%、20 %、21 %、 22%、23%、24%或 25% (v/v)，优选的浓度为 18-22% (v/v)，例如 20% (v/v)。除醇类水 溶液外，本发明中也可以使用无机盐水溶液作为蛋白质固定剂。
[0024] 在一个实施方式中，所述待测样品可以是任何生物样品，例如任选稀释的全血、血 清或血浆。
[0025] 在一个实施方式中，所述抗原性物质可以是C-反应蛋白。
[0026] 在另一个方面，本发明提供了蛋白质固定剂在制备检测抗原性物质的试剂盒中的 用途，其中所述蛋白质固定剂的作用是终止反应和固定蛋白质以利于显色，从而延长待检 测时间。
[0027] 在另一个方面，本发明提供了一种利用免疫胶体金渗滤法定量检测生物样品中抗 原性物质的试剂盒，其中包含结合有对所述抗原性物质特异性的第一抗体的胶体金、固定 有对所述抗原性物质特异性的第二抗体的检测板反应区和蛋白质固定剂。
[0028] 在一种实施方式中，本发明试剂盒的主要组成部分包括：人C-反应蛋白（CRP)检 测试纸条、A液（胶体金）、B液（样本稀释液）和C液（蛋白质固定剂）。
[0029] 本发明提供的利用免疫胶体金渗滤法检测生物样品中抗原性物质的方法及试剂 盒，其检测有效面积较宽，从〇. 0706cm2到1. 13cm2 ;待检时间从4-7分钟延长至240分钟； 检测范围较宽，从彡〇? 5mg/L到200mg/L。
[0030] 本发明中检测有效面积和检测量程的改善是由于本发明采用特定的蛋白质固定 剂（蛋白质固定剂）来终止反应和固定蛋白质以利于显色，从而延长待检时间。采用本发 明人设计的检测仪器（参见，例如国际【申请号】PCT/CN2013/075617)可以获得更好的技术 效果。
【具体实施方式】
[0031] 以下实施例仅为了举例说明本发明的实施方案，并不意图将本发明的范围限制于 该具体实施例。
[0032] 实施例1 :免疫胶体金定量检测C-反应蛋白的方法
[0033] 所述方法包括如下步骤：
[0034] 1.胶体金的制备；
[0035] 2.C-反应蛋白抗体的标定；
[0036] 3.胶体金抗体的包被；
[0037] 4.制备免疫渗滤检测板；和
[0038] 5.检测。
[0039] 本方法中使用的试剂与蛋白质固定剂的配制如下：
[0040] (1) 1%氯金酸溶液：lg氯金酸固体+99mL细胞培养用水
[0041] (2) 1%柠檬酸三钠溶液：lg柠檬酸三钠+99mL细胞培养用水
[0042] (3)lOOmM碳酸钾溶液：13. 8g碳酸钾+1000mL细胞培养用水
[0043] (4) 5mM氯化钠溶液：0? 2925g氯化钠+1000mL超纯水
[0044] (5) 20°C时饱和氯化钠溶液：36g氯化钠+100mL超纯水
[0045] (6) 2%PEG20000 溶液：2gPEG20000 固体 +98mL细胞培养用水
[0046] (7)10%BSA溶液：10gBSA粉末+90mL细胞培养用水+0?lg叠氮钠固体（lmLlO% 叠氮钠溶液）
[0047] (8)胶体金稀释液：12. 5mL0. 1M的Tris液 +7. 3mL0. 1M的HC1 液 +6. 25mL2 % PEG20000+2. 5mL10%BSA液+3. 125mL4%叠氮钠液+加细胞培养用水至总体积到250mL
[0048] (9)样本稀释液：50mL的 0? 1MTris液 +29. 2mL的 0? 1MHC1 液+lmLNP-40+ 用超 纯水补充体积至lOOmL
[0049] (10)蛋白质固定剂：27. 5mL的样本稀释液+10mL的75%医用酒精
[0050] 本发明的免疫渗滤法各步骤详述如下：
[0051] 1?胶体金的制备：
[0052] (1)取细胞培养用水495mL，置于lOOOmL容量的锥形瓶中；
[0053] (2)取1 %氯金酸溶液5mL，放于以上锥形瓶中混匀；
[0054] (3)将锥形瓶放在电炉上加热煮沸；
