9] 2)建立分析条件:取黄腐酸钠标准品溶液300yL于100mL容量瓶中，用9-lOOOml盐 酸定容，在紫外分光光度计上扫描，扫描波长范围为200~400nm，其紫外吸收波谱如图1所 示，其吸光度在204nm处最大，以该波长作为检测波长；
[0030] 3)建立标准曲线：以步骤1)的黄腐酸钠标准品溶液和9- 1000ml盐酸分别配置浓 度为4、5、6、7、8μg/ml的标准品溶液，以9-lOOOml盐酸作空白对照，于检测波长下测其吸光 度；以黄腐酸钠的吸光度(Y)为纵坐标，以黄腐酸钠的浓度(X)为横坐标建立标准曲线，其线 性回归方程为Y = 〇. 0537X+0.1515，相关系数r = 0.9998，表明黄腐酸钠在4.0~8. Oμg/ml的 范围内呈现出良好的线性关系；
[0031 ] 4)供试品为黄腐酸钠原料药，将供试品与9-lOOOml盐酸分别配成4、6、8μg/ml的 供试品溶液，以9-lOOOml盐酸作空白对照，于204nm下测其吸光度，将吸光度值代入标准曲 线，计算供试品溶液浓度。
[0032] 实施例2
[0033] 本实施例的黄腐酸钠含量测定的方法，包括以下步骤：
[0034] 步骤1)~步骤3)同实施例1;
[0035] 4)取黄腐酸钠胶囊20粒(标示量10mg/粒），将其内容物置于100ml烧杯中，加入9- 1000ml盐酸，超声10min，使内容物溶解，放冷，滤过，精密量取续滤液，用溶出介质定容至 100ml，得到黄腐酸钠标示浓度为2mg/mL的储备液;分别取储备液20(^1^、30(^1^、40(^1^，用9 -1000ml盐酸定容到100mL，摇勾，分别配成浓度为4yg/mL、6yg/mL、8yg/mL的供试品溶液； 以9-lOOOml盐酸作空白对照，于204nm下测其吸光度，将吸光度值代入标准曲线，计算供试 品溶液浓度。
[0036] 试验例1
[0037] 本试验例验证实施例1、2的标准曲线的精密度。同一天内，在不同的时间点，重复 测定3次高、中、低三种浓度(4、6、8μg/ml)的黄腐酸钠标准品溶液的吸光度，进而得出本发 明含量测定方法的日内精密度数值结果;各浓度溶液连续测定3日，进而得出本发明含量测 定方法的日间精密度数值结果，结果如表1和表2所示。
[0038] 表1本发明黄腐酸钠含量测定方法的日内精密度试验结果
[0040]表2本发明黄腐酸钠含量测定方法的日间精密度试验结果
[0041]
[0042] 由表1及表2的试验结果可知，高、中、低三种浓度(4、6、8μg/ml)的黄腐酸钠标准品 溶液的日内精密度数值小于1.0%、日间精密度数值小于2.0%，表明本发明的黄腐酸钠含 量测定方法的精密度好，有较好的重现性。
[0043] 试验例2
[0044] 本试验例检测本发明黄腐酸钠含量测定方法的定量限(Limit of quantitation， L0Q)。定量限为指样品物质中被测物可以被定量地检测出来的最低量或浓度，L0Q是一种限 度检验效能指标，它反映方法的定量检测能力是否可靠。采用标准偏差法即用空白样品进 行分析，求得方法背景响应值下的标准偏差S空，再将10倍空白标准偏差对于于标准曲线上 的浓度值作为LOQqLOQz 10 X standard deviation/slope = 10〇/S，〇:响应值的标准差(通 过一组空白样品的分析或根据校正曲线），S为标准曲线的斜率，其中空白样品的标准偏差 值也可以用不同浓度的标准样品制出的标准曲线的标准偏差Sy/x代替。
[0045] 试验结果如表3所示，经计算得L0Q = 0.3426μg/ml。
[0046] 表3黄腐酸钠含量测定方法的定量限试验结果
[0047]
[0048] 试验例3
[0049] 本试验例中，分别量取实施例1的供试品溶液10ml(浓度分别为4、6、8μg/ml)，加入 相应浓度黄腐酸钠标准品溶液l〇ml，按供试品溶液项下方法制备供试品溶液，在204nm处测 定吸光度，由回归方程计算回收率，结果如4所示。
