专利名称：一种防治香蕉枯萎病的海洋细菌制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种防治香蕉枯萎病的海洋细菌及其制剂，该海洋细菌为从红树植物-老鼠簕(J can thus i licifolius)叶片内分离获得的解淀粉芽孢杆菌iBaci Ilusamyloli quefaci ens )。该菌株在NA培养基上菌落呈浅黄色,不透明,表面粗糙干燥，边缘不整齐，直杆状，革兰氏染色阳性，产芽孢，芽孢椭圆形，中生或近中生。菌株生长温度范围为15-50°C，生长的pH范围为5. 0-9. O,能耐受10. 0%的氯化钠。该菌株可在香蕉体内及根土壤中定殖，并可分泌产生抑制多种植物病原真菌的抗菌蛋白；
液体菌剂制备将BaL3菌株接种于PBY培养基(牛肉膏5. O g，蛋白胨10.0 g，NaCl5. O g，酵母膏 5.0 g，葡萄糖 10.0 g，pH 7.5，水 1000 mL)上，25_28°C下 180_200r/min 振荡发酵培养48-36小时，其活菌总浓度为I X IO9-1 X 1010cfu/ml ；
固体菌剂制备取上述海洋细菌BaL3菌株液体菌剂，按10-20% (V/W)的接菌量于固体培养基[贝壳粉92-96%、米糠1-3%、麸皮3-5%、5-10%、石灰水5-20% (V/W)]中，25-28°C下发酵培养24-48小时，然后干燥后制成固体菌剂，固体菌剂成品中活菌总浓度为lX109-lX1012cfu/g。实施例2
海洋细菌BaL3菌株在香蕉体内及根际土壤中的定殖
取BaL3菌株培养液，用浇灌法将菌液浇灌于香蕉苗根部，分离结果表明，处理30天后可从香蕉假茎内、根表及其根际土壤中均分离到该菌株，说明该菌株可在香蕉假茎内、根表及其根际土壤中定殖存活30天以上。实施例3
海洋细菌BaL3菌株制剂对室内盆栽香蕉枯萎病的防治和对香蕉的促生作用选取6-7片叶健壮的香蕉组培苗，移栽至装有灭菌土的圆盆钵(160X220 mm)中，分别按如下6组进行处理(A)移栽后立即用BaL3菌株液体制剂(浓度为IO8 cfu/mL)灌根(50mL/株)，20 d重复处理一次；(B)移栽前用BaL3菌株液体制剂喷叶、移栽时用BaL3菌株液体制剂浸根2 h ；(C) (A)+ (B)处理；(D)移栽前用BaL3菌株固体制剂与土壤搅拌处理(100 g/株)，之后按处理(A)进行处理；CK1 :清水对照；CK2 :病原菌处理对照。每处理10盆(株)，于移栽后第7、15和30 d灌根接种香蕉枯萎病菌孢子悬浮液(浓度为IO7个/mL)，接种量为100 mL/株。防病作用调查结果表明(表1)，接种病原菌2个月后，单独接种香蕉枯萎病原菌处理(CK2)开始出现病株，而制剂处理均未见发病；接种病原菌4个月和6个月后CK2发病率为60%和100%，而同期AiL3菌株处理的香蕉苗发病度均在10%和20%以下，其中喷叶和浸根再灌根处理(C)均未见发病。
权利要求
1.一种防治香蕉枯萎病的海洋细菌制剂，其特征在于该制剂所利用的海洋细菌BaL3菌株为从红树植物-老鼠簕叶片内分离获得的解淀粉芽孢杆菌amyloliquefaciens，2Q\2^\QH 29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No. 6718。
2.根据权利要求1所述的一种防治香蕉枯萎病的海洋细菌制剂，其特征在于该菌剂的使用方法是于香蕉移栽时将菌株固体菌剂施入根部土壤，用量80-120Kg/亩，或用菌株液体菌剂，稀释10-50倍灌根，然后每间隔30-60天用菌株液体菌剂灌根，或将菌株固体菌剂施入根部土壤。
3.权利要求1所述海洋细菌BaL3菌株及其制备的生物制剂。
4.权利要求2所述生物制剂在防治香蕉枯萎病等方面的应用。
5.权利要求1所述的一种防治香蕉枯萎病的海洋细菌制剂液体菌剂的制备方法，其特征在于 将海洋细菌BaL3菌株接种于PBY培养基牛肉膏5.0 g，蛋白胨10.0 g，NaCl 5.0 g，酵母膏 5.0 g，葡萄糖 10.0 g，pH 7. 5，水 1000 mL，25_28°C下 180_200r/min 振荡发酵培养48-36小时，其活菌总浓度为lX109-lX101Qcfu/ml。
6.权利要求1所述的一种防治香蕉枯萎病的海洋细菌制剂固体菌剂的制备方法，其特征在于 将权利要求5所述的海洋细菌BaL3菌株液体菌剂，按10-20% (V/W)接菌量接种于固体培养基中，25-28°C下发酵培养24-48小时，干燥后制成固体菌剂，固体成品中活菌总浓度为 lX109-lX1012cfu/go
7.根据权利要求6所述一种防治香蕉枯萎病的海洋细菌制剂固体菌剂的制备方法，其特征在于所述的菌株固体培养基的配方为 60-100目贝壳粉 70-80% 米糠10-15% 麸皮5-15% 5-15% 的石灰水 5-15% (V/W)。
全文摘要
本发明涉及一种防治香蕉枯萎病的海洋细菌制剂，属于植物保护领域。该海洋细菌BaL3菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)。将该菌接种于PBY培养基25-28℃下180-200r/min振荡培养36-48小时，即得液体菌剂，其活菌总浓度为1×109-1×1010cfu/ml。取菌株液体菌剂接种于固体培养基发酵培养24-48小时，干燥后制成固体菌剂，其活菌总浓度为1×109-1×1012cfu/g。制剂对香蕉枯萎病温室防效80-100%，田间防效46.4%-72.3%，并可促进香蕉假茎增粗，叶片增绿，提早抽蕾。该制剂可灌根或喷雾防病使用，也可作为生物肥料使用。
文档编号A01N63/02GK103004886SQ20121052893
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月11日 优先权日2012年12月11日
发明者何红 申请人:广东海洋大学