专利名称：一种马尾松抗逆保健菌根菌剂及其应用方法
技术领域：
本发明涉及一种促进马尾松树生根、生长，改善水分、养分代谢，改良土壤和抗逆保健提高生产力的马尾松抗逆保健菌根菌剂及其应用方法，特别是对马尾松病害如落叶病，根部病害如立枯病、猝倒病等具有较好的抑制作用。
背景技术：
马尾松分布极广，遍布于华中华南各地，是中国南部主要材用树种，经济价值高。目前，主要采用化学方法杀灭松树病虫害，这种方法会污染大气、水环境，造成土壤板结，增强病菌、害虫对农药的抗药性，杀伤有益生物，同时对人体的健康产生危害。随着科学技术的发展和人们认识程度的提高，提出了生物保健剂的理论。它不仅对防治对象的选择性强，可以专一性作用于靶标有害生物，而且对人畜等生物比较安全，与环境的相容性好，对天敌比较安全，不易产生抗性。大部分马尾松病害与寄主松树的生长势、健康状况有着非常密切的关系，寄主起着主导性作用。目前解决松树生长势、健康状况的技术已有很多，如施肥、灌溉、使用植物生长剂等，但都是单一的措施而且不能长期有效且持续性差。研究表明，外生菌根菌可与树木根系形成菌根提高树木抗性。外生菌根菌不仅能杀死病原菌的营养体，而且能以病原菌为营养，生长十分茂盛，能抑制病原菌繁殖体及休眠体的形成；外生菌根菌能分泌非挥发性的杀菌活性物质，使病原菌的细胞质消解。外生菌根还可以帮助宿主适应盐碱环境，通过增加植株对磷等矿质营养元素的吸收，改善盐胁迫引起的营养亏缺；改变植物体内离子平衡，降低其生理毒害；增加植株对水分的吸收和利用能力，缓解生理性干旱；还有些菌根真菌能寄生在致病菌上形成重寄生，将致病菌溶解或杀死。此外，外生菌根能改善树木水分、养分代谢。菌根有密集的菌丝网，增强吸收各种矿物营养的能力，特别是对磷的吸收更为显著。有许多菌根类型，尤其是担子菌的菌丝在土壤中能延伸很长。大量菌根和菌丝使更多的营养元素吸收到菌根中，供给寄主树木。土壤中，几乎有95% 99%的磷是以不可给态存在，菌根菌产生磷酸酶，使不可给态磷转化为可给态磷。菌根菌还能增加对铜、锌等微量元素的吸收。有些树种如松树和橡树，种植在缺少外生菌根的土壤上就不能成活或生长不良，必须接种菌根真菌后才能成活和正常生长。菌根真菌能分解土壤中的有机质，加速土壤养分循环，改善土壤结构，提高土壤中养分的有效性。有的菌根菌能直接固定空气中的游离氯素，促进植物对碳水化合物的合成，对防止地力衰退、促进林木生长起到重要作用。
发明内容
为了解决松树病害化学防治存在的缺点和不足，结合松树病害防治措施和长效提高林木生产力措施，提出了强化松树生根、生长，增强树势来预防松树病害的解决方案，即一种马尾松树的抗逆保健菌根菌剂及其应用方法。该发明不仅能促进松树的生根、生长，而且能够改善水分、养分代谢，改良土壤，提高生产力，增强马尾松的抗病能力。本发明所采用的技术方案是
一种马尾松树的抗逆保健菌根菌剂，由菌根菌剂和萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液按照重量比=800-1000 : I配制而成；所述的菌根菌剂为橙黄乳燕(Lactarius akahatsu)和红汁乳燕(Lactarius hatsudake)分别采用固体发酵培养基发酵而成的培养物中的一种或两种；所述的萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液浓度为IOOOppm ；在固体发酵培养之前先将橙黄乳燕(Lactarius akahatsu)或红汁乳恭(Lactarius hatsudake)经过斜面固体培养基和液体摇床培养基培养得到菌液,然后接种到固体发酵培养基中培养；所述的固体发酵培养基配方为草炭米糠豆饼粉蔗糖按质量比= 80-100 50-80 10-20 I ;菌液接种量为固体发酵培养基体积的4_6%，发酵温度为25°C _28°C，发酵时间8-12天；所述的液体摇床培养条件液体培养基采用不加琼脂的H)培养基；用直径6mm的无菌打孔器，切取斜面固体平板上培养的橙黄乳菇(Lactarius akahatsu)或红汁乳菇(Lactarius hatsudake)菌片,接种于盛有250ml液体培养基的500ml三角瓶中，每瓶接种3-5片；置25°C -28°C、转速200_220r · mirT1摇床上恒温水浴培养7_10d，得到菌液；所述的澄黄乳燕(Lactariusakahatsu)和红汁乳燕(Lactarius hatsudake)均 采自马尾松树林。