检测左卡尼汀中对映异构体含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种检测左卡尼汀中对映异构体含量的 方法。
【背景技术】
[0002] 左卡尼汀(Levocarnitine)，又名左旋肉碱，是食物的组成成份，广泛存在于自然 界中，山羊肉中含量最高，约为2.lg/kg，而植物性食物中含量极少甚至没有，被认为是类维 生素的营养素。人体本身也能合成左旋肉碱，成人体内约有20克左旋肉碱，主要分布于心 肌、骨骼肌中。
[0003]左卡尼汀于1905年由俄国科学家Gulewitsch和Krimberg从肌肉提取物中首次被 发现。经过多年的研究发展，左卡尼汀现已广泛应用于临床。其主要功能是促进脂类代谢， 它既能将长链脂肪酸带进线粒体基质，并促进其氧化分解，为细胞提供能量，又能将线粒体 内产生的短链脂酰基输出。补充左卡尼汀可缓解其因体内缺乏引起的脂肪代谢紊乱、骨骼 肌和心肌等组织的功能障碍。左卡尼汀结构如下：
[0004]
[0005]Zn下化7」S例个伃住一丨、于?土中心，所以只存在一个对映异构体，即右卡尼汀。据 文献报道，右卡尼汀对肉碱乙酰转移酶和肉碱脂肪酰转移酶有竞争性抑制作用，因此考虑 到用药的安全性，需要严格控制左卡尼汀中右卡尼汀的含量。
[0006]目前欧洲药典和美国药典中收载的左卡尼汀均未对其对映异构体进行控制，在文 献（J.Pharm.Biomed.Anal. 30(2002)209-218)、CN101723843A及CN102359995A等文献中，报 道了左卡尼汀衍生化之后用HPLC测定异构体的方法，但这些方法所用衍生化试剂成本较 高，因此有必要对检测左卡尼汀中对映异构体含量的方法进行更深入地研究。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是提供一种检测左卡尼汀中对映异构体含量的方法，利用苯甲酰卤 化合物作为衍生化试剂，具有较高的重复性、精密度和准确度。
[0008]本发明所述的左卡尼汀中对映异构体含量的方法，包括如下步骤：
[0009] (1)色谱条件：
[0010]色谱柱:CHIRALIE手性柱，250X4.6mm4^55ym;
[0011] 检测波长232nm;
[0012] 流动相:正己烷-无水乙醇-三氟乙酸；
[0013]流速：1 · 0~1 · 5ml/min;
[0014]运行时间：25min;
[0015] 空白溶液:不加左卡尼汀的衍生溶液；
[0016] (2)衍生化：
[0017] 称取左卡尼汀、右卡尼汀，分别置于反应瓶中，加入溶剂和衍生化试剂，60~70°C 搅拌0.5小时，减压蒸干，得到相应的衍生物；
[0018] (3)对映异构体贮备溶液的配置：
[0019]精密称取右卡尼汀衍生物，置于容量瓶中，用无水乙醇溶解，然后用无水乙醇稀释 至浓度为〇. 〇5mg/ml;
[0020] (4)系统适用性溶液的配置：
[0021] 精密称取左卡尼汀衍生物，置于容量瓶中，再加入对映异构体贮备溶液，用无水乙 醇溶解，然后用无水乙醇稀释至左卡尼汀衍生物浓度为1.0~2.Omg/ml、对映异构体衍生物 浓度为〇·0025~0·005mg/ml;
[0022] (5)供试品溶液的配置：
[0023]精密称取左卡尼汀衍生物，置于容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至浓度为1.0~ 2.Omg/ml；
[0024] (6)检测方法：
[0025] 取空白溶液1Ομ1注入液相色谱仪，记录图谱；取系统适用性溶液1Ομ1注入液相色 谱仪，重复6次，记录图谱;取供试品溶液?ομL注入液相色谱仪，记录图谱，记录峰面积，计算 左卡尼汀中对映异构体的含量。要求6次测定对映体衍生物峰面积的RSD< 5.0%，主峰峰面 积的RSD< 5.0 %，各峰保留时间的RSD< 2.0 %，各峰间分离度、理论板数均符合要求。
[0026] 其中：
[0027] 所述正己烷-无水乙醇-三氟乙酸流动相体积比为70:10~30:0.3。
[0028]所述溶剂为甲酸、乙酸或三氟乙酸，优选乙酸，以每克左卡尼汀/右卡尼汀计，溶剂 用量为5~10ml。
[0029] 所述衍生化试剂为具有如下结构的化合物：
[0030]
[0031]X为C1或Br;R为H、CH3或CH3CH2 ;R基团的位置为邻位、间位或对位。
[0032]所述衍生化试剂优选苯甲酰氯。
