六叔丁基-六己氧基-六苯并[ab,de,lm,op,rs,uv]晕蒄作为MALDI-TOF MS基质在小分子 ...的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于MALDI-TOF MS的应用技术领域，具体涉及一种六叔丁基-六己氧 基-六苯并[ab, de, lm, op, rs, uv]晕蔻（HBCCs)作为MALDI-TOF MS基质在小分子（分子 量小于500Da)检测中的应用。
【背景技术】
[0002] 80年代末发展起来一种新型软电离生物质谱即基质辅助激光解吸/电离飞行时 间质谱（MALDI-TOF MS)，其具有准确度好、灵敏度及分辨率高等特点。MALDI-TOF MS是一种 简单快速的技术，主要用于分析大的生物分子，因此它已经广泛地用于分析蛋白质、多肽、 核甘酸等。它具有较好的盐的耐受性，对样品前处理要求较低，极大地节省了劳力。
[0003] 在MALDI-TOF MS中，基质起着吸收及传递激光能量、使样品离子化的作用。然而 传统的基质如a-氰基-4-羟基肉桂酸（CHCA)、二羟基苯甲酸（DHB)以及2, 4, 6-三羟基苯 乙酮（THAP)等在激光辐射下易裂解，因而在低分子量区域（<500Da)会产生不理想的基质 离子干扰，同时由于基质与分析物异相共结晶而使检测器形成饱和热点，从而造成小分子 的观察和表征的困难，以至于很难利用传统的基质去分析小分子物质。近年来研究发现新 型碳材料如石墨烯，氧化石墨烯，氮参杂的石墨烯，碳点以及碳纳米管等皆可作为MALDI基 质用于小分子的测量，然而碳材料作为新的MALDI基质与靶板结合的不牢固，离子化过程 中容易飞离靶板污染离子源，同时石墨烯与碳纳米管等材料在溶液中分散性不好，易团聚， 存在重现性不理想的问题。
[0004] 2014年，魏俊发课题组对纳米石墨稀的合成研究取得了新的突破（J. Am. Chem. Soc. 2014, 136, 5057-5064)，利用自底而上的方法合成了多种多环芳烃化合物，例如具有25 个苯环的多环芳烃化合物HBCCs，其结构如下所示。
[0005]
[0006] 该类多环芳烃化合物具有与石墨烯类似的光学性质和电学性质，同时可溶于有机 溶剂，被认为在下一代电子设备和荧光方面具有潜在的应用。
【发明内容】
[0007] 本发明所要解决的技术问题在于为HBCCs提供一种新用途，即其作为MALDI-T0F MS基质在小分子检测中的新应用，以克服MALDI-TOF MS的传统基质只能分析大分子物质 的缺点。
[0008] 解决上述技术问题所采用的技术方案是：六叔丁基-六己氧基_六苯并 [ab, de, lm, op, rs, uv]晕蔻作为MALDI-TOF MS基质在检测小分子中的用途，所述的小分子 为氨基酸、药物小分子、糖类小分子、芳香烃化合物等。
[0009] 上述的氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖 氨酸、精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、组氨酸、苯丙氨酸等。
[0010] 上述的药物小分子为喹诺酮类药物、磺胺类药物、杂环类药物、留体激素类药物、 中药有效成分等，其中所述的磺胺类药物为磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲 恶唑、酞磺胺噻唑、磺胺醋酰等，喹诺酮类药物为环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、依诺沙星、 加替沙星、培氟沙星等。
[0011] 上述的糖类小分子为木糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖等。
[0012] 上述的芳香烃化合物为单环芳烃、多环芳烃、非苯系芳烃等。
[0013] 采用HBCCs检测小分子的方法是：将HBCCs直接用作MALDI-TOF MS基质对氨基 酸、药物小分子、糖类小分子以及芳香族类化合物等进行检测。