所述抗逆保健菌根菌剂在配制时，需将菌根菌剂粉碎至2-3_大小后再与萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液混合均匀。所述的斜面固体培养条件采用PDA培养基20被％马铃薯汁lOOOmL、葡萄糖18g、磷酸二氢钾3. 08、硫酸镁1.28、琼脂2(^、维生素810.018 ;培养温度范围是25°C _28°C;pH范围是5-6 ;制成培养基用于一级斜面培养7-10天。上述的抗逆保健菌根菌剂的应用方法，其特征在于，施用于马尾松树树根或者种植马尾松树的土壤中，促进马尾松树的生长，提高马尾松树抗逆性，从而增强松树抗马尾松落叶病、立枯病和猝倒病的能力；提高马尾松树的成活率和生长速度。具体是在马尾松造林时，将所述的抗逆保健菌根菌剂与林地土壤按重量比I : I. 5的比例充分混合，再按照I千克抗逆保健菌根菌剂40千克水的比例加入水制成泥浆，将马尾松树幼苗根系蘸浆，然后种植；或者是在马尾松人工成林时，每225g所述的抗逆保健菌根菌剂中加入25g的聚丙烯酰胺型保水剂，充分混合后，在距离树体I米的土壤中挖坑埋入即可。优选在距离树体I米的土壤中四个不同的方向挖坑，坑的深度为25cm，每个坑放入的量为250克。本发明的有益效果是，既促进马尾松树的生根、生长，改善水分、养分代谢，改良土壤，提高生产力又增加松树抗御马尾松落叶病、立枯病、猝倒病的能力，具有持续控制松树病害的特点。
具体实施例方式以下结合实施例旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。实施例I :采用接菌试验，测试筛选马尾松林采摘的橙黄乳燕Lactarius akahatsu、红汁乳恭 Lactarius hatsudake、香乳 Lactarius camphorates、舌甘口未乳恭 Lactariusglyciosmus、香亚环乳 Lactarius subzonarius、尖顶乳 Lactarius subdulcis、波宁乳 Lactarius porninsis、稀裙鸾乳 Lactarius gerardii、粗质乳 Lactariusdeterrimus、绒毛乳 Lactarius echinatus、稀裙乳 Lactarius hygrophoroides、绒白乳燕Lactarius vellereus、多汁乳燕Lactarius volemus等13种乳燕菌剂接种对2年生马尾松苗木成活率的影响。接种3个月后,发现接橙黄乳燕(Lactarius akahatsu)、红汁乳菇(Lactarius hatsudake)的马尾松苗木的成活率最高，苗木的成活率分别为81. 57%和77. 82%，比对照提高28. 15%和26. 26%，接种其它菌种的苗木的成活率较低。实验结果表明，接种橙黄乳燕(Lactarius akahatsu)、红汁乳燕(Lactarius hatsudake)分别对马尾松苗木的成活率都具有促进作用，有利于提高马尾松人工造林的有效性。
