测定芝麻种子内芝麻素含量的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及芝麻素含量测定技术领域，具体涉及一种测定芝麻种子内芝麻素含量的方法。
【背景技术】
[0002]芝麻(Sesame)是我国重要的油料作物之一，目前我国芝麻亩产达到92kg。芝麻素(Sesamin)属于木脂类，在芝麻油中的含量为0.4%?0.8% ;具有解毒，抗高血压、减少胆固醇吸收、保护肝脏、调节脂质代谢，抗癌以及调节免疫力等多种生理活性。芝麻在我国的可种植地区广泛，不同地区生产的芝麻质量参差不齐，其芝麻素含量有很大差异。国家标准依据不同指标将芝麻划分等级，但未对芝麻素的含量进行规定。不同等级的芝麻价格差异大，鉴于芝麻素的高附加值，把芝麻素含量列入划分芝麻等级的标准具有实际意义。因此需要建立一种简便、快捷的测定芝麻素含量的方法。
[0003]目前，对芝麻素含量的测定主要采用色谱法，如薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC),高效液相色谱法(HPLC)等，但是这些方法的检测对象都是芝麻油，且检测前需要对芝麻油进行复杂的预处理，检测过程中步骤繁琐、所需时间长，芝麻油样品和溶剂消耗量大，且检测结果误差较大。在中国专利文献CN101092421B中公开了一种芝麻素提取新工艺，是从芝麻种子中直接提取芝麻素，省略了榨油工序，但是该方法主要针对的是芝麻素生产领域，其仍然具有过程复杂、所需时间长的缺点，并不适用于快速、精确、定量分析检测。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是提供一种快速、准确测定芝麻种子内芝麻素含量的方法。
[0005]为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案:
设计一种测定芝麻种子内芝麻素含量的方法，包括下列步骤:
(1)配制芝麻素标准溶液:称取芝麻素标准品加入无水甲醇溶解，配制成0.2mg/ mL的芝麻素标准溶液；
(2)绘制芝麻素标准曲线:取步骤(I)所得的芝麻素标准溶液，分别加入对应量的无水甲醇配制成梯度浓度的芝麻素标准品甲醇溶液，使用液相色谱仪分别对上述溶液进行色谱分析，根据测定结果绘制出芝麻素标准工作曲线，或拟合得出芝麻素含量与峰面积的线性关系方程；
(3)配制待测样品溶液:将待测芝麻种子粉碎，并过0.35 μm的筛子，然后取所得的芝麻粉样品按0.1?0.4g:5?1mL的固液比加入体积浓度为80%?100%的甲醇或乙醇；
(4)超声处理和过滤:将步骤(3)所得的混合溶液在30?60°C的条件下进行超声波处理20?50min，然后用0.45 μ m的过滤膜进行过滤；
(5)检测:取步骤(4)所得的滤液9μ I，使用液相色谱仪对该滤液进行进样检测，根据芝麻素标准工作曲线查找得出待测芝麻种子中芝麻素的含量，或根据所得线性关系方程计算得出待测芝麻种子中芝麻素的含量。
[0006]优选的，步骤(2)中所述芝麻素标准品甲醇溶液的梯度浓度分别为200、100、50、40、20、8ug/mL。
[0007]步骤(2)中所述线性关系方程优选为:
A=587.525675x-4.531582，其中A为峰面积，x为芝麻素含量。
[0008]步骤(2)和步骤(5)中的液相色谱仪检测条件优选为:
色谱柱:安捷伦 L1260，Eclipse XDB-C18-USP LI 分析柱，规格(mm):4.6*250，粒径:5um ;流动相:甲醇:水=80:20 (V/V);流速:lmL/min ;检测波长:287nm ;进样体积:9ul ;保留时间:15min。
[0009]步骤(4)中超声波处理的条件优选为:使用超声频率为40KHZ的超声波清洗器，在70?100W的超声功率下进行超声处理。