[0014] 本发明克服了 MALDI-TOF MS的传统基质只能分析大分子物质的缺点，采用HBCCs 作为MALDI-TOF MS基质用于分析小分子物质。HBCCs具有强的紫外吸收，可溶于有机溶剂， 作为MALDI-TOF MS基质不易飞离靶板，不聚合，对离子源几乎没有污染。
【附图说明】
[0015] 图1是HBCCs作为MALDI-TOF MS基质的质谱图。
[0016] 图2是HBCCs作为MALDI-TOF MS基质检测天冬氨酸的质谱图。
[0017] 图3是HBCCs作为MALDI-TOF MS基质检测精氨酸的质谱图。
[0018] 图4是HBCCs作为MALDI-TOF MS基质检测苯丙氨酸的质谱图。
[0019] 图5是HBCCs作为MALDI-TOF MS基质检测磺胺噻唑的质谱图。
[0020] 图6是HBCCs作为MALDI-TOFMS基质检测磺胺甲嘧啶的质谱图。
[0021] 图7是HBCCs作为MALDI-TOFMS基质检测磺胺二甲嘧啶的质谱图。
[0022] 图8是HBCCs作为MALDI-TOFMS基质检测环丙沙星的质谱图。
[0023] 图9是HBCCs作为MALDI-TOF MS基质检测氧氟沙星的质谱图。
[0024] 图10是HBCCs作为MALDI-TOF MS基质检测诺氟沙星的质谱图。
[0025] 图11是HBCCs作为MALDI-TOF MS基质检测黄芩苷的质谱图。
[0026] 图12是HBCCs作为MALDI-TOF MS基质检测乙酰丙嗪的质谱图。
[0027] 图13是HBCCs作为MALDI-TOF MS基质检测恩曲他滨的质谱图。
[0028] 图14是HBCCs作为MALDI-TOF MS基质检测木糖的质谱图。
[0029] 图15是HBCCs作为MALDI-TOFMS基质检测对硝基酚的质谱图。
[0030] 图16是HBCCs作为MALDI-TOFMS基质检测间苯二酚的质谱图。
[0031] 图17是HBCCs作为MALDI-TOFMS基质检测1，5-二氨基萘的质谱图。
[0032] 图18是HBCCs作为MALDI-TOFMS基质检测蒽的质谱图。
【具体实施方式】
[0033] 下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明的保护范围不仅限于 这些实施例。
[0034] 实施例1
[0035] HBCCs作为MALDI-TOF MS基质在检测天冬氨酸中的用途，具体检测方法如下：
[0036] 将lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超声5min，得到黄色透明的HBCCs三氯甲烷 溶液；将lmg天冬氨酸溶于lmL二次蒸馏水中，超声10min，得到无色透明的天冬氨酸水溶 液。取1 y L HBCCs三氯甲烷溶液快速滴到MALDI-TOF MS样品靶板上，自然风干，吹去表面 浮尘，进行MALDI-TOF MS分析，分析结果如图1所示。由图可见，在分子量小于500的范围 内，HBCCs作为MALDI-TOF MS基质几乎没有分子离子峰，说明其对小分子检测不会产生干 扰。
[0037] 取2 y L HBCCs三氯甲烷溶液和2 y L天冬氨酸水溶液，混合均匀，取2 y L混合液 快速滴到MALDI-TOF MS样品靶板上，常温下自然晾干，进行MALDI-TOF MS分析，分析结果 见图2。由图可见，在m/z为133处是天冬氨酸分子的信号峰，且分子离子峰的强度明显，说 明HBCCs对天冬氨酸的检测效果良好，可用于天冬氨酸的检测。
[0038] 实施例2
[0039] HBCCs作为MALDI-TOF MS基质在检测精氨酸中的用途，具体检测方法如下：
[0040] 将lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超声5min，得到黄色透明的HBCCs三氯甲烷溶 液；将lmg L-精氨酸溶于lmL二次蒸馏水中，超声10min，得到无色透明的L-精氨酸水溶 液。取2 y L HBCCs三氯甲烷溶液和2 y L L-精氨酸水溶液，混合均匀，取2 y L混合液快速 滴到MALDI-TOF MS样品靶板上，常温下自然晾干，进行MALDI-TOF MS分析，分析结果见图 3。 由图可见，在m/z为175、197及213三处分别是精氨酸分子加氢呙子、钠呙子以及钾呙 子的信号峰，三处分子离子峰的强度明显，说明HBCCs对精氨酸的检测效果良好，可用于精 氨酸的检测。
