诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。
[0033] 在上面的方法中的重组多肽可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如 果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这 些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、 用蛋白沉淀剂处理（盐析方法）、离心、渗透破菌、超声处理、超离心、分子筛层析（凝胶过 滤）、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析（HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法 的结合。
[0034] 本发明的抗空肠弯曲菌单克隆抗体，其效价高（可以达到1:100000)，能够特异性 地、高效地检测空肠弯曲菌，与单增李斯特、猪霍乱沙门、鼠伤寒沙门、肠炎沙门、福氏志贺、 宋内氏志贺、鲍氏志贺、大肠〇157:H7、小肠耶尔森氏菌等91种细菌（株）均无交叉反应，， 此为本发明的最大创新点。上述单克隆抗体4C9E1G7H3可以用辣根过氧化物酶、碱性磷酸 酯酶、纳米金颗粒标记，专一性地作为检测抗体使用。上述单克隆抗体3G2D8H3G9在各种检 测运用中，可专一性地作为捕捉抗体使用。
[0035] 检测试剂盒
[0036] 本发明人经过广泛的研究和试验，意外地发现，当采用小鼠杂交瘤细胞系 3G2D8H3G9(CGMCCNo. 8766)所产生的抗空肠弯曲菌单克隆抗体作为捕捉抗体捕获空肠弯 曲菌后，再用可检测的标记物标记的由小鼠杂交瘤细胞系4C9E1G7H3(CGMCCNo. 8457)所产 生的抗空肠弯曲菌单克隆抗体作为检测抗体，可以极其有效地结合于空肠弯曲菌，从而通 过双抗夹心法高灵敏度地检测空肠弯曲菌。
[0037] 如本文所用，所述的"样品"是指食品、人畜粪便、呕吐物等物质，包括但不限于：血 清、血浆、粪便、食品等的增菌液。优选的，所述的样品是食品。
[0038] 如本文所用，所述的"捕捉抗体"、"包被抗体"、"第一抗体"与"一抗"可互换使 用，都是指所述的可特异性地结合于空肠弯曲菌的单克隆抗体，其由小鼠杂交瘤细胞系 3G2D8H3G9,CGMCCNo. 8766 产生。
[0039] 所述的捕捉抗体可被包被在固相载体上。本发明对所采用的固相载体没有特别的 限制，只要其能够与捕捉抗体相偶联（连接）即可。例如，所述的固相载体为酶标反应板。
[0040] 如本文所用，所述的"检测抗体"、"第二抗体"、"酶标抗体"与"二抗"可互换 使用，都是指可特异性结合于空肠弯曲菌的另一株单克隆抗体，其由小鼠杂交瘤细胞系 4C9E1G7H3,CGMCCNo. 8457 产生。
[0041] 如本文所用，所述的"特异性"是指抗体只能结合于空肠弯曲菌；更特别地，指那些 能与空肠弯曲菌结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。
[0042] 本发明人进而根据双抗夹心法的原理，制备了一种可用于检测样品中空肠弯曲菌 的酶联免疫试剂盒。双抗夹心法常规的做法是将捕捉抗体固定于载体，然后捕捉抗体与抗 原反应，洗涤后再与检测抗体反应（所述的检测抗体携带可检测标记物，或可与携带可检 测标记物的物质结合），最后进行化学发光或酶联显色反应检测信号。并且，相对于单抗体 的竞争法来说，双抗体夹心法的测定效果更为优良，因而测定时只需很少的样品量。所以采 用双抗体夹心法无论在灵敏度、精确度、准确度、特异性及稳定性上更具有优势。
[0043] 具体而言，本发明的酶联免疫试剂盒含有：
[0044] (a)酶标反应板，所述的酶标反应板上包被有作为捕捉抗体的抗空肠弯曲菌单克 隆抗体3G2D8H3G9,所述的抗空肠弯曲菌单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系3G2D8H3G9,CGMCC No. 8766 产生；
[0045] (b)容器a，所述的容器a中装有作为检测抗体的抗空肠弯曲菌单克隆抗体 4C9E1G7H3，所述的抗空肠弯曲菌单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系4C9E1G7H3，CGMCC No. 8457 产生。
[0046] 作为本发明的优选方式，所述的检测抗体带有可检测的标记物。
