专利名称：简化快速检测肝炎的免疫学方法及试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及固相免疫检测方法及产品。
固相免疫检测中，广泛应用的方法有酶联检测技术(ELISA)、放免检测技术等。以酶联检测技术为例它是将免疫结合反应的特异性和生物酶催化的高度敏感性相结合的超微量检测方法，在病毒肝炎、艾滋病等的检测中应用十分广泛，应用该方法配制的商用试剂盒已大量上市。目前，该技术已发展得比较完善。市售的试剂盒有常法和快速法两种，前者是两步反应，后者是一步反应，其基本检测过程以夹心法检测乙型肝炎表面抗原HBsAg为例在包被好抗-HBs(乙型肝炎表面抗体)的载体小孔中加入待测样品(患者血清)100ul，同时作阴性对照管(不含HBsAg)和阳性对照管(含HBsAg)，在37℃的水浴中温育1.5～2小时，吸去反应液，用蒸馏水洗涤小孔三遍，再于各孔中加入HRP-抗抗HBs(HRP代表辣根过氧化物酶)100ul，于水溶液中培育1～1.5小时后，吸去反应液，同上洗小孔后，各孔中加入显色剂进行显色反应，颜色越深表明样品中含HBsAg越多，阴性对照和阳性对照用于检验试剂盒质量，同时，阴性对照也作为判定样品是否含有HBsAg的参照标准。
快速法就是将上述的两步反应变成一步反应，同时缩短温育时间，其余均与上同。
上述酶联法试剂盒包括如下内容(1)HRP-抗-HBs溶液及标记物稀释液;
(2)抗-HBs包被液及载体孔板或包被好抗-HBs的载体孔板;
(3)阴性对照血清;
(4)阴性对照血清;
(5)显色试剂包括显色剂及酶的底物H2O2和终止液等;
(6)加速剂(一步快速法使用)。
放免试剂盒包括如下内容(1)125I-抗HBs溶液;
(2)抗-HBs包被孔;
(3)阴性对照血清;
(4)阳性对照血清;
(5)稀释液放免检测过程同酶联检测相同。
从使用角度看，现有技术主要存在两个问题一是试剂盒组成繁杂，因而使包装、运输、贮存不便，试剂盒质量易受影响;二是使用中操作步骤多，可变因素相对亦多，因而带来的操作误差也大，直接影响到测量结果。
本发明的目的在于提供一种简化试剂盒和减少使用试剂盒时的步骤的方法及由上述方法生产出来的试剂盒，达到进一步控制试剂盒质量，减少操作误差，从而提高检测精度，同时也大大地节省了时间和劳动力。
本发明的目的是通过下述方法实现的首先将包被用的免疫结合试剂涂到固相载体表面，然后进行封闭处理，以使固相载体表面不露活性吸附点，同时保护已附在固相载体表面的免疫活性物质涂层。
再将标记物(酶标物或125I标记物)附于载体表面，同时在指定的固相载体中分别加入已知的作为比较基准或质控样品(如阴性对照、阳性对照、标准品、质控血清等)，低温真空干燥后，再加入保护剂，通过低温真空干燥在因相试剂表面形成一层保护膜。
将按上述方法制成的固相试剂真空封于密封袋中即成产品。
用其制备出的试剂盒比原试剂盒要简单的多，其酶联法试剂盒包括(1)12孔条固相试剂;
(2)样品稀释液;
(3)显色试剂放免试剂盒包括(1)固相试剂;
(2)稀释液使用本方法可组装放免和酶联试剂盒，如测定HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc等等。
本发明与传统的快速检测肝炎的免疫学方法及试剂盒技术相比，具有显著的优点(1)简化了试剂盒的组份，提高了试剂盒质量和稳定性。免疫反应中所用的试剂，一般为蛋白类物质，这类物质都非常“娇气”，其免疫活性容易丧失，从而失去免疫结合能力。这种免疫活性在水溶液状态下更容易受诸因素的影响而失活，如温度、气泡、各种细菌等。传统的试剂盒中的酶标记物，包被用抗体或抗原以及阴、阳性对照物等均为溶液状态，对于保持试剂盒的稳定极为不利，而本发明将上述试剂均已放在载体中，且为干燥品，因而能更好地保持其质量的稳定(2)本发明所组装的试剂盒，其免疫试剂均为干品，且处于密闭状态，有利于运输和保存。
(3)试剂盒的质量更容易得到控制。由于把原来由使用者作的事变成了试剂厂家统一去办，因而更能作到试剂盒在不同实验中应用所得结果的一臻性，有利于各实验室间的质量控制，可比性更好。
(4)减少了使用者的操作步骤，因而减少了人为检测误差，缩短了检测时间，提高了效率，节省了劳力和能源。
本发明具体实施步骤如下，以测HBsAg为例使用固相载体，在孔中先加好包被用的抗-HBs，包上一层抗-HBs后，进行封闭处理，即将封闭液加入载体表面，低温真空干燥，其温多可控制在-10～-12℃再于各孔中加入HRP-抗HBs(放免时加入125I-抗HBs溶液)，同时在第一孔中加入阴性对照血清，第二孔中加入阳性对照血清，再加入保护液进行低温真空干燥(温度条件同上所述)，将上述方法制成的固相试剂孔条真空封于密封袋中即成产品。用上述方法制成的固相试剂盒，酶联法包括(1)12孔条固相试剂;(2)显色试剂;(3)样品稀释液。放免法包括(1)固相载体试剂;(2)稀释液。
权利要求
1.一种简化快速检测肝炎的免疫学方法，其特征在于(1)首先将包被用的免疫结合试剂涂到固相载体表面；(2)对固相载体表面的免疫活性物质涂层及固相载体表面进行封闭处理，然后低温真空干燥；(3)将标记物附于载体表面，同时在指定的载体孔、珠或管中加入已知的做为比较基准或质控样品；(4)加入保护剂，低温真空干燥，使固相试剂表面形成一层保护膜，然后将其密封于袋中。
2.如权利要求1所述的方法生产的试剂盒，其特征在于酶联法诊断试剂盒包括12孔条固相载体试剂;样品稀释液;显色试剂;放免诊断试剂盒包括固相载体试剂、稀释液;上述的固相载体试剂包括固相载体、固相载体外层的包被用免疫结合试剂层、标记物、指定孔珠或管中的已知作为比较基准或质控样品和外层保护膜。
全文摘要
本发明涉及固相免疫检测的方法及诊断试剂盒，其方法是将包被用的免疫结合试剂、标记物、已知的作为比较基准或质控样品等附于固相载体表面，经封闭、低温干燥等，形成固相的试剂。本发明克服了传统的试剂盒组成繁杂，包装、运输、贮存不便，使试剂盒质量易受影响，使用中操作步骤多、可变因素相对亦多，操作误差大的缺点。本发明的酶联试剂盒包括12孔条固相试剂，样品稀释液，显色试剂；放免试剂包括固相试剂，稀释液。
文档编号G01N33/576GK1077288SQ9310393
公开日1993年10月13日 申请日期1993年4月1日 优先权日1993年4月1日
发明者壬京 申请人:壬京