产品的检测的灵敏度。所述样品板的制 备方法具体如下：取微孔反应板(如8联ELISA微孔反应板)，向每个样品槽中加入卡那霉素 特异性抗体的胶体金标记物、红霉素特异性抗体的胶体金标记物和林可霉素特异性抗体的 胶体金标记物各25μ 1，然后将样品板放入冷冻干燥机中，预冻4h后冻干14h，得到样品槽 底部附着有三种特异性抗体的胶体金标记物的样品板。
[0036] 所述试纸条还可包括覆盖于所述样品吸收垫上和覆盖于所述吸水垫上的固定膜 5。所述固定膜可以促进试纸条中各组件的稳固性，优选为防水材质。所述固定膜还具有避 免样品或试剂与外界环境中的物质发生反应的作用。
[0037] 所述样品吸收垫和所述反应膜具有2mm的重叠区；所述吸水垫和所述反应膜具有 2_的重叠区。重叠区保证了样品液流动的连续性，使反应能够充分发生，有效地降低了实 验误差。
[0038] 所述T3线、T2线和T1线上依次包被如下三种偶联物：林可霉素-载体蛋白偶联物、 红霉素-载体蛋白偶联物和卡那霉素-载体蛋白偶联物。
[0039] 所述试纸条中，所述样品吸收垫的始端与所述底板的始端对齐，所述吸水垫的末 端与所述底板的末端对齐。
[0040] 所述试纸条的始端为检测端，末端为手柄端。
[0041] 所述样品吸收垫的长度（自始端至末端）可为18_，所述反应膜的长度（自始端至 末端)可为25mm，所述吸水垫的长度（自始端至末端)可为20mm。所述T 3线距离所述样品吸 收垫的垂直距离可为6mm，所述T2线距离所述T3线的垂直距离可为4mm，所述T 1线距离所 述T2线的垂直距离可为4mm ;所述C线距离所述吸水垫的垂直距离可为7mm。
[0042] 所述卡那霉素-载体蛋白偶联物的包被浓度可为lmg/mL、包被宽度可为1_、包被 量可为0.8 μ L/cm。所述红霉素-载体蛋白偶联物的包被浓度可为lmg/mL、包被宽度可为 1mm、包被量可为0.8 μ L/cm。所述林可霉素-载体蛋白偶联物的包被浓度可为lmg/mL、包 被宽度可为1mm、包被量可为〇· 8 μ L/cm。
[0043] 所述抗抗体具体可为羊抗鼠二抗。所述抗抗体的包被浓度可为0. 2mg/mL、包被宽 度可为1mm,包被量可为1 μ L/cm。
[0044] 所述底板可为PVC板。所述样品吸收垫可为玻璃纤维棉。所述反应膜可为硝酸纤 维素膜。所述吸水垫可为吸水纸。所述保护膜可为PE保护膜。所述样品板可为塑料材质。
[0045] 所述试剂盒还可包括铝箔袋，所述样品板和所述试纸条封装于所述铝箔袋中。
[0046] 每个试剂盒具体可包括具有8个样品槽的样品板和8个试纸条。
[0047] 本发明提供的试剂盒中，特异性抗体与胶体金颗粒之间无价键形成，二者通过异 性电荷间的范德华力相结合，胶体金对抗体特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记 率。因此具有较高的特异性和灵敏度。
[0048] 卡那霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株KANA-2B11简称杂交瘤细胞KANA-2B11。杂交 瘤细胞KANA-2B11已于2013年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No. 8403。
[0049] 红霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株ERM-3F1简称杂交瘤细胞ERM-3F1。杂交瘤细胞 ERM-3F1已于2013年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No. 8402。
[0050] 本发明还保护林可霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株LIN-6D2 (简称杂交瘤细胞 LIN-6D2)。杂交瘤细胞LIN-6D2已于2013年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号 为 CGMCC No. 8405。
[0051] 本发明还保护杂交瘤细胞LIN-6D2分泌的单克隆抗体。
[0052] 本发明提供的试剂盒的检测原理基于免疫分析法，能同时待测样本中是否含有卡 那霉素、红霉素和林可霉素，具有前处理简单、不需任何仪器、灵敏度高、特异性强、适用范 围广、操作简便(对操作人员没有专业要求)、快捷(可在5-10min内获取结果)、成本低廉、仅 通过T线和C线的显色即可读取结果及现场适应能力强等优点，非常适合现场大批量样本 的筛选，可用于专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、乳业企业等，具有广阔的市场前 景和较大的经济、社会效益。
【附图说明】
[0053] 图1为试纸条的结构示意图。
[0054] 图2为试剂盒的使用状态示意图。
[0055] 图3为试剂盒的结果判读示意图。
【具体实施方式】
[0056] 以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验 方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自 常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平 均值。
