一种油基钻屑降解菌及其制备和应用方法
【专利摘要】本发明公开一种油基钻屑降解菌及其制备和应用方法，属含油固体废弃物微生物处理【技术领域】。油基钻屑降解菌由复合菌群构建组成，通过对石油污染土壤中的细菌进行富集、分离、纯化和筛选，纯化出了3株降解单菌，然后通过发酵培养制备，该油基钻屑降解菌含有拉丁文学名为PseudomonasAeruginosa的铜绿假单胞菌、拉丁文学名为Kocuriakristinae的克氏微球菌和拉丁文学名为AcinetobacterCalcoaceticus的乙酸钙不动杆菌，用于油基钻屑中的石油组分降解，具有除油效率高、处理周期短的显著优势。对于初始油含量小于5%的油基钻屑，在处理5～30d，油含量可降至1%以下，油去除率达80%以上。用于含油土壤、含油污泥的生物修复，也具有良好的应用前景。
【专利说明】一种油基钻屑降解菌及其制备和应用方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种油基钻屑降解菌及其制备和应用方法，属含油固体废弃物微生物 处理【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 含油固体废弃物中的油基钻屑已被列入国家危险废物，因其具有体系异常稳定， 污染物种类复杂、含油量高等特点，处理难度非常大。在油基钻屑处理技术中，生物处理技 术因具有安全、经济、高效、无二次污染等优点，已成为现场油基钻屑安全处理和处置的重 要手段，特别是对机械装置无法清除的孔隙油和薄油层，同时又限制使用化学药剂时，运 用生物处理技术可显出更大的优越性。现有的油基钻屑微生物处理方法是采用的厌氧堆 腐-好氧降解-植物种植工艺，处理周期一般在180d，甚至360d以上，总石油烃（THP)含量 可降至1%以下，存在着短期内降解率不高，处理周期长的缺陷。
【发明内容】
[0003] 本发明目的是克服生物降解菌短期内降解率不高、处理周期长的缺陷，提供一种 油基钻屑降解菌。
[0004] 本发明另一个目的是提供一种油基钻屑降解菌的制备方法。
[0005] 本发明目的还包括提供上述油基钻屑降解菌的应用。
[0006] -种油基钻屑降解菌，由复合菌群构建组成，含有拉丁文学名为Pseudomonas Aeruginosa的铜绿假单胞菌、拉丁文学名为Kocuria kristinae的克氏微球菌和拉丁文学 名为Acinetobacter Calcoaceticus的乙酸I丐不动杆菌。
[0007] -种油基钻屑降解菌的制备方法，包括如下步骤：
[0008] 1、在井场取石油污染土壤，对土壤中的细菌在LB培养基、中性环境、温度为 30°C?40°C条件下进行富集培养，将富集培养后的细菌经分离、纯化和筛选，获得以下3株 降解单菌：
[0009] 铜绿假单胞菌，拉丁文学名Pseudomonas Aeruginosa ;
[0010] 克氏微球菌，拉丁文学名Kocuria kristinae ;
[0011] 乙酸I丐不动杆菌，拉丁文学名 Acinetobacter Calcoaceticus。
[0012] 2、将步骤1所得3株降解单菌按照铜绿假单胞菌：克氏微球菌：乙酸钙不动杆菌 1 : (0. 9?I. 1) : (0. 9?I. 1)的体积比例进行混合，得到混合菌液。
[0013] 3、将步骤2的混合菌液在工业培养基中进行发酵培养，发酵液经过滤、分离、干燥 后，得到油基钻屑降解菌，命名为BSG。
[0014] 所述的步骤3中的工业培养基，按质量/体积比计，由1 %?2 %的蛋白胨、 0. 8%?1. 2%的葡萄糖、1. 5%?2%的酵母膏、0. 1 %?0. 15%的氯化钠、0. 5%?0. 7%的 磷酸氢二钾、1 %?2%的氯化镁、水组成。
[0015] 所述的步骤3中的发酵培养的条件为：发酵温度33?37°C，接种量10 %?20 % v/v，搅拌速度100?150rpm，发酵时间24?48h，发酵过程中向培养基中通入空气，每分钟 通入空气的气液体积比为1?1. 5。
[0016] 所述的步骤3中油基钻屑降解菌BSG的菌活数均为IO9?IO11个/g。
[0017] -种油基钻屑降解菌BSG的应用，收集被处理的油基钻屑，调节pH值至6. 5? 8. 5,控制湿度为20?30 % ;向油基钻屑中投加质量比0. 01?0. 02 %的油基钻屑降解菌 BSG，再加入无机铵盐、无机磷盐，使油基钻屑中的C :N :P的摩尔比为100 :5?10 :0. 5?5， 其中，C为所处理的油基钻屑中含有的石油烃；定期翻动被处理的油基钻屑，并补加无机铵 盐、无机磷盐和油基钻屑降解菌BSG，并测定含油量，直至油基钻屑中的含油量降至0. 3 % 以下，达到《农用污泥中污染物控制标准》GB4284-1984要求。
