[0041 ]表1 26种目标化合物的相对分子量、保留时间和最优质谱条件
[0043]
[0044」带定量离于;带"a"为定量离于的碰撞能 [0045]提取溶剂的选择
[0046]用番茄空白样品按照前面的样品前处理方法做了26种目标化合物在0.02mg/kg浓 度下的回收率，对四种不同的提取剂分别是乙腈、乙腈-甲酸（99.9+0.1，v/v)、乙腈-甲酸 (99+l，v/v)和乙腈-水(75+25，v/v)进行对比，得到目标化合物的回收率如下图1。
[0047] 从图1中可看出，当提取剂选用乙腈-甲酸(99.9+0.1，v/v)时，各化合物的回收率 最理想，所以本研究最终选择该提取剂。
[0048] 线性、线性范围、定量限(L0Q)和检出限(L0D)
[0049] 以分析物的进样浓度(yg/L)为横坐标，以在质谱上采集的分析物的定量离子响应 值为纵坐标进行了线性回归，选取了 1，5，10，50，100，200和500yg/L七个浓度点完成基质加 标曲线，结果见表1，在156个目标化合物-基质组合中（26种化合物X6种基质)其中69%的 组合线性范围比较宽，在l-500yg/L范围内均有良好的线性关系。13.1 %的组合在较低浓度 时线性范围不是很好，所以只在5-500yg/L浓度范围内，有较好的线性相关，与此相似，还有 近3 %的组合在10-500yg/L才能获得较好的线性关系。还有一些组合，在较高浓度时反而得 不到良好的线性关系，其中约9.5 %的组合线性范围在1 -200yg/L，约3 %的组合在1 -1 OOyg/ L范围内才能有较好的线性相关性。还有些极个别的组合在低浓度和高浓度时，线性关系都 不行，如啶虫脒-甘蓝、除虫脲-甘蓝、鱼藤酮-茄子和辛硫磷-茄子组合，线性范围是5-200μ g/L。不管线性范围是多少，线性相关性系数数R 2均大于0.99，具体数据见表2所示。
[0050] 分析物-基质组合的定量限结果见表2,所有目标物的定量限均远低于欧盟等各国 规定的最大残留限量值。
[0051] 表2 26种化合物在甲醇溶剂和6种基质中的线性方程，R2和线性范围
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[0057] 〇中的为甘蓝基质稀释10倍后的定量限和检出限。
[0058] 重复性(RSD)和回收率(R)
[0059] 利用优化好的QuEChERS前处理方法，对6种空白样品进行添加回收实验，添加浓度 为10yg/kg，50yg/kg，100yg/kg，每个添加水平做五次平行，得出本检测方法的回收率(R)结 果见表3。从结果中可看出方法的回收率几乎都在70%-120%之间，除了二甲戊灵在甘蓝基 质中的提取富集率低于60%。一般分析方法的重复性用相对标准偏差来衡量，对同一天的 五次平行样品和连续五天做同一样品分析进行了标准偏差验证，结果见表4。从表中可看出 intra-day RSDs均低于 10%，inter-day RSDs均低于20%。
[0060] 表3 26种化合物在6种基质中的回收率（10,50,and 100yg/kg)。
[0061]
[0062] 表4化合物在基质中的日间和日内重复性。
[0063]
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[0065] 方法的实际样品验证
[0066] 通过分析从山东省济南市场购买的6种样品进行方法的应用性验证，按照前面的 实验方法对每种基质(苹果、黄瓜、茄子、丝瓜、甘蓝和番茄)做五次平行检测。
[0067]在26种分析物中，23种农药被检测出来，含量从1.15yg/kg到148yg/kg不等，苹果 中检测出来的化合物最多，有9种，其次是甘蓝中检出8种、黄瓜检出7种、丝瓜和茄子均含5 种、番茄含4种分析物。所有检测出来的目标物含量均低于中国的最小残留限量。具体结果 见表5。
[0068] 表5实际样品的农药残留检测结果
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[0071] 基质效应的测定
[0072] 基质效应较精确的计算方法是利用目标化合物在基质提取液和在纯溶剂中的线 性方程斜率来求得，具体的计算公式如下：
[0073]
[0074] 利用该方法计算不同化合物在不同基质中的基质效应时，首先需要用溶剂（甲醇） 和空白基质提取液当溶剂配置不同浓度的标准样品。标样浓度为1，5，10，50，100和500yg/L 五个浓度，进样量为lyL，得出的基质效应如表6
[0075] 表6 26种农药在六种基质中的基质效应
[0076]
[0077] 基质效应与进样体积的关系
[0078]从表6中可以看到，同一种化合物在不同的基质中，基质效应差距很大，按照大部 分的化合物在不同样品中的基质效应强弱，将样品分为三类:苹果和番茄归为弱基质效应 样品（I ME I〈20 % );黄瓜、丝瓜和茄子归为中等强度基质效应样品（20 % < I ME I〈50 % );甘蓝 归为强基质效应样品（I ME I 2 50%)。
[0079] 对七个进样体积分别是0.5yL，lyL，2yL，4yL，5yL，8yL，10yL进行了线性研究，得出 每种化合物在番茄基质中的进样体积线性范围见表7。
[0080] 表7 26种分析物在番茄基质中进样体积的线性范围，线性方程和相关系数，进样 浓度是l〇yg/kg。
[0081]
[0082] 分别各选具有弱基质效应的苹果样品、中等强度基质效应的黄瓜样品和强基质效 应的甘蓝样品研究进样体积与基质效应的关系。由于研究的是一个浓度下不同进样体积的 基质效应，我们按照如下方程式2来计算基质效应
