专利名称：一株产高丝氨酸内酯的乙酸钙不动杆菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体涉及高等植物叶际产高丝氨酸内酯的乙酸钙不动 杆菌及其在生物防治领域中的应用。
背景技术：
在现代农业生产中大量施用化学农药等手段防止植物病害的做法，已经造成严重 的环境污染，以及随之产生的生态风险足以引起人们的关注。食品蔬菜的高农药残留严重 影响到人的健康，另外大量残余农药的面源污染造成严重的链式反应，带来的生态环境污 染是不可低估的。对有害生物进行可持续控制和无公害治理已日益受到人们的关注，并成 为一个活跃的研究领域，为发展可持续农业奠定基础。抗病害的转基因植物的改造在一定程度上减少了对化学农药的依赖，减少了化学 农药的环境污染。尽管有些转基因作物已经进入大田试验并逐步进入大规模商业化，但多 数国家和政府还是持较为谨慎的态度。在我国尽管批准了个别的转基因作物的种植，但转 基因作物的生态风险，如基因的横向转移、生物多样性的变化、转基因作物的蔓延等一些 问题，值得引起人们足够的重视。微生物农药是另一种控制植物等病害的有效方式之一，由于微生物农药具有一定 的环境效益和社会效益，各国政府持积极的支持态度，我国在控制植物病害的微生物资源 开发、做生物农药种类、生产技术和规模，特别是推广应用方面已跻身世界先进水平。然而 在微生物农药的剂型和质量上，我们同国外相比尚有一定的差距，特别是在新型生物防治 产品研制领域几乎是空白。
发明内容
本发明的目的是提供新型的植物病害防治方法，以及相关的微生物资源，本发明 的另一目的是公开该微生物资源的应用。本发明所述的乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)，该菌分离 来自于烟草植物叶片，系烟草叶际微生物。细菌菌落呈圆形，浅黄色，不透明，表面光 滑。该菌经16S rDNA基因序列同源性分析鉴定为变形杆菌门Y变形杆菌纲不动杆菌属 (Acinetobacter calcoaceticus),命名为 A. calcoaceticus WA465。该菌的最适生长温度 在25 30°C，最适生长pH 6 8，生长过程中无需额外添加生长因子等。该菌可以产中 长链的高丝氨酸内酯，对于依赖群体密度感应信号分子高丝氨酸内酯调控的植物病害微生 物，具有干扰其毒力因子分泌和控制病害微生物的功能。本发明从高等植物植株上分离得到的乙酸钙不动杆菌A. calcoaceticus WA465， 可以产高丝氨酸内酯，利用群体密度调控的机理防治植物病害，提供一种全新的生防剂，增 加了微生物农药的剂型。该菌株附生于高等植物植株，因而施用过程中可以很好的在植物 表面定殖，表现出良好的稳定性和防治效果的延续性。
具体实施例方式以下将将结合具体实施例对本发明作进步的说明，目的在于帮助读者更好的理解 本发明的精神实质，但不作为对本发明实施范围的限定。实施例1本发明所述的乙酸钙不动杆菌A. calcoaceticus WA465的分离称取20g烟草叶片到1OOml的生理盐水中，超声波振荡清洗5miin，150r/min振荡 20min,取菌液0. Iml涂布含有新鲜烟草抽提物的LB固体培养基(T-LB)，25°C避光倒置培养 2 3天。对菌落进行多次划线纯化，并记录菌落形态等参数。T-LB培养基(1000ml):蛋白胨100g，酵母浸粉50g，氯化钠50g，新鲜烟草叶片无 菌研磨后叶汁无菌过滤10ml。实施例2本发明所述的乙酸钙不动杆菌A. calcoaceticus WA465在实验室条件下 对烟草野火病害的防治将平板上乙酸钙不动杆菌A. calcoaceticus WA465的单菌落接种至LB液体 培养基中，3(TC，200r/min过夜培养，菌体浓度可达1O9个/ml。制备成菌悬液喷洒在烟 草叶片上，自然晾干lh。按照常规植物病原菌接种方法，接种不同浓度的丁香假单胞菌 (Pseudomonas syringae pv. tabaci)，每个处理3个重复，接种后间隔1天记录发病情况。 实验结果表明，接种丁香假单胞菌3天后，IO3个/ml浓度的接种剂量已经导致对照组烟草 产生病变，当接种剂量为1O5个/ml浓度时已经引起对照组烟草产生强烈的病变。而对于 喷洒了生防菌乙酸钙不动杆菌A. calcoaceticus WA465的实验组烟草，当丁香假单胞菌的 接种量在1O7个/ml浓度时烟草表现出微弱的病变。实验结果表明，生防菌乙酸钙不动杆 菌A. calcoaceticus WA465对丁香假单菌的防治效果明显。
权利要求
1.一株产高丝氨酸内酯的乙酸钙不动杆菌A. calcoaceticus WA465，其特征在于，所述 菌株系叶际微生物。
2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于产高丝氨酸内酯。
3.根据权利要求1所述的菌株在植物病害防治方面的应用。
全文摘要
本发明从高等植物植株上分离得到的乙酸钙不动杆菌A.calcoaceticus WA465，可以产高丝氨酸内酯，利用群体密度调控的机理防治植物病害，提供一种全新的生防剂，增加了微生物农药的剂型。该菌株附生于高等植物植株，因而施用过程中可以根好的在植物表面定殖，表现出良好的稳定性和防治效果的延续性，在植物病害防治上具有很好的应用前景。
文档编号A01N63/02GK102146348SQ20101057758
公开日2011年8月10日 申请日期2010年12月8日 优先权日2010年12月8日
发明者吕迪, 庄国强, 庄绪亮, 马安周 申请人:中国科学院生态环境研究中心