明中，所述第二展开的方式优选为：将所述薄层板旋转90°，置于第二展开剂中，点样样品靠近第二展开剂但不与第二展开剂接触，点样样品与第二展开剂液面的距离优选为5mm。

本发明通过使用正己烷、乙酸乙酯和甲醇体系，或正己烷、乙酸乙酯和苯体系作为第二展开剂，能够保留第一展开时显示清晰的斑点，并且将原有不清晰的部分(rf<0.5的部分)进一步分离，显示更多的斑点。

得到所述第二展开样品后，本发明将所述第二展开样品置于紫外光进行显色，得到二维薄层色谱图。在本发明中，所述紫外光的波长为365nm或254nm。

本发明根据已知品种沉香的二维薄层色谱图对待测沉香的品种进行分析鉴定，若待测沉香样品的二维薄层色谱图中的色谱斑点与已知品种的二维薄层色谱图中的色谱斑点一一对应，则说明待测沉香样品与已知品种沉香的品种相同。其中，已知品种沉香的二维薄层色谱图的获得方法与待测沉香样品的二维薄层色谱图的获得方法相同。

下面结合实施例对本发明提供的二维薄层色谱分离沉香的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

取4组沉香粉末样品，记为#1组、#2组、#3组、#4组，每组0.2克。每组分别与10ml乙酸乙酯混合，在40mhz下浸泡超声1小时，提取液过滤后室温挥干溶剂，用2ml乙酸乙酯复溶，所得溶液用0.45μm微孔滤膜过滤提取液获得沉香提取液。

采用薄层自动点样设备在gf254硅胶板对所述沉香提取液进行点样，点样量为10μl，采用三氯甲烷：乙醚＝10:1溶剂进行第一展开，晾干后沿第一展开的垂直方向使用正己烷：乙酸乙酯：甲醇＝6:4:1的溶剂进行第二展开。

分别于365nm的紫外灯下观察#1组、#2组、#3组、#4组第二展开后的样品，所得结果如图1所示。图1中(a)#1组结果，(b)为#2组结果，(c)为#3组结果，(d)为#4组结果。

由图1可以看出，本发明提供的沉香的二维薄层色谱分离方法所得谱图特征斑点清晰、数量多。

实施例2

按照实施例1的方法分别获得嫁接奇楠沉香提取液与普通人工沉香提取液，分别对嫁接奇楠沉香提取液与普通人工沉香提取液进行二维薄层色谱分离，二维薄层色谱分离时使用的第一展开剂为三氯甲烷：乙醚＝10:1，第二展开剂为正己烷：乙酸乙酯：甲醇＝7:3:0.2。于365nm的紫外灯下观察第二展开结果。

嫁接奇楠沉香与普通人工沉香的二维薄层色谱如图2所示，图2中(a)为嫁接奇楠沉香的薄层色谱图，(b)为普通人工沉香的薄层色谱图。由图2可以看出，不同种类的沉香特征斑点图谱区别较大，能够很好的区分。

实施例3

取0.2g沉香粉末样品，按照实施例1的方式获得沉香提取液。

采用薄层自动点样设备在gf254硅胶板对所述沉香提取液进行点样，点样量为15μl，采用三氯甲烷：乙醚：苯＝10:1:0.5溶剂进行第一展开，晾干后沿第一展开的垂直方向使用正己烷：乙酸乙酯：苯＝6:4:1的溶剂进行第二展开。

于365nm的紫外灯下观察第一展开的结果，所得一维薄层色谱图如图3中(a)所示；于365nm的紫外灯下观察第二展开的结果，所得二维薄层色谱图如图3中(b)所示；于254nm的紫外灯下观察第二展开的结果，所得二维薄层色谱图如图3中(c)所示。

由图3可以看出，本发明提供的分离方法不仅能够保留一维薄层色谱的斑点(白色框及箭头)，还能将原来分离不好的化合物进一步区分(黑色框及箭头)，显示更多的特征斑点，为后续的沉香化合物分离纯化、不同种类沉香的鉴别鉴定提供更多有用信息。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。