] 实施例8
[0051] 本实施例与实施例4的区别点在于滤液与盐酸溶液的体积比为15 :1. 75。
[0052] 实施例9
[0053] 本实施例与实施例4的区别点在于滤液与盐酸溶液的体积比为15 :3. 5。
[0054] 实施例10
[0055] 本实施例与实施例4的区别点在于滤液与盐酸溶液的体积比为15 :14。
[0056] 实施例4和8~10北青龙衣水解前后胡桃酮、胡桃醌的含量如表4所示。
[0057] 表 4 [00581
[0059] 实施例11
[0060] 实施例4获得的盐酸水解液采用以下步骤测定胡桃醌与胡桃酮的含量：采用高效 液相梯度检测，检测波长为265nm，进样量为10 μ I，流速为lml/min ;梯度洗脱条件为初始 流动相中甲醇与水的浓度配比为45ml :55ml，第30~35min流动相中甲醇与水的浓度配比 为75ml :25ml，第35min之后流动相中甲醇与水的浓度配比为45ml :55ml。
[0061] 对照品：精密称取胡桃酮对照品I. 5mg、胡桃醌对照品lmg，置25ml容量瓶中，用甲 醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含胡桃酮0. 06mg、胡桃醌0. 04mg的溶液。
[0062] 对照品高效液相梯度检测结果如图1所示（峰1为胡桃酮对照品；峰2为胡桃醌 对照品）。本实施例水解液高效液相梯度检测结果如图2所示。
[0063] 本发明方法胡桃醌与胡桃酮的分离度均大于1. 5,理论塔板数不低于3000。
[0064] 实施例12
[0065] 精密称取胡桃酮、胡桃醌，置25ml容量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成 含胡桃酮、胡桃醌的混合对照溶液，再依次稀释为5个不同梯度。分别采用【具体实施方式】 六的方法进行高效液相梯度检测。
[0066] 胡桃酮的质量浓度分别为 7. 9 μ g/ml、15. 8 μ g/ml、31. 6 μ g/ml、63. 2 μ g/ml 和 126. 4 μ g/ml，胡桃酮峰面积为 238351. 6、466703· 3、973406· 5、1845863. I 和 3713626. 4。以 胡桃酮峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程：y = 29242X+15298, r =0.9994。结果表明，胡桃酮在7. 9 μ g/ml~126. 4 μ g/ml范围内线性关系良好。
[0067] 胡桃醌的质量浓度分别为 10. 3 μ g/ml、20. 6 μ g/ml、41· 2 μ g/ml、82· 4 μ g/ml 和 164. 8 μ g/ml，胡桃酮峰面积为97. 9、205. 9、415. 7、821. 4和1631. 8。以胡桃醌峰面积为纵 坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程：y = 9. 905x+l. 966, r = 0. 9995。结果表 明，胡桃醌在10. 3 μ g/ml~164. 8 μ g/ml范围内线性关系良好。
[0068] 在上述色谱条件下，分别取胡桃酮、胡桃醌混合对照溶液连续进样5次，5次的检 测结果如表5所示。
[0069] 表 5
[0070]
[0071] 连续进样5次的检测结果说明本发明胡桃醌与胡桃酮的含量测定方法日内精密 度高。
[0072] 实施例13
[0073] 将实施例4获得的盐酸水解液放置在室温环境中，分别选取放置0、0. 5、1、2、3、6、 12、24和48h的水解液采用【具体实施方式】六中的方法进行检测。放置不同时间的水解液中 胡桃酮、胡桃醌的含量如表6所示。
[0074] 表 6
[0075] CN 105136916 A 1冗 P月卞> 6/8 页
[0076] 实验证明实施例4获得的盐酸水解液在48h内稳定性好。
[0077] 实施例14
[0078] 同一批次的北青龙衣粉末，分成5份，按照实施例4的方法进行水解，然后采用具 体实施方式六中的方法进行检测，检测结果如表7所示。
[0079] 表 7
[0080]
