一种治疗血尿的中药组合物的质量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药复方制剂的质量测定方法，特别是涉及一种治疗血尿的中药 组合物的质量检测方法。
【背景技术】
[0002] 治疗血尿的中药组合物的处方是西双版纳州景洪市中傣医医院名老傣医波玉波 应用40余年之家传秘方，临床治疗肾性水肿、尿血、血尿。经临床反复应用，疗效确切，未发 现不良反应及毒副作用。于1996年自愿献给云南理想药业有限公司开发研究，并于1999年4 月12日经云南省卫生厅批复同意按药品标准滇Q/WS 1333-1998生产;按国家药品监督管理 局《关于强化中成药国家标准管理工作的通知》的要求，上升为国家药品标准，2002年11月 30日取得国家药品标准（试行）颁布件，国家药品标准（试行）号为WS-10793 (ZD-0793)-2002。2003年6月按照《药品注册管理办法》的要求，提出药品试行标准转为正式标准的注册 申请，于2012年3月19日经国家食品药品监督管理局审查，同意试行标准转为正式标准。标 准号：WS-10793(ZD-0793)-2002-2012Z。
[0003] 傣医传统医药学具有几千年史，在理论方面以"四塔"（风、火、水、土)理论为核心， 来研究人体的生理现象，病理变化，指导临床辨病论治和用药。"四塔"，古傣语称为"塔都档 细"，现简称为"四塔"即：（1)瓦药塔一指"风"，似中医"气"的功能。（2) "爹卓塔菲"（火），火 似中医先后天"火"之功能。（3) "阿波塔难"（水、血），在人体内具有"湿"的性质则为"7K"主 管。（4)是"巴塔尾塔"（土），似中医脾胃后天之本"土"的功能。傣族医学认为，疾病的发生， 是由于内因或外因而致人体内的"四塔"功能异常不足或有余;偏盛或偏衰而致。故此，治病 贝1J以调乎"四塔"为主。对于"血尿"一病则认为体内的"塔菲"（火)过多，水不足不能制火，火 旺饶灼血而出血。方中所用"牙糯秒"即肾茶性凉味苦，功在于清泻"塔菲"（火毒）、利水、止 血消肿，为治肾炎水肿，尿血、血尿之要药。"哈哈"即白茅根性平味甜，傣族医学认为性平味 甜之药专入水血而治水血之病，故白茅根具有清火止血滋水之功。助前药发挥更大作用。 "牙行多"即小蓟性凉微苦微甜，性凉泻火毒，清血热止血，也助上二药之力。"吻埋勒"即黄 柏性凉味苦专入下盘(下盘即肾、膀胱、大小肠、子宫，下肢等）。血尿则为下盘"爹卓塔菲"过 盛，故黄柏专消下盘火毒，与上诸药共同发挥泻火毒，得小便，止血止痛之功。
[0004] 然而在国家正式标准中鉴别项有两个，采用薄层色谱法鉴别了其中的黄柏和白茅 根。只用黄柏和白茅根的鉴定作为该含片质量控制方法中的测定指标，不能很好的反映出 治疗血尿的中药组合物的质量优劣。
【发明内容】
[0005] 本发明提供的技术方案是一种治疗血尿的中药组合物的质量检测方法，中药组合 物包括包括黄柏、白茅根、肾茶和小蓟中蒙花苷，对黄柏、白茅根、肾茶和小蓟中蒙花苷鉴 别；
[0006] 所述黄柏鉴别步骤如下：
[0007] 取治疗血尿的中药组合物4g，加氨试液2ml，三氯甲烷10ml，超声处理15分钟，滤 过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml溶解，作为供试品溶液，另取黄柏对照药材O.lg，加浓氨试液 lml，三氯甲烷5ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml溶解，制成对照药材溶 液，按照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲醇:异丙醇:浓氨试液= 6:3:1.5:1.5:0.5为展开剂，置氨蒸气饱 和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相 应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0008] 所述白茅根鉴别步骤如下：
[0009] 取治疗血尿的中药组合物2g，加乙酸乙酯20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干， 残渣加乙酸乙酯lml使其溶解，作为供试品溶液，另取白茅根对照药材0.5g，加乙酸乙酯 10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使其溶解，作为对照药材溶 液，按照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各8~10μ1，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以二氯甲烷：乙酸乙酯=4:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇液， 105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色 的斑点；
[0010]所述肾茶鉴别步骤如下：
[0011] 取治疗血尿的中药组合物5g，加水20ml，超声处理25分钟，离心，取上清液用乙酸 乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯lml使其溶解，作为供 试品溶液，另取肾茶对照药材2g，加水40ml，煮沸30分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，用乙酸乙 酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯lml使其溶解，制成对照 药材溶液，按照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5~10μ1，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲酸= 20:20:1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光 灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；
