一种牛羊肉中18种磺胺类药物残留量的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食品安全检测技术领域，具体来说是一种牛或羊肌肉组织中18种磺 胺类抗生素残留量的检测方法。
【背景技术】
[0002] 牛肉和羊肉是消费量大的肉类食品，其营养丰富，富含蛋白质、脂肪、磷脂、多种维 生素、矿物质和钙、磷、铁、锌、铜、锰等多种微量元素。牛羊肉营养价值高，是人类营养的重 要来源，也是大宗的肉类消费品。
[0003] 磺胺类药物是人工合成的具有对氨基苯磺酰胺结构的一类抗生素，因其抗菌谱 广、价廉、使用方便而广泛用于畜牧业养殖中。但磺胺的超量使用，会在牛羊等动物体内蓄 积，并通过牛羊肉等食品蓄积于人体内，对人体造成潜在的抗药性、致畸、致癌等危害。目 前，我国以及美国、欧盟等大多数国家都对食品中磺胺类药物的最高残留量有明确规定。
[0004] 目前，食品中磺胺类药物残留的检测方法主要有：微生物检测法、分光光度法、免 疫分析法、分子印记分析法、毛细管电泳法、色谱技术以及联用技术等。微生物法和分光光 度法操作简单，价格低廉，但结果的准确性和灵敏度不高，不能满足实际样品的检测要求； 免疫分析法包括放射免疫技术、酶联免疫技术、荧光免疫测定技术和生物传感技术，免疫分 析法和分子印记分析法均具有适用范围广，灵敏度高，准确性高的优点，但同时检测多种药 物残留的能力弱，准确定量能力弱。近年来，毛细管电泳技术得到广泛应用，但由于其进样 量少，灵敏度受到限制，不能用于痕量物质的检测。色谱技术主要有高效液相色谱法、气相 色谱法、薄层色谱法和免疫色谱法，联用技术主要是高效液相色谱-质谱法和气相色谱-质 谱法。上述色谱技术均具有分辨率高，检测限低等优点，其中高效液相色谱法和高效液相色 谱-质谱法是磺胺类药物分析中应用最多的检测方法，但由于质谱法所用仪器昂贵，且对 检测要求高，高效液相色谱法采用紫外检测器时灵敏度低，选择性差。
[0005] 前处理方法直接影响检测方法的准确性和灵敏度，磺胺类药物前处理方法各有其 优缺点，其中QuEChERS作为一种快速、简单、廉价、高效、耐用和安全的样品处理方法，已经 在各领域得到广泛应用，但是由于原有欧盟和AOAC的方法主要是针对水果、蔬菜中农药的 检测，而肉类基质比较复杂，需对原有的配方进行创造性的改造方才适用。
[0006] 食品中存在的磺胺类抗生素属于痕量物质，发达国家多采用高效液相色谱仪-质 谱联用技术进行检测，该方法定性定量都很准确，但成本相对较高，在我国的推广使用有一 定局限性。
[0007] 磺胺类药物本身不发荧光，只能通过衍生的方式才能使其具有荧光特性。磺胺含 有光化学活性基团，能发生光化学反应，产生荧光物质，从而可用荧光检测器直接检测。
【发明内容】
[0008] 为了克服上述现有技术中磺胺类抗生素检测方法成本高、步骤繁琐等缺点与不 足，本发明的目的在于提供一种牛羊肉中18种磺胺类抗生素的检测方法。
[0009] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：牛羊肉中18种磺胺类药物残留量的 快速衍生高效液相色谱荧光检测法。步骤包括：
[0010] (1)将不含磺胺物质的牛肉或羊肉作为空白样品和待测样品5g分别加入50mL 离心管中，分别加入2. 5~Sg无水硫酸镁、1~3g乙酸钠，1~10%乙酸乙腈溶液（体积 比）20mL，PH3 ~5,10000 ~20000r/min 高速匀浆 2 ~5min，提取液 2000 ~4000r/min 离 心 5 ~IOmin0
[0011] (2)上清液采用加入含有多种吸附剂的净化材料涡旋混合2~4min净化除杂， 2000~4000r/min离心，吸取上清液IOmL于40~70°C减压或氮吹浓缩至小于0. 5mL，用 10~20%甲醇水溶液定容至lmL，摇匀后得过0. 22 μ m微孔滤膜到供试品溶液。
[0012] (3)该溶液采用液相色谱反相键和C18为填料的色谱柱分离、紫外光照射在线快 速衍生，根据色谱峰保留时间定性，标准曲线外标法定量，计算得到牛羊肉肌肉组织中18 种磺胺类兽药组分的残留量。
