浓缩丸样品；1、没食子酸，2、原儿茶酸，3、 1，2, 3, 4,6-五没食子酷葡萄糖，4、丹皮酪。
[00巧]图2是238nm波长下的混合标准品与六味地黄浓缩丸样品（34号样品）色谱图； 图中标记；C、混合标准品，t六味地黄浓缩丸样品；5、5-哲甲基慷醒，6、莫诺巧，7、马钱巧， 8、猜牙菜巧，9、巧药巧，10、苯甲酸，11、苯甲酯巧药巧。
【具体实施方式】
[0026] 下面结合附图和实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。W下实施例用于 说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。
[0027] 本发明实施例采用的仪器与试药包括；安捷伦1290超高效液相色谱仪，配制 G4204A四元累，G4226A自动进样器，G1316C温控箱，G4212A二极管阵列检测器、万分之一电 子天平（ME204E，Mettler-Toledo)，超纯水（Milli-Q，Millipore)，己膳（色谱纯，Merk)， 磯酸（色谱纯，DikmaPure)。标准品：没食子酸（北京赛百草有限公司，130718)，原儿茶酸 (北京赛百草有限公司，130106)，1，2, 3, 4,6-五没食子酷葡萄糖（北京赛百草有限公司， 130508)，丹皮酪（中国食品药品监督管理局，110708-200506) ,5-哲甲基慷醒（北京赛百 草有限公司，131124)，莫诺巧（北京赛百草有限公司，130912)，马钱巧（北京赛百草有限公 司，1201204)，猜牙菜巧（北京赛百草有限公司，140425)，巧药巧（北京赛百草有限公司， 130726)，苯甲酸（北京赛百草有限公司），苯甲酯巧药巧（北京赛百草有限公司，131108)。
[0028] 实施例1
[0029] 按照W下步骤对六味地黄制剂进行检测：
[0030] (1)取六味地黄制剂，粉碎后精密称取，W浓度Ig/lOml溶解于甲醇中，用频率 40000Hz的超声波提取30min，W10000转/分的速度离屯、lOmin，取上清液，用孔径0. 22ym 的滤膜过滤，即得六味地黄制剂溶液，备用；
[0031] (2)精密称取没食子酸、原儿茶酸、1，2, 3, 4,6-五没食子酷葡萄糖、丹皮酪、5-哲 甲基慷醒、莫诺巧、马钱巧、猜牙菜巧、巧药巧、苯甲酸和苯甲酯巧药巧，W甲醇为溶剂，配制 成浓度分别为25yg/mL的标准品溶液，备用；
[0032] (3)采用超高效液相色谱法，在相同的检测条件下分别获得六味地黄浓缩丸溶液 和标准品溶液的色谱图；所述检测条件包括：
[0033] 色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶AgilentSBCi8,粒径为1.8ym;色谱柱 规格为1OOmmX2. 1mm；
[0034] 采用梯度洗脱；其中，流动相A为浓度0. 08ml/100ml的磯酸水溶液，流动相B为己 膳；洗脱程序为；0~5111血2~25%流动相6;5~8111血25~70%流动相6巧~8.1111血 70~95%流动相6;8.1~13111111，95%流动相6;
[OOW] 检测波长为210nm和238nm;
[0036]柱温为 35°C;
[0037] 流动相流速为0. 4mL/min;
[0038] 进样量为1 y L ;
[0039] (4)根据标准品的浓度、标准品在色谱图中的峰面积W及六味地黄制剂中与标准 品相对应成分在色谱图中的峰面积，计算六味地黄制剂中与标准品相对应成分的含量。
[0040] 按照本实施例所述方法，对市售的81种六味地黄制剂（包括34种六味地黄浓缩 丸、17种六味地黄水蜜丸、11种六味地黄大蜜丸和10种六味地黄胶囊剂）进行检测，检测 结果如表1所示。
[0041] 其中，样品第34号（即六味地黄浓缩丸第34号）在210皿波长下的色谱图参见 图1，在238nm波长下的色谱图参见2。
[0042] 表1;六味地黄制剂主要成分含量（ND=未检测到）
[0043]
[0044]
[0045]
[0046]
【主权项】
