，本实验的萃取剂为20%甲酸+40 %甲醇+40 %水混合溶液。
[0032]本实验进行了中性解吸剂探索，以20%甲酸+40%甲醇+40%水为电喷雾萃取剂，依次将90%甲醇+10%水，80%甲醇+20%水，60%甲醇+40%水，40%甲醇+60%水，20%甲醇+80%水，100%水为解吸剂检测毒死蜱三级串联特征质谱碎片m/z 296信号强度，结果如图4所示。
[0033]本实验进行了离子源条件的探索，根据毒死蜱标准溶液的质谱行为，在正离子模式下，均选择毒死蜱三级串联特征质谱碎片m/z 296的质谱响应信号强度来表示对毒死蜱分子的检测效率。如图5(a)所示，电压太小(小于1.5kV)时，信号强度较低，随着电压的增高，目标信号强度迅速升高，当电压太大(大于3.5kV)时，信号强度反而有所降低，在3.5kV时达到最佳；如图5 (b)所示，电喷雾溶剂流速在4 μ L/min时的萃取效率最大；如图5(c)所示，实验表明，随着雾化气体压力的增大，目标信号强度也随之增大，当气压超过一定值(大于1.0MPa)时，大部分离子会煙灭在质谱口边缘，目标信号强度也会大幅度下降，在IMPa时达到最佳；如图5(d)所示，解吸气压为1.2MPa时信号最强，解吸效率最高；如图5(e)所示，温度从100°C?300°C，目标信号强度迅速升高，但是温度大于300°C后，信号强度逐渐降低，因此，实验选择离子传输管温度为300°C。
[0034]按照上述实验方法进行加标毒死蜱实验，以确定本方法的线性范围和检出限。由于在蜂蜜样品中实时检测，为了排除信号的假阳性，实验选择m/z 352的三级特征碎片离子m/z 296进行定量分析，同时扣除相应的空白背景。每个浓度的标准样品测定6次，以m/z 296的绝对信号强度平均值与对应的毒死蜱浓度绘制曲线，如图6所示。实验表明，在毒死蜱浓度100?lOOOng/mL范围内，离子强度与浓度具有较好的线性关系，线性回归方程为y = 2.444x-63.76，R2= 0.997。根据 LOD = c3 σ /S，S/N = 3，c 为标准品的浓度，σ 为标准偏差，S为净相应信号强度平均值)，计算得本方法对加标蜂蜜的检出限为1.64ng/mL。
[0035]实施例2
[0036]一种中性解吸-电喷雾萃取电离质谱直接检测蜂蜜中毒死蜱的方法，包括如下步骤:
[0037](I)加标蜂蜜配制:称取待测样品蜂蜜，待用；
[0038]加标蜂蜜配制:平行几份称取与待测样品蜂蜜等重的无毒死蜱蜂蜜，分别加入梯度浓度的毒死蜱溶液，搅拌均匀，成加标蜂蜜，待用；
[0039]将待测样品蜂蜜及加标蜂蜜均用保鲜膜封口 65°C水浴5min ;待蜂蜜冷却到室温，进行检测；
[0040](2)中性解吸一电喷雾萃取电离质谱检测:将ND-EES1-MS设置为正离子检测模式，质谱检测扫描范围为m/z 50?400 ；以甲醇水溶液为中性解吸试剂；电离电压3.5kV ；离子传输管温度为300°C ;雾化气为氮气，压力为1.0MPa;萃取剂甲酸:甲醇:水体积比1:2:2，流速为 4 μ L/min ；
[0041]碰撞诱导解离实验时，毒死蜱母离子m/z 352宽度设置为1.2Da，碰撞能量30%，碰撞持续时间为30ms ;二级m/z 324离子宽度设置为1.4Da，碰撞能量为15%，碰撞持续时间为30ms，以三级m/z 296作为定量离子；
[0042]其它参数采用LTQ-MS系统自动优化；喷雾溶剂通道与水平面夹角为30°，溶剂喷雾口与质谱口距离为0.5cm ;为保证样品分子最大限度与试剂离子进行碰撞并发生反应，两喷雾通道夹角保持60°，样品喷雾口与质谱入口距离为0.5cm ；
[0043](3)是否含有毒死蜱的判断:如果在m/z 352的三级碎片中有m/z 296离子信号峰，说明样品中有毒死蜱。
[0044]选择m/z 352的三级特征碎片离子m/z 296进行定量分析，以加标蜂蜜中毒死蜱浓度为横坐标，以m/z 296的绝对信号强度为纵坐标绘制标准曲线，根据标准曲线得出待测样品蜂蜜中毒死蜱的浓度。
[0045]实施例3
[0046](I)称取市售蜂蜜13.96g于1mL锥形瓶中，保鲜膜封口 65°C水浴5min ;待蜂蜜冷却到室温，进行检测；