[0050] 表4黄腐酸钠回收率实验结果
[0053]由表4的试验结果可知，高、中、低三种浓度(4、6、8μg/ml)的黄腐酸钠的回收率均 大于98.0%，RSD值小于1.0%，表明本发明的黄腐酸钠含量测定的方法的回收率符合要求。
[0054] 试验例4
[0055] 本试验例检测实施例2的黄腐酸钠胶囊的含量测定结果，每个实施例对应标示浓 度的含量测定平行进行3次，结果如表5所示。
[0056] 表5黄腐酸钠胶囊中黄腐酸钠含量测定试验结果
[0057]
[0058] 由表5的试验结果可知，黄腐酸钠胶囊（乌金石胶囊）中黄腐酸钠的含量范围为 97.0 %~103.0 %，RSD值低至0.4850 %，具有较高的精密度;对于乌金石胶囊制剂，可将黄 腐酸钠的含量标准定为95%~105%。
【主权项】
1. 一种黄腐酸钠含量测定的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 以稀盐酸为溶剂，将黄腐酸钠标准品配制成标准品溶液;采用紫外分光光度法，以稀 盐酸为空白对照，建立标准曲线； 2) 将供试品与稀盐酸配制供试品溶液，以稀盐酸为空白对照，采用紫外分光光度法检 测吸光度，代入标准曲线中，即得供试品溶液的浓度； 步骤1)和步骤2)中，所述稀盐酸由9ml浓盐酸稀释至1000ml制备而成。2. 如权利要求1所述的黄腐酸钠含量测定的方法，其特征在于，步骤1)中，标准品溶液 的浓度为4~8yg/mL。3. 如权利要求1所述的黄腐酸钠含量测定的方法，其特征在于，步骤1)中，标准曲线的 线性回归方程为Y = 〇.〇537X+0.1515,相关系数r = 0.9998。4. 如权利要求1所述的黄腐酸钠含量测定的方法，其特征在于，黄腐酸钠标准品溶液的 加样回收率大于98%，RSD值小于1.0% ;黄腐酸钠标准品溶液的日内、日间RSD值均小于 2.0%〇5. 如权利要求1所述的黄腐酸钠含量测定的方法，其特征在于，步骤1)中，黄腐酸钠标 准品由包括以下步骤的方法制备而成:将黄腐酸粉末溶于水中，加氢氧化钠调pH至5~6,再 加入乙醇混合，静置，回收乙醇，沸煮，加入氢氧化钠调pH至6~8,过滤，干燥，即得。6. 如权利要求5所述的黄腐酸钠含量测定的方法，其特征在于，每20g黄腐酸粉末，水的 加入量为400ml，乙醇的加入量为600ml。7. 如权利要求5所述的黄腐酸钠含量测定的方法，其特征在于，沸煮的时间为25~ 35min〇8. 如权利要求5所述的黄腐酸钠含量测定的方法，其特征在于，干燥的温度为55°C。9. 如权利要求1~8任一项所述的黄腐酸钠含量测定的方法，其特征在于，供试品为黄 腐酸钠胶囊制剂时，先将黄腐酸钠胶囊制剂的内容物与稀盐酸混合，超声使内容物溶解，放 冷、滤过，所得滤液再与稀盐酸配制供试品溶液。10. 如权利要求9所述的黄腐酸钠含量测定的方法，其特征在于，超声的时间为lOmin以 上。
【专利摘要】本发明公开了一种黄腐酸钠含量测定的方法，包括以下步骤：1)以稀盐酸为溶剂，将黄腐酸钠标准品配制成标准品溶液；采用紫外分光光度法，以稀盐酸为空白对照，建立标准曲线；2)将供试品与稀盐酸配制供试品溶液，以稀盐酸为空白对照，采用紫外分光光度法检测吸光度，代入标准曲线中，即得供试品溶液的浓度；以上步骤中，所述稀盐酸由9ml浓盐酸稀释至1000ml制备而成。该方法以一定浓度的稀盐酸为溶剂，一方面有效地模拟了胃酸环境，另一方面有利于减少干扰因素，降低误差，提高检测准确性；该方法能够很好的用于黄腐酸钠及其胶囊制剂中黄腐酸钠含量测定，具有良好的线性、准确度、精密度和定量限。
【IPC分类】G01N21/33
【公开号】CN105606558
【申请号】CN201610140555
【发明人】李瑞芳, 王红伟, 高杨, 杨晖, 李 杰, 付俊敏, 吕行直
【申请人】河南科技大学
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年3月11日