1. 一种六味地黄制剂的超高效液相双波长多指标含量测定方法，其特征在于，该方法 包括步骤： (1) 取六味地黄制剂，粉碎后精密称取，以浓度lg/10~30ml溶解于甲醇中，超声提取， 离心，取上清液过滤，即得六味地黄制剂溶液，备用； (2) 精密称取标准品，以浓度20~30 y g/ml溶解于甲醇中，即得标准品溶液，备用； (3) 采用超高效液相色谱法，在相同的检测条件下分别获得六味地黄制剂溶液和标准 品溶液的色谱图；所述检测条件包括： 色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶； 采用梯度洗脱；其中，流动相A为浓度0. 08ml/100ml的磷酸水溶液，流动相B为乙腈； 洗脱程序为：0~51^11，2~25%流动相8;5~8111111，25~70%流动相8;8~8.1111111，70~ 95%流动相13;8.1~13111；[11，95%流动相13; 检测波长为 200-220nm 和 238-250nm ; (4) 根据标准品的浓度、标准品在色谱图中的峰面积以及六味地黄制剂中与标准品相 对应成分在色谱图中的峰面积，计算六味地黄制剂中与标准品相对应成分的含量。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2)所述的标准品包括没食子酸、 原儿茶酸、1，2, 3, 4, 6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、獐牙菜 苷、芍药苷、苯甲酸和苯甲酰芍药苷。
3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在检测波长为200-220nm的条件下检测没 食子酸、原儿茶酸、1，2, 3, 4, 6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚；在检测波长为238-250nm的条 件下，检测5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、獐牙菜苷、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷。
4. 根据权利要求1~3任意一项所述的方法，其特征在于，步骤（3)所述色谱柱的规格 为100~250_X2. 1~4. 6謹；填充剂的粒径为1. 8~5 ym。
5. 根据权利要求1~4任一项所述的方法，其特征在于，步骤（3)所述检测条件还包 括：色谱柱的柱温为30~40°C ;流动相流速为0. 1~1.0 ml/min ;进样量为1~5 y 1。
6. 根据权利要求1~5任一项所述的方法，其特征在于，步骤（3)所述的检测波长为 210nm 和 238nm。
7. 根据权利要求1~6任意一项所述的方法，其特征在于，步骤（1)所述超声提取中， 超声波频率为35000~45000Hz，提取时间为20~40min。
8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤（1)所述离心中，离心的速度为 5000~20000转/分，离心时间为5~15min。
9. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤⑴所述过滤采用孔径0. 2~0. 3 y m 的滤膜过滤。
10. 根据权利要求1~9任意一项所述的方法，其特征在于，所述六味地黄制剂的剂型 为：水蜜丸、大蜜丸、浓缩丸或胶囊。
【专利摘要】本发明公开了一种六味地黄制剂的超高效液相双波长多指标含量测定方法，该方法包括步骤：(1)取六味地黄制剂，以浓度1g/10～30ml溶解于甲醇中，得六味地黄制剂溶液；(2)将取标准品以浓度20～30μg/ml溶解于甲醇中，得标准品溶液；(3)采用超高效液相色谱法，在相同的检测条件下分别获得六味地黄制剂溶液和标准品溶液的色谱图；所述检测条件包括：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；采用梯度洗脱；其中，流动相A为浓度0.08ml/100ml的磷酸水溶液，流动相B为乙腈；检测波长为200～220nm和238～250nm；(4)根据标准品的浓度和色谱图，计算六味地黄制剂中与标准品相对应成分的含量。本发明对六味地黄制剂中的主要成分可进行快速、全面的检测，仪器易得，方法简便，操作性强。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104865319
【申请号】CN201510148826
【发明人】王炜, 江星明, 李斌, 彭彩云, 盛文兵, 邱伊星, 苏维
【申请人】湖南中医药大学
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年3月31日