[0010]优选的，在步骤(4)中进行超声处理的同时使用震荡器对该混合溶液进行震荡处理，使用的震荡器功率为70?100W。
[0011]优选的，在步骤(4)中过滤之前，先对溶液进行离心处理:在5000rpm的条件下进行离心处理2min。
[0012]本发明的有益效果在于:
1.能够直接测、快速地测定芝麻种子中的芝麻素含量，不需要先将芝麻种子压榨成芝麻油再进行检测，省略了榨油的工序；也不需要在检测前进行步骤复杂的预处理过程，极大的简化了芝麻素测定的步骤和工序，大幅缩短了检测所需时间。
[0013]2.优化选择了样品处理的各项工艺参数及检测的条件参数，使得检测结果更加准确、稳定，提高了灵敏度，能够用于快速检测芝麻质量，便于根据芝麻素含量为芝麻进行等级划分；同时也能够为快速、高效、大规模提取芝麻种子中的芝麻素提供参考，对于芝麻素生产领域中提高芝麻素的提取率、缩短提取时间有着重要的意义。
【附图说明】
[0014]图1为芝麻素标准品溶液的液相色谱图；
图2为不同提取条件对样品芝麻素提取量的影响曲线图；
图3为超声波位置对样品芝麻素提取量的影响曲线图；
图4为超声处理时间对样品芝麻素提取量的影响曲线图；
图5为超声处理温度对样品芝麻素提取量的影响曲线图；
图6为离心机转速对样品芝麻素提取量的影响曲线图；
图7为料液比对样品芝麻素提取量的影响曲线图。
【具体实施方式】
[0015]下面结合附图和实施例来说明本发明的【具体实施方式】，但以下实施例只是用来详细说明本发明，并不以任何方式限制本发明的范围。
[0016]实施例1: 一种测定芝麻种子内芝麻素含量的方法，包括下列步骤:
(I)配制芝麻素标准溶液:称取芝麻素标准品10mg，加入无水甲醇溶解并稀释至50mL，然后用0.45 μ m的过滤膜过滤，得到0.2mg/ mL的芝麻素标准溶液； (2)绘制芝麻素标准曲线:取步骤(I)所得的芝麻素标准溶液20、10、5、4、2、0.8mL，分别加入无水甲醇O、10、15、16、18、19.2mL，摇匀配制成梯度浓度分别为200、100、50、40、20、8ug/mL的芝麻素标准品甲醇溶液，使用液相色谱仪分别对上述溶液进行色谱分析，根据测定结果绘制芝麻素标准曲线(芝麻素标准品溶液的液相色谱图参见图1)，并得到芝麻素含量与峰面积的线性关系方程:A=587.525675x-4.531582，其中A为峰面积，x为芝麻素含量;
(3)配制待测样品溶液:使用豫芝11号芝麻种子为待测样品，将待测芝麻种子用万能粉碎机粉碎30s，然后用0.35 μ m的筛子过筛，取所得的芝麻粉样品0.2g，加入浓度为100%的乙醇5mL ；
(4)超声处理和过滤:将步骤(3)所得的混合溶液在30?60°C的条件下进行超声波处理20?50min，然后用0.45 μπι的过滤膜对超声处理后的溶液进行过滤；
超声波处理的条件为:使用超声频率为40ΚΗΖ、型号为KQ3200DE的数控超声波清洗器，在70?100W的超声功率下进行超声处理。
[0017](5)检测:取步骤(4)所得的滤液9 μ 1，使用液相色谱仪对该滤液进行进样检测，根据芝麻素标准曲线、所得线性关系方程计算得出待测芝麻种子中芝麻素的含量。
[0018]其中，步骤(2)和步骤(5)中的液相色谱仪检测条件为:
色谱柱:安捷伦 L1260，Eclipse XDB-C18-USP LI 分析柱，规格(mm):4.6*250，粒径:5um ;流动相:甲醇:水=80:20 (V/V);流速:lmL/min ;检测波长:287nm ;进样体积:9ul ;保留时间:15min。
[0019]实施例2:与实施例1的不同之处在于，在步骤(4)中，进行超声处理的同时使用震荡器对该混合溶液进行震荡处理，使用的震荡器功率为70?100W ;在过滤之前，先对溶液进行离心处理:在5000rpm的条件下进行离心处理2min。
[0020]实施例3:与实施例1的不同之处在于，步骤(3)中，所取的芝麻粉样品为0.lg，加入到芝麻粉样品中的是1ml