专利名称：一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养及鉴定方法
技术领域：
本发明涉及食用菌领域，特别是一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养及鉴定方法。
背景技术：
木耳是一种味道鲜美，营养丰富，可素可荤的食用菌，不仅能为中国菜肴大添风采，而且能养血驻颜，令人肌肤红润，容光焕发，可防治缺铁性贫血，还具有其他药用功效。 毛木耳生长过程中会出现一种白色变异菌种，而现有技术不能很好地鉴定此菌种且不能使此菌种稳定遗传下去。
发明内容
本发明的目的即在于克服现有技术的不足，提供一种简便、快速、准确地对白色毛木耳变异菌株的菌种进行分离培养及鉴定的方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养及鉴定方法，它包括菌种分离培养和菌种鉴定两个步骤，其中，所述的菌种分离培养包括以下步骤
(1)配制加富PDA培养基培养基按以下组分及重量比配制马铃薯15 25，麦麸5 7，葡萄糖1 3，琼脂1 3，水90 110 ；
(2)白色耳片获取从栽培的毛木耳“琥珀木耳”品种中挑选白色耳片；
(3)分离培养将挑选出的白色耳片去除表皮，并切取耳片内部组织块放在加富PDA培养基上培养，培养温度为22 ，菌丝体生长长度达到2 3cm时，选择无杂菌感染的菌种进行扩大培养，取前端菌丝体进行培养，菌丝生长满培养基后即为菌种，编号为APW2010， 并将其放入冷藏装置内4 6°C下保藏；
所述的菌种鉴定包括以下拮抗鉴定步骤
拮抗鉴定将APW2010与“琥珀木耳”菌种同时接种在PDA平板培养基上，相距2 3cm， 在25 条件下培养8 10天，再在光照强度300 500Lx环境下培养5 7天，与 “琥珀木耳”菌种接触部位出现隆起拮抗线的菌种即可判为白色变异菌种。所述的菌种鉴定还包括以下出耳鉴定步骤
(1)培养基配制与菌种培养培养基按以下组分及重量比配制棉籽壳观 35，麸皮 2 5，水6(Γ70，菌种培养方法是将装有上述培养基的培养器经高压灭菌或者常压灭菌后， 接种培养，在22 25°C下培养，菌丝生长满培养基后，进行出耳鉴定；
(2)出耳鉴定将菌种瓶或者菌种袋的口上覆盖物去除，温度20 25°C，空气相对湿度为90 95%，光照强度100 300Lx，耳片仍为白色的菌种即可判为白色变异菌种。所述的冷藏装置包括冰箱；所述的培养器为750mL的玻璃瓶或折径为17cm、长度为33cm的塑料袋。本发明的有益效果是能够快速、准确地对白色毛木耳变异菌株的菌种进行分离培养及鉴定，具有简便、实用等特点。本发明生物材料样品保藏单位名称为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年04月08 日，保藏编号为CGMCCNo. 4715，分类命名为毛木耳Auricularia Polytricha0
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步的描述 实施例1
一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，它包括菌种分离培养和菌种鉴定两个步骤，其中，所述的菌种分离培养包括以下步骤
(1)配制加富PDA培养基培养基按以下组分及重量比配制马铃薯15，麦麸5，葡萄糖 1，琼脂1，水110 ；
(2)白色耳片获取从栽培的毛木耳“琥珀木耳”品种中挑选白色耳片；
(3)分离培养将挑选出的白色耳片去除表皮，并切取耳片内部组织块放在加富PDA培养基上培养，培养温度为22°C，菌丝体生长长度达到2cm时，选择无杂菌感染的菌种进行扩大培养，取前端菌丝体进行培养，菌丝生长满培养基后即为菌种，编号为APW2010，并将其放入冰箱内4°C下保藏；
所述的菌种鉴定包括一个拮抗鉴定步骤
拮抗鉴定将APW2010与“琥珀木耳”菌种同时接种在PDA平板培养基上，相距2cm，在 25°C条件下培养8天，再在光照强度300Lx环境下培养5天，与“琥珀木耳”菌种接触部位出现隆起拮抗线的菌种即可判为白色变异菌种。所述的菌种鉴定还包括以下出耳鉴定步骤
(1)培养基配制与菌种培养培养基按以下组分及重量比配制棉籽壳观，麸皮2，水 70，菌种培养方法是用750mL玻璃瓶或者折径为17cm、长度为33cm的塑料袋作为培养器装培养基，经高压灭菌或者常压灭菌后，接种培养，在22°C下培养，菌丝生长满培养基后，进行出耳鉴定；
(2)出耳鉴定将菌种瓶或者菌种袋的口上覆盖物去除，温度20°C，空气相对湿度为 90%，光照强度lOOLx，耳片仍为白色的菌种即可判为白色变异菌种。实施例2:
一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，它包括菌种分离培养和菌种鉴定两个步骤，其中，所述的菌种分离培养包括以下步骤
(1)配制加富PDA培养基培养基按以下组分及重量比配制马铃薯20，麦麸6，葡萄糖 2，琼脂2，水100 ；
(2)白色耳片获取从栽培的毛木耳“琥珀木耳”品种中挑选白色耳片；
(3)分离培养将挑选出的白色耳片去除表皮，并切取耳片内部组织块放在加富PDA培养基上培养，培养温度为^°C，菌丝体生长长度达到3cm时，选择无杂菌感染的菌种进行扩大培养，取前端菌丝体进行培养，菌丝生长满培养基后即为菌种，编号为APW2010，并将其放入冰箱内6°C下保藏；