[0033]所述衍生化试剂的用量为左卡尼汀/右卡尼汀的1.2~2.0当量。
[0034]本发明的有益效果如下：
[0035] 本发明利用苯甲酰卤系列化合物作为衍生化试剂对左卡尼汀进行衍生化，然后采 用HPLC进行检测，以面积归一化法计算对映体的含量。本发明检测左卡尼汀中对映异构体 含量，有着较高的重复性、精密度和准确度，对控制左卡尼汀原料药的质量、保证用药安全 有重要意义。
[0036] 另外，本发明使用苯甲酰卤系列化合物作为衍生化试剂，成本较低，TLC法监测衍 生化过程显示，衍生化反应完全，左卡尼汀及其对映异构体全部转化为相应的衍生物，从而 保证了检测结果的准确。
【附图说明】
[0037]图1是实施例2中左卡尼汀苯甲酰氯衍生物的HPLC图谱；
[0038]图2是实施例2中右卡尼汀苯甲酰氯衍生物的HPLC图谱；
[0039]图3是实施例2中系统适用性溶液第一次实验结果的HPLC图谱；
[0040]图4是实施例2中检测左卡尼汀对映异构体含量的HPLC图谱；
[0041]图5是实施例3中检测左卡尼汀对映异构体含量的HPLC图谱；
[0042]图6是实施例4中检测左卡尼汀对映异构体含量的HPLC图谱。
【具体实施方式】
[0043]以下结合实施例对本发明做进一步描述。
[0044] 实施例1
[0045]检测方法：
[0046] 1、色谱条件：
[0047]色谱柱：CHIRALIE手性柱，250X4·6mm，粒径5μπι;检测波长232nm;流动相：正己 烷-无水乙醇-三氟乙酸（体积比70 : 30 : 0.3);柱温：30°C;流速：1.Oml/min;运行时间： 25min;进样量：10μ1;
[0048]空白溶液:不加左卡尼汀的衍生溶液。
[0049] 2、溶液的配置
[0050] 2.1右卡尼汀衍生物贮备溶液的配置：
[00511 精密称取右卡尼汀衍生物10mg，置10ml容量瓶中，用无水乙醇溶解至刻度，摇匀， 精密量取lml，置20ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得，浓度为0.05mg/ml;
[0052] 2.2系统适应性溶液的配置：
[0053] 精密称取左卡尼汀衍生物20mg，置20ml容量瓶中，先加少量无水乙醇溶解，再加入 右卡尼汀衍生物贮备溶液1.0ml，用无水乙醇稀释至刻度，混匀，左卡尼汀衍生物浓度为1. Omg/ml、对映异构体衍生物浓度为0.0025mg/ml。
[0054] 2.3供试品溶液的配置：
[0055]精密称取左卡尼汀衍生物20mg，置20ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度， 混匀，左卡尼汀衍生物浓度为1.〇mg/ml。
[0056] 3、检测方法：
[0057] 取空白溶液10μ1注入液相色谱仪，记录图谱，空白溶液应无干扰峰；
[0058] 取系统适应性溶液ΙΟμΙ注入液相色谱仪，重复6次，记录图谱，要求6次测定对映体 衍生物峰面积的RSD<5.0%，主峰峰面积的RSD<5.0%，各峰保留时间的RSD<2.0%，各峰 间分离度、理论板数均符合要求。
[0059] 取供试品溶液10μ1注入液相色谱仪，记录图谱，记录峰面积，计算左卡尼汀中对映 异构体的含量。
[0060] 实施例2
[0061]以苯甲酰氯为衍生化试剂检测左卡尼汀中对映异构体含量：
[0062] 1、左卡尼汀衍生化反应
[0063] 称取左卡尼汀161mg，置于反应瓶中，加入1.6ml乙酸和168mg(1.2当量)苯甲酰氯， 60~65°C搅拌0.5小时，减压蒸干，得左卡尼汀苯甲酰氯衍生物。
[0064] 2、右卡尼汀衍生化反应
[0065]称取右卡尼汀161mg，置于反应瓶中，加入1.6ml乙酸和168mg(1.2当量)苯甲酰氯， 60~65°C搅拌0.5小时，减压蒸干，得右卡尼汀苯甲酰氯衍生物。
[0066] 3、按照实施例1中检测方法进行检测，系统适用性实验测定结果见表1:
[0067]表1系统适用性实验测定结果
[0068]
[0069]图谱见图1~4。其中，图1是左卡尼汀苯甲酰氯衍生物的HPLC图谱；图2是右卡尼汀 苯甲酰氯衍生物的HPLC图谱。图1、图2中检测结果见表2。
[0070]表2图1、图2检测结果
[0071]
[0072]左卡尼汀样品中对映异构体含量为0.026wt%，结果见表3,图谱见图4。
[0073]表3以苯甲酰氯为衍