将筛选出来的橙黄乳燕(Lactarius akahatsu)或红汁乳恭(Lactariushatsudake)经过斜面固体培养基和液体摇床培养基培养得到菌液。固体培养条件培养基为PDA (20 %马铃薯汁lOOOmL、葡萄糖18g、磷酸二氢钾3. 0g、硫酸镁I. 2g、琼脂20g、维生素BIO. Olg);培养温度范围是28°C ；pH范围是5. 6 ;制成培养基用于一级斜面培养7天。液体培养条件液体培养基用F1D培养基；用直径6_的无菌打孔器，切取固体平板上培养的橙黄乳菇或红汁乳菇菌片，接种于盛有250ml液体培养基的三角瓶(500ml)中，每瓶接种3片。置28°C、转速ΖΟΟι^π ιΓ1摇床上恒温水浴培养7d，得到培养菌液。得到菌液后进行菌根菌剂生产。菌根菌剂生产所用菌种为橙黄乳菇或红汁乳菇液体菌种。菌剂固体发酵培养基为，草炭米糠豆饼粉蔗糖=80 : 50 : 10 : I，接种上述菌液，接种量为发酵培养基体积的5%，基质的湿度以手抓捏感湿润而无积水流下为合适，生产所用温度为28°C，8天为一个生产周期。将生产好的菌根菌剂粉碎，将萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶解为IOOOppm的液体，然后按菌根菌剂萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液= 900 I的比例充分混合均匀，即得到马尾松抗逆保健菌根菌剂。产品在常温下密封保存，保质期一年以上。实施例2产品的使用方法(I)利用马尾松造林时，将制备好的本发明抗逆保健菌根菌剂(橙黄乳菇固体发酵制备的保健菌根菌剂)与造林地土壤按重量比I : I. 5的比例充分混合，并加入适量水(I千克抗体保健菌根菌剂40千克水)，充分搅拌制成泥浆，以泥浆能粘在根系上即可。(2)用于马尾松人工成林时，每225g本发明抗逆保健菌根菌剂(红汁乳菇固体发酵制备的保健菌根菌剂)中加入25g的聚丙烯酰胺型保水剂，充分混合后，在距离树体I米左右的土壤中挖坑埋入即可。采用方式(I)的使用方法，将I年生马尾松幼苗根系蘸浆后栽培，对照(CK)为不使用抗逆保健菌根菌剂处理的马尾松幼苗。结果见表1，100天后，对马尾松苗生长指标及其抗病性进行测定。通过蘸根，使育苗根系首先在植物激素的作用下快速生根，提高了根茎t匕，扩大苗木对水分的吸收面积，促进了整株的快速发育，然后在根际土中的菌根菌与根系形成菌根，进一步扩大根系的吸收面积，加速地上部分的生长，实现既促进了苗木的生长、增强树势，又提高了其抗病性的作用。表I抗逆保健菌根菌剂对马尾松苗生长及抗病性的影响"μ苗高胸径病害发生情况蹄‘·
况_
平均增长平均增长猝倒病立枯病衣任东
发生率发生率 0(cm) (cm) (cm) (cm) (%) (%) (/o)
接种20.15 3.42 0.38 0.12 5.61 6.83 90.46CK16.73 / 0.26 /23.16 30.24 74.92试验结果表明，接种抗逆保健菌根菌剂使苗高提高了 20.44%，胸径提高了46. 15% ;猝倒病发生率减少了 17.55%，立枯病发生率减少了 23. 94%，存活率提高了15. 54%。说明本抗逆保健菌根菌剂及其应用方法可促进马尾松苗的生长，减少苗木猝倒病和立枯病的发生率，提高存活率。采用方式(2)的使用方法，将抗逆保健菌根菌剂施用于15年生马尾松人工林时，在距离树体I米左右的土壤中四个不同的方向挖坑，坑的深度为25cm，每个坑放入的量为250克，然后覆土、浇水；对照(CK)为不施用抗逆保健菌根菌剂的15年生马尾松人工林。12个月后，对马尾松生长指标和抗病性进行测定，结果见表2。表2抗逆保健菌根菌剂对15年生马尾松生长及抗病性的影响
"μ 树高增量胸径增量 15胃n _____情况
平均(cm) 提高(cm) 平均(cm) 提高(cm)病f______生率(％)
接种66.1215.841.080.2910.17
CK50.28/0.79/42.39试验结果表明，接种抗逆保健菌根菌剂使15年生马尾松树高增量提高了31. 50%，胸径增量提高了 36. 71 %;落叶病发生率减少了 32. 22%。说明本抗逆保健菌根菌剂及其应用方法可促进马尾松生长，减少落叶病的发生。采用橙黄乳菇和红汁乳菇两种菌固体发酵的混合物制备的抗逆保健菌根菌剂及其应用方法也能达到上述类似的优异效果。
权利要求
