成分，且结构明确，其中丹酚酸B为注射用丹参多酚酸中主要 活性成分，具有抗血小板凝集，抗血栓，抗脑微粒体脂质过氧化和清除自由基的作用）定量 的方式，从整体和关键组分两方面共同实现质控标准的提升。相比于现有技术，不仅全面而 特定定量的确定了产品的质量可控性，而且由于UPLC技术的引入，大大缩短了现有的普遍 采用HPLC技术的测定时间，使得全产品指纹图谱的复杂性表征得以实现。同时，对于具体 的特定指证成分选用与HPLC相结合的组合测定方式，也在充分保证产品质量，定性产品性 能之外兼顾了测定成本的节约。检测结果具有很好的重现性和稳定性，且利于工业产业推 广，适合作为产品质控标准大规模实施。
【附图说明】
[0138] 图1不同色谱柱对丹参多酚酸提取物分离的液相色谱图
[0139] 图2不同洗脱梯度对丹参多酚酸提取物样品分离的液相色谱图（检测波长330nm ; 图注为ACN比例）
[0140] 图3不同洗脱梯度对丹参多酚酸提取物样品分离的液相色谱图（检测波长330nm ; 图注为有机相比例）
[0141] 图4不同洗脱梯度对丹参多酚酸提取物样品分离的液相色谱图（图3局部放大， 检测波长330nm)
[0142] 图5丹参多酚酸提取物样品UPLC色谱图（280nm)
[0143] 图6丹参多酚酸提取物样品qTOF-MS总离子流图
[0144] 图7最终色谱条件下对丹参多酚酸提取物的分离色谱图（288nm)
[0145] 图8对照品与丹参多酚酸样品HPLC色谱图（1.迷迭香酸；2.紫草酸；3.丹酚酸 B)
[0146] 图9不同检测波长对丹参多酚酸混合对照品分离的液相色谱图（自上而下，依次 是（A) 250nm ; (B) 280nm ; (C) 330nm ; (D) 360nm.)
[0147] 图10 21批丹参多酚酸提取物的UPLC/MS紫外谱图重叠图（280nm)
[0148] 图11 3批丹参多酚酸提取物含量测定HPLC叠加图
【具体实施方式】
[0149] 实施例1
[0150] 步骤1 :采用超高效液相多波长可见紫外检测法，建立丹参多酚酸提取物数字化 定量指纹图谱；
[0151] (1)仪器与试药：Waters UPLC system,串联Xevo G2qT0F质谱仪。丹参多酉分酸提 取物由天士力之骄药业有限公司提供。乙腈和甲醇为色谱纯（默克公司）、甲酸为色谱纯 (sigma)、超纯水。对照品丹参素钠、原儿茶酸、丹酸酸B、迷迭香酸均购自中国食品药品检定 研究院，紫草酸（天津马克生物技术）、丹酚酸D (天津一方科技有限公司）、丹酚酸A (南通 飞宇）、丹酚酸-LM(天士力公司制备）。
[0152] (2)对照品溶液的制备：
[0153] 分别称取丹酚酸B对照品约5mg ;迷迭香酸、紫草酸对照品各约3mg ;丹参素钠、原 儿茶醛、丹酚酸D、丹酚酸A、丹酚酸-LM对照品各约2mg，于5mL容量瓶，以超纯水定容，摇 匀，过微孔滤膜（0.22 μ m)，取续滤液，即得。
[0154] (3)供试品溶液的制备：分别精密称定21批丹参多酚酸提取物，样品溶于超纯水， 定溶至10ml容量瓶中，溶解后过0. 22 μ m滤膜，稀释成浓度为lmg/mL的溶液；
[0155] (4)指纹图谱的测定：精密吸取供试品溶液2 μ L，注入超高效液相色谱仪，记录色 谱图，即得；
[0156] 其中，色谱条件如下：
[0157] 色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18, 1. 8 μ m, 2. lx 150mm ;
[0158] 流动相：溶剂A冰，含〇. 2%甲酸；溶剂B :乙腈，含3%甲醇；
[0159] 梯度洗脱：
[0160] 0-3min, 12-18 % B ；3-15min, 18 % B ；15-17min, 18-20 % B ；17-25min, 20 % B ； 25-28min, 20-23 % B ；28-35min, 23 % B ；35-40min, 23-40 % B ；4〇-45min, 40-95 % B ； 45-50min, 95% B ；
[0161] 温度：30°C ;
[0162] 流速：0· 2ml/min ;
[0163] 色谱图光谱采集范围：190~400nm。
[0164] 步骤2 :利用质谱对步骤1中指纹图谱中的峰进行指认，确定紫外检测共有的指纹 峰；
[0165] 质谱条件如下：
[0166] qTOF采用（_)-ESI离子源，雾化气为高纯氮气，碰撞气为高纯氦气；
[0167] 扫描范围：m/z100 -1200 ;
[0168] 碰撞能量：6eV ;
[0169] MSE 梯度裂解能：20-40eV ;
[0170] 用上述色谱条件对21批丹参多酚酸提取物样品进行UPLC指纹图谱分析。对各样 品的23个共有峰紫外光谱图进行对比分析。所得紫外谱图如图10所示。
[0171] 利用"中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统4. 0 "软件计算各批次指纹图 谱的相似度。
[0172] 采用表1中所示的系统指纹定量法标准，对21批样品进行质量评价。结果见表6 :
[0173] 表6.计算中药系统指纹定量法第2级评价结果
[0174]
[0175]
[0176] 结果分析：S1-S7批次质量不合格，与这七批为生产批次较早的过期产品相吻合， 表明该方法能较好的鉴定出药品质量，很好的区分出质量差异较大，生产批次较早的过期 产品，可用于对生产药品的质量进行检验。
[0177] 步骤3 :采用高效液相色谱可变波长检测法对步骤2中指认出的三个含量较大、活 性比较明显且结构明确的指标性成分含量进行测定。