[0012] 所述小蓟中蒙花苷鉴别步骤如下：
[0013] 取治疗血尿的中药组合物〇. 5g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残 渣用水3ml使溶解，加在聚酰胺柱上，用水50ml洗脱，弃去水洗脱液，再用乙醇50ml洗脱，收 集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使其溶解，作为供试品溶液，另取蒙花苷对照品，加甲醇制 成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，按照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药 材溶液各ΙμL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酰丙酮:丁酮：乙醇：水= 1:3:3:13为展开 剂，展开，取出，瞭干，喷以三氯化铝试液，瞭干1小时，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在 与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0014] 本发明还提供一种对黄柏中的盐酸小檗碱和肾茶中的迷迭香酸进行含量测定的 方法，含量测定方法采用高效液相色谱法，步骤如下：
[0015] 所述黄柏中的盐酸小檗碱的含量测定：
[0016] 高效液相色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙 腈:0.1 %磷酸溶液=45:55为流动相;每100ml的0.1 %磷酸溶液加十二烷基磺酸钠0. lg，检 测波长为349nm，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000;
[0017] 对照品溶液的制备:取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸：甲醇=1:100的混合 溶液制成lml含0. lmg的溶液，即得；
[0018] 供试品溶液的制备：取装量差异项下的治疗血尿的中药组合物，混匀，取0.3g，精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸：甲醇=1: 1〇〇的混合溶液50ml，称定重量，超声处 理40分钟，放冷，用盐酸：甲醇=1:100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液， 即得；
[0019] 测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定， 即得；
[0020] 所述肾茶中的迷迭香酸的含量测定：
[0021 ]高效液相色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙 腈为流动相A，以0.1 %磷酸溶液为流动相Β，流动相梯度为Omin，流动相Α为9 %，流动相Β为 91% ;流动相梯度为40min，流动相A为30%，流动相B为70% ;检测波长为330nm理论板数按 迷迭香酸峰计算应不低于4000;
[0022] 对照品溶液的制备：取迷迭香酸对照品，精密称定，加50%甲醇制成lml含20yg的 溶液，即得；
[0023] 供试品溶液的制备:取治疗血尿的中药组合物，混匀，取2g，精密称定，置具塞锥形 瓶中，精密加入50 %甲醇50ml，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用50%甲醇补足 减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0024] 测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各ΙΟμΙ，注入液相色谱仪，测定， 即得
[0025]治疗血尿的中药组合物的每粒含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于2.5mg本品每粒 含肾茶以迷迭香酸计，不得少于0.08mg。
[0026] 与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
[0027] 1.本发明中，薄层色谱法定性检测出治疗血尿的中药组合物的中白茅根、黄柏、肾 茶和小蓟，该方法简单、稳定，作为治疗血尿的中药组合物的定性检测方法。高效液相色谱 法测定黄柏中的盐酸小檗碱和肾茶中的迷迭香酸的含量，方法简便，重复性和稳定性好，结 果准确可靠，作为治疗血尿的中药组合物的含量检测方法，增强了整个质量控制方法的合 理性和可靠性。
[0028] 2.对白茅根的薄层色谱鉴别进行了优化，斑点展开效果好。
【附图说明】
[0029] 图1:展距1 Ocm，温度:25°C，湿度:38%，展开剂:二氯甲烷：甲醇=9:1 [0030] 1.阴性样品缺白茅根;2.白茅根对照药材批号：121145-200502;3.治疗血尿的中 药组合物的批号：20150101; 4.治疗血尿的中药组合物的批号：20141015; 5 .治疗血尿的中 药组合物的批号= 20150104;
[0031] 图2:展距1 Ocm，温度:26°C，湿度:36 %，展开剂:二氯甲烷:乙酸乙酯=4:1 [0032] 1.阴性样品缺白茅根;2.白茅根对照药材批号：121145-200502;3.治疗血尿的中 药组合物的批号：20150101; 4.治疗血尿的中药组合物的批号：20141015; 5 .治疗血尿的中 药组合物的批号= 20150104;
[0033] 图3:展距9cm;温度：15°