[0041] 实施例3
[0042] HBCCs作为MALDI-TOF MS基质在检测苯丙氨酸中的用途，具体检测方法如下：
[0043] 将lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超声5min，得到黄色透明的HBCCs三氯甲烷溶 液；将lmg苯丙氨酸溶于lmL二次蒸馏水中，超声lOmin，得到无色透明的L-苯丙氨酸水溶 液。取2 y L HBCCs三氯甲烷溶液和2 y L苯丙氨酸水溶液，混合均匀，取2 y L混合液快速 滴到MALDI-TOF MS样品靶板上，常温下自然晾干，进行MALDI-TOF MS分析，分析结果见图 4。 由图可见，在m/z为188及204两处分别是L-苯丙氨酸分子加钠尚子以及钾尚子的信 号峰，两处分子离子峰的强度明显，说明HBCCs对苯丙氨酸的检测效果良好，可用于苯丙氨 酸的检测。
[0044] 实施例4
[0045] HBCCs作为MALDI-TOF MS基质在检测磺胺噻唑中的用途，具体检测方法如下：
[0046] 将lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超声5min，得到黄色透明的HBCCs三氯甲烷溶 液；将lmg磺胺噻唑溶于lmL甲醇中，超声10min，得到无色透明的磺胺噻唑甲醇溶液。取 2 y L HBCCs三氯甲烷溶液和2 y L磺胺噻唑甲醇溶液，混合均匀，取2 y L混合液快速滴到 MALDI-TOF MS样品靶板上，常温下自然晾干，进行MALDI-TOF MS分析，分析结果见图5。由 图可见，在m/z为294处是磺胺噻唑分子加钾离子的信号峰，分子离子峰的强度明显，说明 HBCCs对磺胺噻唑的检测效果良好，可用于磺胺噻唑的检测。
[0047] 实施例5
[0048] HBCCs作为MALDI-TOF MS基质在检测磺胺甲嘧啶中的用途，具体检测方法如下：
[0049] 将lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超声5min，得到黄色透明的HBCCs三氯甲烷溶 液；将lmg磺胺甲啼啶溶于lmL甲醇中，超声10min，得到无色透明的磺胺甲啼啶甲醇溶液。 取2 y L HBCCs三氯甲烷溶液和2 y L磺胺甲嘧啶甲醇溶液，混合均匀，取2 y L混合液快速 滴到MALDI-TOF MS样品靶板上，常温下自然晾干，进行MALDI-TOF MS分析，分析结果见图 6。由图可见，在m/z为303处是磺胺甲嘧啶分子加钾离子的信号峰，分子离子峰的强度明 显，说明HBCCs对磺胺甲嘧啶的检测效果良好，可用于磺胺甲嘧啶的检测。
[0050] 实施例6
[0051] HBCCs作为MALDI-TOF MS基质在检测磺胺二甲嘧啶中的用途，具体检测方法如 下：
[0052] 将lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超声5min，得到黄色透明的HBCCs三氯甲烷溶 液；将lmg磺胺二甲啼啶溶于lmL甲醇中，超声10min，得到无色透明的磺胺二甲啼啶甲醇 溶液。取2 y L HBCCs三氯甲烷溶液和2 y L磺胺二甲嘧啶甲醇溶液，混合均匀，取2 y L混 合液快速滴到MALDI-TOF MS样品靶板上，常温下自然晾干，进行MALDI-TOF MS分析，分析 结果见图7。由图可见，在m/z为317处是磺胺二甲嘧啶分子加钾离子的信号峰，分子离子 峰的强度明显，说明HBCCs对磺胺二甲嘧啶的检测效果良好，可用于磺胺二甲嘧啶的检测。
[0053] 实施例7
[0054] HBCCs作为MALDI-TOF MS基质在检测环丙沙星中的用途，具体检测方法如下：
[0055] 将lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超声5min，得到黄色透明的HBCCs三氯甲烷溶 液；将lmg环丙沙星盐酸盐溶于lmL二次蒸馏水中，超声lOmin，得到无色透明的环丙沙星 盐酸盐水溶液。取2