[0047](2)中性解吸一电喷雾萃取电离质谱检测:将ND-EES1-MS设置为正离子检测模式，质谱检测扫描范围为m/z 50?400 ;以甲醇:水体积比1:1为中性解吸喷雾试剂；电离电压3.5kV ;离子传输管温度为300°C ;雾化气为氮气，压力为1.0MPa ;萃取剂甲酸:甲醇:水体积比1:2:2，流速为4 μ L/min ；
[0048]碰撞诱导解离实验时，毒死蜱母离子m/z 352宽度设置为1.2Da，碰撞能量30%，碰撞持续时间为30ms ;二级m/z 324离子宽度设置为1.4Da，碰撞能量为15%，碰撞持续时间为30ms，以三级m/z 296作为定量离子；
[0049]其它参数采用LTQ-MS系统自动优化；喷雾溶剂通道与水平面夹角为30°，溶剂喷雾口与质谱口距离为0.5cm ;为保证样品分子最大限度与试剂离子进行碰撞并发生反应，两喷雾通道夹角保持60°，样品喷雾口与质谱入口距离为0.5cm ；
[0050](3)是否含有毒死蜱的判断:如果在m/z 352的三级碎片中有m/z 296离子信号峰，说明有毒死蜱。
[0051]样品中毒死蜱含量的测定:通过该装置采集蜂蜜样品中m/z 352的三级碎片中有m/z 296离子信号峰，获得其信号强度数据，将该数据代入公式:y = 2.444χ-63.76，计算得到样品中毒死蜱的含量(浓度单位为ng/mL)。
[0052]对50和500ng/mL毒死蜱蜂蜜溶液平行测定6次，通过标准曲线计算，回收率分别为 82.02%和 109.28%，精密度(RSD)分别为 4.02%和 4.34% 0
【主权项】
1.一种中性解吸-电喷雾萃取电离质谱直接检测蜂蜜中毒死蜱的方法，其特征在于包括如下步骤: (1)加标蜂蜜配制:称取待测样品蜂蜜，待用； 加标蜂蜜配制:平行几份称取与待测样品蜂蜜等重的无毒死蜱蜂蜜，分别加入梯度浓度的毒死蜱溶液，搅拌均匀，成加标蜂蜜，待用； 将待测样品蜂蜜及加标蜂蜜均用保鲜膜封口 65°c水浴5min ;待蜂蜜冷却到室温，进行检测； (2)中性解吸一电喷雾萃取电离质谱检测:将ND-EES1-MS设置为正离子检测模式，质谱检测扫描范围为m/z 50?400 ;以甲醇水溶液为中性解吸试剂；以甲酸甲醇水溶液为电喷雾萃取试剂；电离电压3.5kV ;离子传输管温度为300°C ;雾化气为氮气，压力为1.0MPa ；电喷雾萃取试剂流速为4 μ L/min ； 碰撞诱导解离实验时，毒死蜱母离子m/z 352宽度设置为1.2Da，碰撞能量30%，碰撞持续时间为30ms ;二级m/z 324离子宽度设置为1.4Da，碰撞能量为15%，碰撞持续时间为30ms，以三级m/z 296作为定量离子； 其它参数采用LTQ-MS系统自动优化；喷雾溶剂通道与水平面夹角为30°，溶剂喷雾口与质谱口距离为0.5cm ;为保证样品分子最大限度与试剂离子进行碰撞并发生反应，两喷雾通道夹角保持60°，样品喷雾口与质谱入口距离为0.5cm ； (3)是否含有毒死蜱的判断:如果在m/z352的三级碎片中有m/z 296离子信号峰，说明样品中有毒死蜱； 选择m/z 352的三级特征碎片离子m/z 296进行定量分析，以加标蜂蜜中毒死蜱浓度为横坐标，以m/z 296的绝对信号强度为纵坐标绘制标准曲线，根据样品中m/z 352的三级特征碎片离子m/z 296的信号强度代入标准曲线公式得出待测样品蜂蜜中毒死蜱的浓度。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于以甲醇:水体积比1:1为中性解吸试剂；以甲酸:甲醇:水体积比1:2:2为电喷雾萃取试剂。
【专利摘要】本发明属于检测技术领域，公开中性解吸—电喷雾萃取电离质谱直接检测蜂蜜中毒死蜱的方法，包括(1)加标蜂蜜的制备；(2)中性解吸—电喷雾萃取电离质谱检测毒死蜱萃取剂和中性解吸剂选择；(3)选择m/z352的三级特征碎片离子m/z296进行定量分析得出蜂蜜中毒死蜱的量。本发明无需对待测样品进行预处理，实现对蜂蜜中毒死蜱的快速检测和鉴定，改善现有分析技术操作步骤复杂、费时等缺陷。
【IPC分类】G01N1/28, G01N27/68
【公开号】CN104897767
【申请号】CN201510262973
【发明人】罗丽萍, 陈焕文, 刘星星, 黄学勇, 方小伟, 郭夏丽, 罗火林
【申请人】南昌大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月22日