[0055] (4)加入1 %柠檬酸三钠水溶液17. 5mL，混匀，并接着煮沸30分钟：
[0056] (5)将锥形瓶取出放于平整干净的毛巾上冷却，转移至干净的玻璃瓶中，做好标 签，存放于4°C冰箱中。
[0057] 2.C-反应蛋白抗体的标定：
[0058] (1)取胶体金lOOmL;
[0059] (2)取10mM碳酸钾溶液，加入到胶体金中，用pH试纸条检测，使胶体金pH值在 8. 5-9. 0 之间；
[0060] ⑶取C-反应蛋白抗体，用5mM氯化钠溶液，分别配制成140mg/L、150mg/L、 160mg/L、170mg/L、180mg/L、190mg/L、200mg/L、210mg/L、220mg/L、230mg/L的抗体溶液；
[0061] (4)取10份胶体金溶液，每份100uL，依次滴加到96孔板中；
[0062] (5)取以上10种不同浓度抗体溶液，从低到高浓度依次滴加10iiL到具有100iiL 胶体金的小孔中，混匀后静置15分钟；
[0063] (6)取10份饱和氯化钠溶液，各10UL，依次滴加到具有上述混合液的小孔中，于 15°C-30°C温度下过夜；
[0064] (7)隔夜后观察颜色变化情况，确认颜色不变的最高浓度小孔中所加入抗体溶液 的浓度；
[0065] (8)以未发生颜色变化的最高抗体浓度的1. 2倍为最佳结合比例。3.胶体金抗体 的包被：
[0066] (1)取胶体金溶液100mL，置于500mL洁净锥形瓶中；
[0067] (2)用pH试纸条测量确定胶体金的pH值在8. 5~9. 0之间；
[0068] (3)按照胶体金与抗体最佳比例的量获取C-反应蛋白抗体，用pH8. 0的1MPB缓 冲液，稀释成l〇〇〇mg/L的C-反应蛋白抗体溶液；
[0069] (4)在胶体金中放入干净磁力搅拌子，将胶体金放于恒温磁力搅拌仪上并开启仪 器以进行搅拌3-5分钟；
[0070] (5)缓慢滴加1000mg/L的C-反应蛋白抗体溶液，全部加完后再搅拌30分钟；
[0071] (6)缓慢加入lmL2%PEG20000溶液，全部加完后再搅拌15分钟；
[0072] (7)缓慢加入10mL的10%牛血清白蛋白溶液，全部加完后将锥形瓶放于4°C冰箱 中并搅拌7-16小时，确保冰箱和恒温磁力搅拌仪正常工作；
[0073] (8)取搅拌7-16小时的免疫金，装入圆底离心管中；
[0074] (9)将低温高速离心机开启，调整机内温度到4°C;
[0075] (10)离心机设置为13500转/min，将免疫金离心2小时；
[0076] (11)去除上清液，用胶体金稀释液10mL复溶免疫金；
[0077] (12)取出浓缩的免疫金，存放于洁净的容器中，做好标签，存放于4°C冰箱中。
[0078] 4?免疫渗滤检测板的制备：
[0079] (1)取塑料卡片1组；
[0080] (2)取lcm*l. 7cm的吸水纸，取一张对齐放置到塑料卡托片的凹槽内；
[0081] (3)取的NC膜一张，整齐放到塑料卡托片凹槽内的吸水纸上：
[0082] (4)取塑料卡盖片，与托片卡在一起；
[0083] (5)开启压板机，将检测片原坯压严实；
[0084] (6)取lmL浓度约为30mg/mL的C-反应蛋白抗体，用pH8. 0的1MPB缓冲液稀释 成100mg/L抗体溶液；
[0085] (7)取30iiL的100mg/L抗体溶液，滴加到检测卡原配上的反应孔内，液体完全渗 漏；
[0086] (8)将检测卡放于37°C烘箱内烘干3小时：
[0087] (9)取出检测卡，存放于内包装袋中，加入一份干燥剂；
[0088] (10)将内包装袋封口，贴上标签，存放于4°C冰箱中。
[0089] 5?检测的操作步骤：
[0090] (1)将光电检测仪（如国际专利【申请号】PCT/CN2013/075617中所描述的）开机， 预热15分钟；
[0091] (2)取包被C-反应蛋白抗体后的胶体金lmL;
[0092] (3)取样本稀释液0? 9mL;
[0093] (4)取血清样本液