[0047] 如本文所用，所述的"可检测的标记物"是指用于确定待检测样品中空肠弯曲菌的 存在与否以及存在的量的标志物。在确定了本发明的试剂盒所采用的捕捉抗体和/或检测 抗体后，可以采用本领域常规用于与检测抗体结合来进行检测的各种标记物。本发明对所 采用的标记物没有特别的限制，只要是能够与所述的检测抗体结合，且在适当处理后能够 准确地指示待检测样品中空肠弯曲菌的存在与否以及存在量的标记物均是可用的。所述的 标记物可直接被设置于检测抗体上；或者，所述的标记物也可被设置于特异性抗检测抗体 的抗抗体上，本领域人员可根据所采用的抗体的种类和特性，选择适宜的标记物。例如，所 述的标记物可以选自：辣根过氧化物酶（HRP)、碱性磷酸醋酶（AP)、葡萄糖氧化酶、P-D-半 乳糖苷酶、脲酶、过氧化氢酶、或葡萄糖淀粉酶。
[0048] 当采用如上所示的一些酶标记物时，还需要采用一些与相应的酶结合的底物，从 而可通过显色等方式来报导标记物的存在情况或者存在量。如本文所用，所述的"与标记物 相对应的底物"是指可被标记物所催化显色，用于显示检测抗体与空肠弯曲菌发生结合的 识别信号。所述的底物例如：用于辣根过氧化物酶的邻苯二肢（OPD)、四甲基联苯肢（TMB)、 ABTS;用于碱性磷酸酯酶的对硝基苯磷酸醋（p-nitrophenylphosphate,p-NPP)等等。本 领域人员可根据所采用的标记物的种类和特性，选择适宜的底物。
[0049] 作为本发明的优选方式，所述的检测抗体与标记物直接相连接。更优选地，所述的 标记物是HRP。与以生物素标记检测抗体、反应后再与链亲和素HRP反应相比较，直接在检 测抗体上标记HRP、反应结束后直接加底物显色更为简单便捷。
[0050] 为了获得定量结果，还可以在检测过程中设置含己知浓度的多个空肠弯曲菌的标 准品。对于标准品的设置方法可采用常规的方法。
[0051] 为了消除假阳性和假阴性，也可在检测过程中设置质控（对照）。作为本发明的 优选方式，所述的阳性对照为灭活的空肠弯曲菌菌液，所述的阴性对照为灭菌的布氏肉汤 (Brucellabroth)〇
[0052] 此外，为了使本发明的试剂盒在检测时更方便，所述的试剂盒中优选的还包含其 它一些辅助试剂，所述的辅助试剂是ELISA试剂盒中常规使用的一些试剂，这些试剂的特 性以及它们的配制方法均是本领域技术人员所熟知的。所述的试剂例如（但不限于）：显 色剂、洗涤液、终止液、增菌液、稀释液。
[0053] 此外，在所述试剂盒中还可包含使用说明书，用于说明其中装载的试剂的使用方 法。
[0054] 本发明的酶联免疫试剂盒的检测原理及有益效果如下：
[0055] 本发明的试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫法。当在酶标反应板上预包被有抗 空肠弯曲菌单克隆抗体（捕捉抗体），加入样品溶液或标准品后，再加入带有可检测的标记 物如辣根过氧化物酶的另一株抗空肠弯曲菌单克隆抗体（检测抗体），样品或标准品中存 在的空肠弯曲菌就会与酶标反应板上包被的捕捉抗体相结合，待加入检测抗体后，会形成 "抗体一抗原一酶标抗体"复合物，经过TMB(四甲基联苯胺）显色后会形成黄色物质，从而 可判断样品中空肠弯曲菌的存在与否以及存在的量。
[0056] 用酶标仪于450nm下测定吸光度值。阴性对照彡0. 1、阳性对照彡0. 3，实验结果 有效，否则结果判定为无效；检测孔OD值多0. 2时，判定为阳性；检测孔OD值介于0. 1-0. 2 之间时，判定为弱阳性；检测孔OD值< 0. 1判定为阴性。
[0057] 试验表明，本发明的空肠弯曲菌酶联免疫试剂盒，有较高的灵敏度和准确度。板间 误差小于5 %，板内CV小于3 %。与单增李斯特、猪霍乱沙门、鼠伤寒沙门、肠炎沙门、福氏 志贺、宋内氏志贺、鲍氏志贺、大肠杆菌〇157:H7、小肠耶尔森氏菌等共计91种病原细菌均 无交叉反应，此为本发明的最大创新点。
[0058] 总之，本发明的试剂盒对样品的前处理要求低，操作简便，检测极限为105cfu/ml， 特异性和稳定性好，并与大多数食源性致病菌都没有交叉反应。
[0059] 检测方法
[0060] 本发明还提供了一种利用本发明的试剂盒体外检测空肠弯曲菌的方法，包括以下 步骤：
[0061] (a)将待测样品加样于包被有捕捉抗体的固相载体，从而使待测样品中的空肠弯 曲菌与固相载体上的捕捉抗体结合，形成带有"空肠弯曲菌-捕捉抗体"二元复合物的固相 载体；所述的捕捉抗体是特异性地结合于空肠弯曲菌的单克隆抗体3G2D8H3G9,所述的