[0083]
[0084] 日、考思找守一个敢住进杆怀枳既q以俅址进杆益的再现τ生m酡牧奸的俅证基 质效应减小到忽略的水平。在78种化合物/基质组合中（26种化合物X 3种基质），得出四种 体积与基质效应的关系，如图2,各分析物在三种基质中的基质效应随体积的关系类型总结 在表8和表8续中。
[0085] 表8不同化合物在苹果、黄瓜、甘蓝基质和甘蓝10倍稀释后，基质效应与进样体积 的方程，相关系数R2以及临界体积。
[0086]
[0090] 注释:x代表进样体积;y代表基质效应;线性类型见图2
[0091] 临界体积与基质稀释
[0092] 从表7-8可看出，进样体积越小基质效应越弱，但是考虑到液相色谱注射器的灵敏 度问题，我们将能使基质效应减弱到可以忽略的水平（|ΜΕ|< 20%)的最大进样体积定义为 临界体积。对于具有弱基质效应的样品苹果和具有中等强度基质效应的样品黄瓜，几乎每 种化合物都有其临界体积，在弱基质效应的苹果中，临界体积通常都大于lyL小于等于5μΜ 在中等强度基质效应的黄瓜样品中，绝大多数化合物的临界体积分布在UiL左右;而对于强 基质效应的甘蓝样品，有很大一部分化合物没有临界体积。因此为了研究出相似的规律，对 强基质效应的甘蓝样品进行了 10倍稀释，得出的临界体积和线性方程结果见表8续。对甘蓝 稀释后的方法定量限的测定结果见表2,从表2中可看出，基质的稀释几乎没有影响化合物 的检出限和定量限。
[0093] 上述虽然结合附图对本发明的【具体实施方式】进行了描述，但并非对发明保护范围 的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需 要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 一种液质联用检测技术中减弱基质效应的方法，其特征是，以液相色谱-串联质谱联 用检测方法检测果蔬中农药残留时，采用小体积进样：当样品为弱基质效应样品时，进样体 积小于5μΜ当样品为中等强度基质效应样品时，进样体积小于等于2μΜ当样品为强基质效 应样品时，先通过一定程度的基质稀释，再采用小体积进样。2. 如权利要求1所述的一种液质联用检测技术中减弱基质效应的方法，其特征是，当强 基质效应样品为甘蓝时，将甘蓝样品稀释10倍后，进样体积小于2.5yL。3. 如权利要求1所述的一种液质联用检测技术中减弱基质效应的方法，其特征是，质谱 的扫描模式为多反应监测扫描模式;离子模式为电喷雾正离子源ESI+。4. 如权利要求3所述的一种液质联用检测技术中减弱基质效应的方法，其特征是，质谱 的参数如下:池加速电压为4V，驻留时间，20ms;干燥气温度，325°C ;干燥气流速，8L/min;雾 化器压力，35psi ;鞘气温度，375°C ;鞘气流速，1 lL/min;毛细管电压，4000V;光电倍增管电 压，300V〇5. 如权利要求1所述的一种液质联用检测技术中减弱基质效应的方法，其特征是，液相 色谱柱为50mm X 2.1mm，1.8μηι粒径，流速为0.3mL/min，运行时间为8min，柱温为35 °C。6. 如权利要求1所述的一种液质联用检测技术中减弱基质效应的方法，其特征是，液相 色谱流动相A为纯水，流动相B为甲醇。7. 如权利要求6所述的一种液质联用检测技术中减弱基质效应的方法，其特征是，所述 梯度洗脱程序为，起始时间，流动相A:B的体积比为90:10，维持0.2min;在0.2-5min内，体积 比由90:10线性变化至10:90，并维持该体积至6min，6. lmin时，体积比迅速变回起始体积 比一 90:10。8. 如权利要求6所述的一种液质联用检测技术中减弱基质效应的方法，其特征是，样品 的提取和净化的方法为，将样品放至离心管中加入提取剂，再在匀浆机上匀质后加入NaCl 和无水MgS〇4,然后震荡离心，取上层清液干燥后加入流动相A和B的混合液溶解，最后将溶 液过尼龙膜后进样。9. 如权利要求8所述的一种液质联用检测技术中减弱基质效应的方法，其特征是，称 5.0g样品到聚乙烯离心管中；然后加入5mL甲酸-乙腈体积比为0.1:99.9的提取剂，在匀浆 机上7000r转速下匀质2分钟；接着向离心管中加入0.8g NaCl和3.0g无水MgS〇4;在漩涡机 上3000rpm下震荡lmin，并且在0°C和lOOOOrpm转速下离心10min;取lmL上层清液到玻璃试 管中，然后氮吹干，加入lmL水-甲醇体积比为50:50的溶剂溶解目标物;最后，将溶液过0.22 μπι尼龙膜进样。10. 如权利要求9所述的一种液质联用检测技术中减弱基质效应的方法，其特征是，将 加入NaCl和无水MgS〇4后的离心管放入至冷水中冷却。
【专利摘要】本发明公开了一种液质联用检测技术中减弱基质效应的方法，以液相色谱-串联质谱联用检测方法检测果蔬中农药残留时，采用小体积进样：当样品为弱基质效应样品时，进样体积小于5μL；当样品为中等强度基质效应样品时，进样体积小于等于2μL；当样品为强基质效应样品时，先通过一定程度的基质稀释，再采用小体积进样。本发明通过小体积进样，无需使用大量溶剂进行稀释，降低了检测成本，降低了检测时间，提高了检测效率，不仅可以减弱基质效应，还能优化峰形从而提高仪器的方法灵敏度。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/16
【公开号】CN105675772
【申请号】CN201610227777
【发明人】杨国生, 李红娥, 陈子雷, 李慧冬
【申请人】山东大学
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年4月13日