一种含兰索拉唑原料药的杂质检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物杂质检测方法，具体是兰索拉唑原料药与制剂的有关物质测定 法。 技术背景
[0002] 兰索拉唑原料药为本公司自主开发并生产，所开发用于临床的剂型有冻干粉针剂 (注射用兰索拉唑），规格30mg;还有兰索拉唑肠溶片规格15mg.临床适应症为胃溃疡、十二 指肠溃疡、反流性食管炎、卓-艾(Zollinger-Ellison)综合征（胃泌素瘤），当前药典及相关 文献收载的有关物质均为高效液相色谱法，
[0003] 本公司原报批的有关物质测定法如下
[0004] 色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇一水一三乙胺一磷酸（700 : 300:5:1.5)，用磷酸溶液（1 - 10)调节pH值至7.3为流动相;检测波长为284nm;理论板数按 兰索拉唑计算应不低于1500。溶液配制称取样品（或制剂称取内容物适量(约相当于兰索拉 唑50mg))，置25ml棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得供试品溶液，另量取供试品 溶液lml，加流动相稀释至100ml，摇匀，作为对照液。照上述液相色谱条件，取对照溶液10μ 1，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为记录仪满量程的10%~ 20% ;再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μ1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成 分峰保留时间的2倍。杂质控制:供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大 于对照溶液的主峰面积的一半(0.5%)，各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液的主峰面积 (1%)〇
[0005] 含量测定法:色谱条件与有关物质测定法一致
[0006] 溶液配制：取自制样品约50mg，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并向稀 释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀作为供试品 溶液;另称取兰索拉唑对照品约50mg，同法配制对照品溶液。精密量取上述供试液与对照品 溶液各1〇μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算，按干燥品计算，含兰索 拉唑应不低于99.0%。
[0007] 现有技术缺陷
[0008] (1)甲醇系统粘性强，柱压高达225bar，色谱柱长时间承受高压，会导致柱床填料 流失，柱效降解快，色谱峰拖尾。
[0009] (2)有关物质测定供试液浓度高(2.Omg/ml)，色谱柱有超容量风险，主成分峰对称 性差，中主成分峰的对称因子为2.30(应为0.95~1.05)不符合要求，且杂质D与E重合，杂质 B与主成分峰无法基线分离。系统不符合要求，测定的结果无确准性可言。
[0010] (3)杂质限度的控制，最大单杂不过0.5%，总杂不过1.0%，不符合《化学药物杂质 研究的技术指导原则》的相关规定，标准有待提升。
[0011] (4)含量测定溶液配制:现有一般实验室天平能准确称量至10mg，称样50mg采用两 步稀释到测定浓度，操作复杂，多步稀释会导致测结果偏差大。
【发明内容】
[0012]根据以上运行不便，本发明提供了如下改进。
[0013] 含量与有关物质测定法的色谱条件一致
[0014] 色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈一水一三乙胺(400:600:1)， 用磷酸溶液（1-10)调节pH值至7.3为流动相;检测波长为284nm;理论板数按兰索拉唑计算 应不低于4000。
[0015] 含量测定法的溶液配制:精密称取兰索拉唑原料药15mg(制剂称取内容物或细粉 约相当于兰索拉唑15mg)，置100ml棕色量瓶中，加流动相超声2min使溶解并稀释至刻度，摇 匀作为供试液（制剂过滤）；另精密称取兰索拉唑国标对照品15mg，置100ml棕色量瓶中，加 流动相适量，超声2min溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取上述两种溶液 各1〇μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算，原料药按干燥品计算，含兰 索拉唑应不低于99.0% ;片剂与注射剂按标示量计算含兰索拉唑应为95.0~105.0。
[0016] 有关物质测定法的溶液配制：
[0017] (1)称取含兰索拉唑原料药(制剂粉末)置于棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释制成 质量浓度为lmg/mL兰索拉唑的溶液作为供试品溶液，（制剂供试品溶液过滤，取续滤液作为 供试品溶液）。
[0018] (2)量取供试品溶液适量，加流动相配制成含质量浓度为lyg/mL兰索拉唑的溶液 作为对照溶液。
[0019] ⑶分另丨」称取杂质六1〇11^、134〇11^、01〇11^41〇11^于同一个100ml的量瓶中，加甲醇溶 解并稀释至刻度，另精密量取1.0ml加甲醇稀释至l〇ml，作为混合杂质储备液，（所述的杂质 A为2-[(RS)_[[三甲基1氧化4-(2、2、2_三氟乙氧基）吡啶-2-yl]甲基]亚磺酰基]-1H-苯并 咪唑;所述的杂质B为2-〔〔〔3_甲基_4(2、2、2_三氟乙氧基)-2-吡啶基〕甲基〕磺酰基〕-1H-苯 并咪唑;所述的杂质D为羟基苯并咪唑;所述的杂质E为硫醇基苯并咪唑。）
[0020] (4)另取lml混合杂质储备液加供试液稀释至10ml作为系统适用性溶液，照含量测 定项下的色谱条件，取系统适用性溶液1〇μ1，注入液相色谱仪，控制杂质B与兰索拉唑成分 峰的分离度应不低于8.0,色谱中各杂质的出峰顺序为D、E、A、兰索拉唑主成分峰、Β，兰索拉 P坐成分峰保留时间为l〇_13min(进一步优选为兰索拉唑成分峰保留时间为llmin。）。
[0021] (5)另取对照溶液10ul注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，控制兰索拉唑成分峰的 峰高为记录仪满量程的10%。
[0022] (6)再量取供试品溶液10μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图至兰索拉唑成分峰保留 时间的3.5倍，即可完成含兰索拉唑原料药的杂质检测。
[0023] (7)结果计算:供试品溶液图谱中如显杂质峰，扣除杂质D之前的溶剂或辅料峰外， 杂质D、A的峰面积不得过对照液主峰面积的1倍(0.1%);杂质Ε的峰面积乘以校正因子0.4 后不得过对照液主峰面积的1倍（0.1%);杂质B的峰面积不得过对照液主峰面积的4倍 (0.4% );任意未知单杂不得过对照液主峰面积的1倍(0.1% );所有杂质峰面积之和不得过 对照液主峰面积的5倍(0.5 % )。
[0024]步骤(3)中，所述的混合杂质储备液中，2-[ (RS)-[[三甲基1氧化4-(2、2、2-三氟乙 氧基)吡啶-2-y 1 ]甲基]亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的浓度为1 Oyg/mL; 2-〔〔〔 3-甲基-4 (2、2、2- 三氟乙氧基)-2-吡啶基〕甲基〕磺酰基〕-1H-苯并咪唑的浓度为40yg/mL;羟基苯并咪唑的浓 度为l〇yg/mL;硫醇基苯并咪唑的浓度为10yg/mL。
[0025] 含兰索拉唑原料药包括注射用兰索拉唑；口服兰索拉唑肠溶片。
[0026] 根据剂型不同，杂质控制限度见列表1。
[0027] 图表 1
[0028]
[0030] 采用本发明的技术方案具有如下有益效果：
[0031] (1)兰索拉唑有关物质测定法新开发的乙腈-水系统，该系统不仅减轻了色谱柱的 承受压力(新开发的系统色谱柱承受压力为123.2bar)。
[0032] (2)在新开发的系统下主成分的保留时间约为llmin，峰型更尖锐，对称性好(对称 因子为0.94