[0018] 所述的无机铵盐为硫酸铵、硝酸铵或尿素。
[0019] 所述的无机磷盐为磷酸氢二钾或磷酸二氢钾。
[0020] 本发明的有益效果：
[0021] (1)本发明构建的降解菌群，可充分发挥降解单菌之间的共生和协同作用，实现石 油不同组分的同步降解，以提高油基钻屑中石油污染物的降解速率，缩短石油污染物的降 解周期。
[0022] (2)本发明油基钻屑降解菌的制备方法操作简单、成本低廉，菌活数为IO9?IO n 个/g，适合规模化生产应用；
[0023] (3)本发明油基钻屑降解菌BSG用于油基钻屑中的石油组分降解，具有除油效率 高、处理周期短的显著优势。对于初始油含量小于5%的油基钻屑，在处理5?30d，油含量 可降至1 %以下，油去除率达80%以上。用于含油土壤、含油污泥的生物修复，也具有良好 的应用前景。
【具体实施方式】
[0024] 通过以下具体实施例对本发明进行详细说明和解释，并不用于限定本发明。
[0025] 培养基的制备，列于表1:
[0026] 表 1
[0027]
【权利要求】
1. 一种油基钻屑降解菌，由复合菌群构建组成，其特征是：该油基钻屑降解菌含有拉 丁文学名为Pseudomonas Aeruginosa的铜绿假单胞菌、拉丁文学名为Kocuria kristinae 的克氏微球菌和拉丁文学名为Acinetobacter Calcoaceticus的乙酸f丐不动杆菌。
2. -种油基钻屑降解菌的制备方法，其特征是，包括如下步骤： (1) 在井场取石油污染土壤，对土壤中的细菌在LB培养基、中性环境、温度为30°C? 40°C条件下进行富集培养，将富集培养后的细菌经分离、纯化和筛选，获得以下3株降解 单菌：铜绿假单胞菌，拉丁文学名Pseudomonas Aeruginosa ;克氏微球菌，拉丁文学名 Kocuria kristinae;乙酸 f丐不动杆菌，拉丁文学名 Acinetobacter Calcoaceticus; (2) 将步骤（1)所得3株降解单菌按照铜绿假单胞菌：克氏微球菌：乙酸钙不动杆菌1 : (0. 9?I. 1) : (0. 9?I. 1)的体积比例进行混合，得到混合菌液； (3) 将步骤（2)的混合菌液在工业培养基中进行发酵培养，发酵液经过滤、分离、干燥 后，得到油基钻屑降解菌，命名为BSG。
3. 根据权利要求2所述的一种油基钻屑降解菌的制备方法，其特征是：所述步骤（3)中 的工业培养基，按质量/体积比计，由1%?2%的蛋白胨、0. 8%?1. 2%的葡萄糖、1. 5%? 2%的酵母膏、0. 1%?0. 15%的氯化钠、0. 5%?0. 7%的磷酸氢二钾、1%?2%的氯化镁、水组 成。
4. 根据权利要求2或3所述的一种油基钻屑降解菌的制备方法，其特征是：所述的步 骤（3)中的发酵培养的条件为：发酵温度33?37°C，接种量10%?20%v/v，搅拌速度100? 150rpm，发酵时间24?48h，发酵过程中向培养基中通入空气，每分钟通入空气的气液体积 比为1?1. 5。
5. 根据权利要求2或3所述的一种油基钻屑降解菌的制备方法，所述的步骤（3)中油 基钻屑降解菌的菌活数均为IO9?IO n个/g。
6. -种油基钻屑降解菌的应用，其特征是：收集被处理的油基钻屑，调节pH值至 6. 5?8. 5,控制湿度为20?30% ;向油基钻屑中投加质量比0. 01?0. 02%的油基钻屑降解 菌BSG，再加入无机铵盐、无机磷盐，使油基钻屑中的C :N :P的摩尔比为100 :5?10 :0. 5? 5,其中，C为所处理的油基钻屑中含有的石油烃；定期翻动被处理的油基钻屑，并补加氮磷 营养和油基钻屑降解菌BSG，测定含油量，直至油基钻屑中的含油量降至0. 3%以下。
7. 根据权利要求6所述的一种油基钻屑降解菌的应用，其特征是：无机铵盐为硫酸铵、 硝酸铵或尿素。
8. 根据权利要求6或7所述的一种油基钻屑降解菌的应用，其特征是：所述的无机磷 盐为磷酸氢二钾或磷酸二氢钾。
【文档编号】C12R1/385GK104312936SQ201410419910
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年8月22日 优先权日:2014年8月22日
【发明者】单海霞, 何焕杰, 王中华, 马金, 王芹, 詹适新 申请人:中国石油化工集团公司, 中石化中原石油工程有限公司钻井工程技术研究院