[0082] 实验结果说明本发明胡桃醌与胡桃酮的含量测定方法重复性好。
[0083] 实施例15
[0084] 按照实施例4的方法进行北青龙衣水解，不同点在于在北青龙衣粉末加入甲醇溶 液的同时，向甲醇溶液中加入纯胡桃酮对照品和纯胡桃醌对照品，甲醇溶液中纯胡桃酮的 加入量为5. 6mg/100ml，甲醇溶液中纯胡桃醌的加入量为2. 0mg/100ml。
[0085] 分别检测胡桃酮、胡桃醌含量，检测结果如表8和表9所示。
[0086] 表8胡桃酮加样回收率结果
[0087]
[0088] 表9胡桃醌加样回收率结果
[0089] CN 105136916 A m ~P 7/8 页
[0090] 回收率计算公式：回收率％= (C - A)/BX 100%
[0091] 回收率计算公式中A为北青龙衣水解样品中被测成分含量；B为对照品加入量；C 为实测值。
[0092] 实施例16
[0093] 采用【具体实施方式】六的方法对同年采集的不同产地北青龙衣水解（水解方法采 用实施例4的方法）前后胡桃酮、胡桃醌含量进行检测。
[0094] 表 10 水解前（η = 3)
[0095]
[0
[0097] 表1l 水解后（η = 3)
[0098]
[0099] 通过表10与表11的对比发现，未经过水解的北青龙衣，因产地的不同，胡桃酮与 胡桃醌的含量总和相差较大；经过本发明方法水解后，不同产地的北青龙衣，其胡桃酮与胡 桃醌的含量总和均在2~2. 5mg/g之间，含量相对稳定。因此，利用本发明方法水解后的北 青龙衣制备抗癌药物，其产品种抗癌活性成分含量稳定，疗效得以保证。
[0100] 分析认为胡桃酮苷、胡桃酮和胡桃醌之间存在某种转化关系，因此，胡桃酮与胡桃 醌含量之和相对稳定。
【主权项】
1. 一种促使北青龙衣中胡桃酮苷水解为胡桃酮的方法，其特征在于促使北青龙衣中胡 桃酮苷水解为胡桃酮的方法按以下步骤进行： 将青龙衣粉末加入甲醇溶液进行超声处理，冷却后滤过，取滤液加入酸性溶液回流水 解，即实现北青龙衣中结合型胡桃酮苷水解为游离型胡桃酮。2. 根据权利要求1所述的一种促使北青龙衣中胡桃酮苷水解为胡桃酮的方法，其特征 在于甲醇溶液的浓度为2〇%~1〇〇%。3. 根据权利要求1所述的一种促使北青龙衣中胡桃酮苷水解为胡桃酮的方法，其特征 在于甲醇溶液的浓度为60%。4. 根据权利要求1所述的一种促使北青龙衣中胡桃酮苷水解为胡桃酮的方法，其特征 在于滤液与酸性溶液的体积比为15 :1. 5~14。5. 根据权利要求4所述的一种促使北青龙衣中胡桃酮苷水解为胡桃酮的方法，其特征 在于酸性溶液的体积浓度为25%。6. 根据权利要求4所述的一种促使北青龙衣中胡桃酮苷水解为胡桃酮的方法，其特征 在于酸性溶液为盐酸或硫酸。7. 胡桃醌与胡桃酮的含量测定方法，其特征在于按以下步骤测定胡桃醌与胡桃酮的含 量：采用高效液相梯度检测，检测波长为265nm，进样量为10 y 1，流速为lml/min ;梯度洗脱 条件为初始流动相中甲醇与水的浓度配比为45ml :55ml，第30~35min流动相中甲醇与水 的浓度配比为75ml :25ml，第35min之后流动相中甲醇与水的浓度配比为45ml :55ml。
【专利摘要】促使北青龙衣中胡桃酮苷水解为胡桃酮的方法及胡桃醌与胡桃酮的含量测定方法，它涉及一种胡桃酮苷水解为胡桃酮的方法及胡桃醌与胡桃酮的含量测定方法。解决了目前因产地不同北青龙衣中胡桃醌差异性大，导致利用北青龙衣制备的抗癌药物质量难以掌控的问题。水解方法：将青龙衣粉末加入甲醇溶液进行超声处理，冷却后滤过，取滤液加入酸性溶液回流水解，即实现北青龙衣中结合型胡桃酮苷水解为游离型胡桃酮。测定方法：采用高效液相梯度检测。本发明方法促使北青龙衣中结合型胡桃酮苷水解为游离型胡桃酮，使不同产地北青龙衣的抗肿瘤活性主要成分含量达到稳定，从而保证了北青龙衣抗癌药物的质量和稳定性。
【IPC分类】C07C46/00, C07C50/32, G01N30/02
【公开号】CN105136916
【申请号】CN201510431095
【发明人】王伟明, 初东君, 霍金海, 张海燕, 任晓蕾, 曹贵阳
【申请人】黑龙江省中医药科学院
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年7月22日