[0057] 卡那霉素原料药：Sigma-Aldrich,货号46356。红霉素原料药：Sigma_Aldrich， E6376。盐酸林可霉素原料药：Sigma-Aldrich，31727。牛血清白蛋白（BSA): Sigma-Aldrich，A2058。鸡卵白蛋白（OVA) :Sigma-Aldrich，A5503。
[0058] 卡那霉素的结构式如下：
[0059]
【主权项】
1. 一种用于检测卡那霉素、红霉素和林可霉素的试剂盒，包括至少具有一个样品槽的 样品板和至少一个试纸条； 所述样品槽的底部附着有卡那霉素特异性抗体的胶体金标记物、红霉素特异性抗体的 胶体金标记物和林可霉素特异性抗体的胶体金标记物； 所述试纸条包括底板（1 )、反应膜（2 )、样品吸收垫（3 )和吸水垫（4 );所述样品吸收垫、 所述反应膜和所述吸水垫依次附着于所述底板上，所述样品吸收垫的末端与所述反应膜的 始端相连，所述反应膜的末端与所述吸水垫的始端相连；所述反应膜上由始端至末端依次 具有T 3线、T2线、线和C线，所述T3线、T2线、线和C线均与所述反应膜的轴线垂直；所 述T 3线、T2线和线上分别包被如下三种偶联物：林可霉素-载体蛋白偶联物、红霉素-载 体蛋白偶联物、卡那霉素-载体蛋白偶联物；所述C线上包被可与卡那霉素特异性抗体和/ 或红霉素特异性抗体和/或林可霉素特异性抗体结合的抗抗体。
2. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述卡那霉素特异性抗体为卡那霉素单 克隆抗体或卡那霉素多克隆抗体；所述红霉素特异性抗体为红霉素单克隆抗体或红霉素多 克隆抗体；所述林可霉素特异性抗体为林可霉素单克隆抗体或林可霉素多克隆抗体。
3. 如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述卡那霉素单克隆抗体为卡那霉素单 克隆抗体杂交瘤细胞株KANA-2B11CGMCC No. 8403分泌的单克隆抗体；所述红霉素单克隆 抗体为红霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株ERM-3F1CGMCC No. 8402分泌的单克隆抗体；所述 林可霉素单克隆抗体为林可霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株LIN-6D2CGMCC No. 8405分泌的 单克隆抗体。
4. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：任一所述的载体蛋白为牛血清白蛋白、鸡 卵白蛋白或人血清白蛋白。
5. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试纸条还包括覆盖于所述样品吸收 垫上和覆盖于所述吸水垫上的固定膜（5 )。
6. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述样品吸收垫和所述反应膜具有2mm 的重叠区；所述吸水垫和所述反应膜具有2mm的重叠区。
7. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述T3线、T2线和线上依次包被如下 三种偶联物：林可霉素-载体蛋白偶联物、红霉素-载体蛋白偶联物、卡那霉素-载体蛋白 偶联物。
8. 林可霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株LIN-6D2,它的保藏编号为CGMCC No. 8405。
9. 权利要求8所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。
【专利摘要】本发明公开了一种卡那霉素、红霉素、林可霉素三合一金标微孔试纸条。本发明提供的试剂盒，包括至少具有一个样品槽的样品板和至少一个试纸条；样品槽的底部附着有卡那霉素特异性抗体的胶体金标记物、红霉素特异性抗体的胶体金标记物和林可霉素特异性抗体的胶体金标记物；试纸条包括底板（1）、反应膜（2）、样品吸收垫（3）和吸水垫（4）；样品吸收垫、反应膜和吸水垫依次附着于底板上；反应膜上由始端至末端依次具有T3线、T2线、T1线和C线，T3线、T2线和T1线上分别包被如下三种偶联物：林可霉素-载体蛋白偶联物、红霉素-载体蛋白偶联物、卡那霉素-载体蛋白偶联物；C线上包被抗抗体。本发明提供的试剂盒具有广阔的市场前景。CGMCC No840320131025 CGMCC No840220131025 CGMCC No840520131025
【IPC分类】G01N33-02, G01N33-577
【公开号】CN104678069
【申请号】CN201310616277
【发明人】沈建忠, 江海洋, 王战辉, 丁双阳, 张素霞, 温凯, 夏曦, 吴聪明
【申请人】中国农业大学
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2013年11月27日