[0013] 进一步的，本发明所述磺胺类抗生素指磺胺醋酰（sulfacetamide，SCM)、磺胺啼 啶（sulfadiazine，SDZ)、横胺噻唑（sulfathiazole，STZ)、横胺吡啶（sulfapyridine， SF1D)、横胺甲基啼啶（sulfamerazine，SM1)、横胺二甲恶挫（sufamoxol，SMX)、横胺二 甲啼啶（sulfamethazine，SM2)、横胺甲氧 ?达嗪（sulfamethoxypyridazine，SMP)、横胺 氯 11达嗪（sulfachloropyridazine，SCP)、横胺甲恶唑（sulfamethoxazole，SMZ)、横胺 间甲氧啼啶钠（sulfamonomethoxine，SMM)、横胺二甲异恶唑（sulfisoxazole，SSX)、 苯酰磺胺（sulfabenzamide，SBZ)、磺胺苯吡唑（sulfaphenazole，SPP)、磺胺氯吡嗪 钠（sulfaclozine，SPZ)、横胺间二甲氧啼啶（sulfadimethoxine，SDM)、横胺喹恶啉 (sulfaquinoxaline，SQZ)、横胺硝苯（sulfanitran，SNT) 〇
[0014] 进一步的，本发明的特征在于，步骤（1)中，所述提取液为1~10%乙酸乙腈溶液， 其PH为3~5,高速匀浆条件为10000~20000r/min，离心条件是2000~4000r/min，离心 条件为5~10min。
[0015] 进一步的，本发明的特征在于，步骤⑵中，所述净化试剂包括MgS04400~ 2000mg、PSA或MCX 50~500mg、C18或C8或中性多壁碳纳米管或羟基型多壁碳纳米管或 羧基型多壁碳纳米管20~300mg、苯基或氨基或HLB、石墨化炭黑40~300mg等的组合物。
[0016] 进一步的，本发明的特征在于，步骤（3)中，所述的反相键和C18为填料的色谱柱 为ODS C18或其它以十八碳烷基键合硅胶为填料的液相色谱柱。
[0017] 进一步的，本发明的特征在于，所述的液相色谱的分离流动相体系为为甲醇-水， 乙腈-7K，异丙醇-7K，甲醇-乙腈-7K，甲醇-异丙醇-7K，乙腈-异丙醇-7K，以及上述 有机相和水相中均含有或单一相含有甲酸、乙酸、磷酸和三氟乙酸，甲酸、乙酸、磷酸和三氟 乙酸的比例（体积比）范围为〇· 005~2%。
[0018] 进一步的，本发明的特征在于，所述的液相色谱的分离流动相体为等度淋洗或梯 度淋洗，有机相的比例从1 %到1 〇〇 %。
[0019] 进一步的，本发明的特征在于，所述的液相色谱分析时的流速为0. 5~I. 3mL/ min〇
[0020] 进一步的，本发明的特征在于，所述的液相色谱柱的柱温为室温到50°C。
[0021] 进一步的，本发明的特征在于，所述的在线柱后光化学衍生条件为2~12瓦紫外 灯，波长190nm~400nm，反应线圈长度为5~25m，内径为0.1 mm~0. 5mm。
[0022] 进一步的，本发明的特征在于，所述的荧光检测波长为，激发波长为220~430nm， 发射波长为401~520nm〇
[0023] 进一步的，本发明的特征在于，本方法单种磺胺药物的检出限为0. 1~30.0 ug/ kg，加标回收率为60~120%。
[0023] 进一步的，与现有的肉类中磺胺类药物检测方法相比，本发明所述的方法的不同 之处在于，应用了适合于牛肉和羊肉基质的改良QuEChERS提取和净化试剂组合，与文献 "陈万勤，分析化学，2014年42卷573~578页"方法相比，大幅缩短了样品前处理的时间； 18种常用磺胺成分同时检测；另外，采用了紫外光在线衍生的方式检测，检测灵敏度有较 大提尚。
[0025] 本发明的有益技术效果是：本发明采用的样品前处理方法，包括提取和净化，其操 作简便，耗时短，在20~40min内完成；有机溶剂消耗少，减少了对环境的污染。
【附图说明】
[0026] 图1为18种磺