所述的菌种鉴定包括一个拮抗鉴定步骤拮抗鉴定将APW2010与“琥珀木耳”菌种同时接种在PDA平板培养基上，相距3cm，在条件下培养10天，再在光照强度500Lx环境下培养7天，与“琥珀木耳”菌种接触部位出现隆起拮抗线的菌种即可判为白色变异菌种。所述的菌种鉴定还包括以下出耳鉴定步骤
(1)培养基配制与菌种培养培养基按以下组分及重量比配制棉籽壳35，麸皮5，水 60，菌种培养方法是用750mL玻璃瓶或者折径为17cm、长度为33cm的塑料袋作为培养器装培养基，经高压灭菌或者常压灭菌后，接种培养，在25°C下培养，菌丝生长满培养基后，进行出耳鉴定；
(2)出耳鉴定将菌种瓶或者菌种袋的口上覆盖物去除，温度25°C，空气相对湿度为 95%，光照强度300Lx，耳片仍为白色的菌种即可判为白色变异菌种。实施例3:
一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，它包括菌种分离培养和菌种鉴定两个步骤，其中，所述的菌种分离培养包括以下步骤
(1)配制加富PDA培养基培养基按以下组分及重量比配制马铃薯25，麦麸7，葡萄糖 3，琼脂3，水90 ；
(2)白色耳片获取从栽培的毛木耳“琥珀木耳”品种中挑选白色耳片；
(3)分离培养将挑选出的白色耳片去除表皮，并切取耳片内部组织块放在加富PDA培养基上培养，培养温度为25°C，菌丝体生长长度达到2. 5cm时，选择无杂菌感染的菌种进行扩大培养，取前端菌丝体进行培养，菌丝生长满培养基后即为菌种，编号为APW2010，并将其放入冰箱内5°C下保藏；
所述的菌种鉴定包括一个拮抗鉴定步骤
拮抗鉴定将APW2010与“琥珀木耳”菌种同时接种在PDA平板培养基上，相距2. 5cm, 在27°C条件下培养9天，再在光照强度400Lx环境下培养6天，与“琥珀木耳”菌种接触部位出现隆起拮抗线的菌种即可判为白色变异菌种。所述的菌种鉴定还包括以下出耳鉴定步骤
(1)培养基配制与菌种培养培养基按以下组分及重量比配制棉籽壳31.5，麸皮3. 5， 水65，菌种培养方法是用750mL玻璃瓶或者折径为17cm、长度为33cm的塑料袋作为培养器装培养基，经高压灭菌或者常压灭菌后，接种培养，在下培养，菌丝生长满培养基后， 进行出耳鉴定；
(2)出耳鉴定将菌种瓶或者菌种袋的口上覆盖物去除，温度23°C，空气相对湿度为 93%，光照强度200Lx，耳片仍为白色的菌种即可判为白色变异菌种。
权利要求
1.一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，其特征在于它包括菌种分离培养和菌种鉴定两个步骤，其中，所述的菌种分离培养包括以下步骤(1)配制加富PDA培养基培养基按以下组分及重量比配制马铃薯15 25，麦麸5 7，葡萄糖1 3，琼脂1 3，水90 110 ；(2)白色耳片获取从栽培的毛木耳“琥珀木耳”品种中挑选白色耳片；(3)分离培养将挑选出的白色耳片去除表皮，并切取耳片内部组织块放在加富PDA培养基上培养，培养温度为22 ，菌丝体生长长度达到2 3cm时，选择无杂菌感染的菌种进行扩大培养，取前端菌丝体进行培养，菌丝生长满培养基后即为菌种，编号为APW2010， 并将其放入冷藏装置内4 6°C下保藏；所述的菌种鉴定包括以下拮抗鉴定步骤拮抗鉴定将APW2010与“琥珀木耳”菌种同时接种在PDA平板培养基上，相距2 3cm， 在25 条件下培养8 10天，再在光照强度300 500Lx环境下培养5 7天，与 “琥珀木耳”菌种接触部位出现隆起拮抗线的菌种即可判为白色变异菌种。
2.根据权利要求1所述的一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，其特征在于所述的菌种鉴定还包括以下出耳鉴定步骤(1)培养基配制与菌种培养培养基按以下组分及重量比配制棉籽壳观 35，麸皮 2 5，水6(Γ70，菌种培养方法是将装有上述培养基的培养器经高压灭菌或者常压灭菌后， 接种培养，在22 25°C下培养，菌丝生长满培养基后，进行出耳鉴定；(2)出耳鉴定将菌种瓶或者菌种袋的口上覆盖物去除，温度20 25°C，空气相对湿度为90 95%，光照强度100 300Lx，耳片仍为白色的菌种即可判为白色变异菌种。
3.根据权利要求1所述的一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，其特征在于所述的冷藏装置包括冰箱。
4.根据权利要求2所述的一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，其特征在于所述的培养器为750mL的玻璃瓶。
5.根据权利要求2所述的一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，其特征在于所述的培养器为折径为17cm、长度为33cm的塑料袋。
全文摘要
本发明公开了一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养及鉴定方法，它包括菌种分离培养和菌种鉴定两个步骤，其中，菌种分离培养包括以下步骤(1)配制加富PDA培养基；(2)白色耳片获取；(3)分离培养，所述的菌种鉴定包括拮抗鉴定和出耳鉴定两种方法。本发明能够快速、准确地对白色毛木耳变异菌株的菌种进行分离培养及鉴定，具有简便、实用等优点。
文档编号A01G1/04GK102293124SQ201110216060
公开日2011年12月28日 申请日期2011年7月30日 优先权日2011年7月30日
发明者王波, 甘炳成, 鲜灵, 黄忠乾 申请人:四川省农业科学院土壤肥料研究所