[0178] (1)仪器和试药：Agilent 1100高效液相色谱仪（Agilent Technologies, Germany)，配有四元泵、自动进样器、柱温箱以及VWD检测器；METTLER TOLEDO电子天平（XS型）；5批丹参多酚酸（天津天士力之骄药业有限公司提供）；丹酚 酸B对照品（USP，纯度95%，批号：F0M013);迷迭香酸对照品（USP，纯度99. 4%，批号： RM076);紫草酸对照品（天津天士力中药所提供，纯度95. 37%，批号：12092801);甲醇 (色谱纯，Merck);乙腈（色谱纯，Merck);超纯水；甲酸（试剂级，Sigma-Aldrich)。
[0179] (2)供试品溶液的制备：精密称取3批丹参多酚酸提取物各15mg，加初始流动相溶 解并定容到25mL，摇匀，即得。
[0180] (3)混合对照品溶液的制备：分别精密称取迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B对照品各 适量，加初始流动相制成混合对照品溶液，得迷迭香酸质量浓度为120. 50 μ g/mL,紫草酸质 量浓度为121. 10 μ g/mL，丹酚酸B质量浓度为1520. 00 μ g/mL的混合对照品溶液。
[0181] (4)精密吸取供试品溶液2μ L，注入高效液相色谱仪，采用外标峰面积法，同时测 定供试品溶液中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸Β的含量；
[0182] 其中，色谱条件如下：
[0183] 色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(4. 6X250mm, 5μπι);
[0184] 流动相：A相：水，含0. 5%的甲酸；B相：含2%的甲醇和0. 5%的甲酸；
[0185] 梯度洗脱：0 ~40min，20 % Β ;40 ~50min，20-70 % Β ;
[0186] 流速：lmL · min-1 ;
[0187] 柱温：3(TC;
[0188] 检测波长288nm;
[0189] 测定结果见表7, HPLC叠加图见图11。
[0190] 表7. 3批丹参多酚酸提取物中各成分含量
[0191]
[0192] 实施例2
[0193] 步骤1 :采用超高效液相多波长可见紫外检测法，建立丹参多酚酸提取物数字化 定量指纹图谱；
[0194] (1)对照品溶液的制备：
[0195] 分别称取丹酚酸B对照品约2. 5mg ;迷迭香酸、紫草酸对照品各约1. 5mg ;丹参素 钠、原儿茶醛、丹酚酸D、丹酚酸A、丹酚酸-LM对照品各约lmg，于5mL容量瓶，以超纯水定 容，摇匀，过微孔滤膜（0. 22 μ m)，取续滤液，即得。
[0196] (2)供试品溶液的制备：分别精密称定10批丹参多酚酸提取物，样品溶于超纯水， 定溶至10ml容量瓶中，溶解后过0. 22 μ m滤膜，稀释成浓度为5mg/mL的溶液；
[0197] (3)指纹图谱的测定：精密吸取供试品溶液1 μ L，注入超高效液相色谱仪，记录色 谱图，即得；
[0198] 其中，色谱条件如下：
[0199] 色谱柱：Waters HSS T3C1S，1. 7 μ m，2. lx 150mm ;
[0200] 流动相：溶剂A冰，含〇. 1 %甲酸；溶剂B :乙腈，含2%甲醇；
[0201] 梯度洗脱：
[0202] 0-3min, 12-18 % B ；3-15min, 18 % B ；15-17min, 18-20 % B ；17-25min, 20 % B ； 25-28min, 20-23 % B ；28-35min, 23 % B ；35-40min, 23-40 % B ；4〇-45min, 40-95 % B ； 45-50min, 95% B ；
[0203] 温度：40°C ;
[0204] 流速：0· 3ml/min ;
[0205] 色谱图光谱采集范围：190~400nm。
[0206] 步骤2 :利用质谱对步骤1中指纹图谱中的峰进行指认，确定紫外检测共有的指纹 峰；
[0207] 质谱条件如下：
[0208] qTOF采用（_)-ESI离子源，雾化气为高纯氮气，碰撞气为高纯氦气；
[0209] 扫描范围：m/z100 -1200 ;
[0210] 碰撞能量：6eV ;
[0211] MSE 梯度裂解能：20-40eV ;
[0212] 用上述色谱条件对10批丹参多酚酸提取物样品进行UPLC指纹图谱分析。对各样 品的23个共有峰紫外光谱图进行对比分析。
[0213] 利用"中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统4. 0 "软件计算各批次指纹图 谱的相似度。
[0214] 采用表1中所示的系统指纹定量法标准，对10批样品进行质量评价。
[0215] 步骤3 :采用高效液相色谱可变波长检测法对步骤2中指认出的三个含量较大、活 性比较明显且结构明确的指标性成分含量进行测定。
[0216] (1)供试品溶液的制备：精密称取丹参多酚酸提取物，加初始流动相溶解并定容 到1. 2mg/mL，摇匀，即得。
[0217] (2)混合对照品溶液的制备：分别精密称取迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B对照品各 适量，加初始流动相制成混合对照品溶液，得迷迭香酸质量浓度为100 μ g/ml,紫草酸质量 浓度为15