1.一种马尾松树的抗逆保健菌根菌剂，其特征在于，由菌根菌剂和萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液按照重量比= 800-1000 I配制而成；所述的菌根菌剂为橙黄乳菇(Lactarius akahatsu)和红汁乳燕(Lactarius hatsudake)分别米用固体发酵培养基发酵而成的培养物中的一种或两种；所述的萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液浓度为IOOOppm ； 在固体发酵培养之前先将橙黄乳燕(Lactarius akahatsu)或红汁乳燕(Lactariushatsudake)经过斜面固体培养基和液体摇床培养基培养得到菌液，然后接种到固体发酵培养基中培养；所述的固体发酵培养基配方为草炭米糠豆饼粉蔗糖按质量比=80-100 50-80 10-20 I ;菌液接种量为固体发酵培养基体积的4_6%，发酵温度为250C _28°C，发酵时间8-12天; 所述的液体摇床培养条件液体培养基采用不加琼脂的H)培养基；用直径6mm的 无菌打孔器，切取斜面固体平板上培养的橙黄乳菇(Lactarius akahatsu)或红汁乳菇(Lactarius hatsudake)菌片,接种于盛有250ml液体培养基的500ml三角瓶中，每瓶接种3-5片；置25°C -28°C、转速200_220r · mirT1摇床上恒温水浴培养7_10d，得到菌液； 所述的澄黄乳燕(Lactarius akahatsu)和红汁乳燕(Lactarius hatsudake)均米自马尾松树林。
2.根据权利要求I所述的抗逆保健菌根菌剂，其特征在于，将菌根菌剂粉碎至2-3mm大小后再与萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液混合均匀，即得到抗逆保健菌根菌剂。
3.根据权利要求I所述的抗逆保健菌根菌剂，其特征在于，所述的斜面固体培养条件采用PDA培养基20被％马铃薯汁lOOOmL、葡萄糖18g、磷酸二氢钾3. 0g、硫酸镁I. 2g、琼脂20g、维生素BI O. Olg ;培养温度范围是25°C _28°C ;pH范围是5_6 ;制成培养基用于一级斜面培养7-10天。
4.权利要求1-3任一项所述的抗逆保健菌根菌剂的应用方法，其特征在于，施用于马尾松树树根或者种植马尾松树的土壤中，促进马尾松树的生长，提高马尾松树抗逆性，从而增强松树抗马尾松落叶病、立枯病和猝倒病的能力；提高马尾松树的成活率和生长速度。
5.根据权利要求4所述的应用方法，其特征在于，具体是在马尾松造林时，将所述的抗逆保健菌根菌剂与林地土壤按重量比I : I. 5的比例充分混合，再按照I千克抗逆保健菌根菌剂40千克水的比例加入水制成泥浆，将马尾松树幼苗根系蘸浆，然后种植。
6.根据权利要求4所述的应用方法，其特征在于，具体是在马尾松人工成林时，每225g所述的抗逆保健菌根菌剂中加入25g的聚丙烯酰胺型保水剂，充分混合后，在距离树体I米的土壤中挖坑埋入即可。
7.根据权利要求6所述的应用方法，其特征在于，在距离树体I米的土壤中四个不同的方向挖坑，坑的深度为25cm，每个坑放入的量为250克。
全文摘要
本发明公开了一种针对马尾松(Pinus massoniana)的抗逆保健菌根菌剂及其应用方法，由菌根菌剂和植物激素萘乙酸或吲哚-3-乙酸复合而成；所述的菌根菌剂为橙黄乳菇(Lactarius akahatsu)或红汁乳菇(Lactarius hatsudake)采用固体发酵培养基发酵而成。通过造林时对苗木根系进行蘸浆处理或埋于马尾松林土壤中，不仅能促进马尾松的生根、生长，还能增强树势，提高抗逆性，预防马尾松落叶病以及松苗立枯病和猝倒病的发生。
文档编号A01G1/00GK102630709SQ201210087510
公开日2012年8月15日 申请日期2012年3月29日 优先权日2012年3月29日
发明者刘剑, 刘君昂, 吴瑶, 周国英, 李河, 李琳, 谭益民 申请人:中南林业科技大学