用于蔬菜中的病原体控制的包衣组合物的制作方法

用于蔬菜中的病原体控制的包衣组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于施用至能够生长出根和芽的蔬菜植物的蔬菜植物结构例如种子的包衣组合物，其中所述包衣组合物包含颗粒形式的有机载体物质，以及具有对抗所述蔬菜植物的至少一种或多种病原体的活性的一种或多种生物试剂。
【专利说明】用于蔬菜中的病原体控制的包衣组合物
[0001]本发明涉及包衣组合物，其包括有机组分和生物试剂，用于施用至能够生长出根和芽的蔬菜植物的植物结构；包衣组合物在蔬菜植物结构上的应用；制备这样的包衣组合物的方法；和用这样的包衣组合物包衣的蔬菜植物结构。具体而言，本发明涉及包衣组合物，其包含有机载体物质和生物试剂，所述生物试剂选自对侵扰蔬菜植物的植物结构的一种或多种植物病原体的具有活性的化学和生物试剂，所述植物病原体选自细菌性、真菌性和节肢动物病原体。
[0002]每年都记录到蔬菜植物作物中的产量损失，且该损失为由于病原体的植物侵扰的结果，所述病原体，例如细菌、真菌和节肢动物，能够侵扰不同发育阶段例如种子阶段的植物。尽管人们已经设计出多种防御性措施来对抗这样的侵扰，但由病原体侵扰导致的农业损失仍然很高。这样的防御性措施包括使用合成化学品；使用植物的基因工程；和使用以包衣、喷雾剂、和洗涤剂的形式施用至蔬菜植物结构(例如种子和鳞茎)的活生物试剂。
[0003]化学试剂形式的农药例如杀真菌剂、杀菌剂和杀节肢动物剂，通常为杀昆虫剂和/或杀螨剂的形式，可以以土壤浸液、液体种子处理等的形式施用至蔬菜植物作物。这样的类型的化学处理倾向于不加选择的，并且可不利地影响有益的细菌、真菌和节肢动物以及这样的处理所靶向的植物病原体。
[0004]在将常规的农药用作为种子处理时，直接用农药将种子包衣或在存在无机载体的情况下将农药施用至种子。这样的种子处理通常以液体的形式施用或作为湿的浆料施用并随后将种子干燥。这样的处理的主要目标是提供针对攻击种子的病原体，例如节肢动物和/或种传微生物和/或土传微生物的保护。通常使用的高水平的化学品向环境引入化学负担，其可能会导致生 态学问题。
[0005]在常规的种子包衣步骤中施用为化学试剂的生物试剂的一个问题是化学试剂通常作为浆料施用，并且，这可能产生包衣的不均匀施用，由此，种子没有被完全包衣或一定百分比的种子(高至20%，取决于种子的类型和所采用的包衣步骤)没有得到完全包衣。此外，种子包衣可能不均匀，并且，这导致种子包衣的物理学弱点，且包衣可能剥落。
[0006]当使用选自可以常规地施用至植物结构(例如种子)的有益的活细菌和真菌物种的生物试剂(例如作为孢子连同颗粒组合物的形式或随后可以被干燥的液体组合物的形式的无机载体)时，产生的另一个问题是施用的生物试剂迅速地丧失生存力。无意于受理论的限制，认为当种子或储藏器官(例如鳞茎)被干燥时，微生物环境改变且可观察到施用的活生物试剂的生存力急剧下降，且几乎与施用的组合物干燥同时发生。生物试剂的生存力的丧失通常与真菌或细菌孢子的分裂有关，这使得它们不能生存。
[0007]现已发现，通过使用有机载体物质连同生物试剂，相对于常规地施用至此类种子的生物试剂的生存力，所述生物试剂在蔬菜植物结构(例如种子和鳞茎)上的生存力得到改善。此外，所述植物结构的包衣较不易于剥落。
[0008]本发明的目的是提供改善的包衣，其包含用于蔬菜植物结构(例如种子)的生物试剂。此外，本发明的目的是提供与常规的种子包衣相比较，使用较少的化学添加剂和/或较少量的化学添加剂的用于保护种子和/或幼小的植株免受病原体侵害的种子包衣。[0009]本发明的这些目的和其他目的将通过以下说明和实施例变得明显。
[0010]根据本发明，提供了蔬菜植物结构包衣组合物，其中所述包衣组合物包含至少一种颗粒形式的有机载体物质和具有对抗蔬菜植物的一种或多种病原体的活性的一种或多种生物试剂，其中所述载体物质选自具有> 50°摄氏度的熔点的蜡。
[0011]农场生产的作物通常被发往很多不同的市场例如用于人类消费的食物和用于驯养牲畜例如鸡和牛的饲料的制备。对于本发明的目的，“蔬菜植物结构”是能够生长出根和芽的蔬菜植物结构。这样的结构通常为鳞茎、根、种子和“种用块茎”。对于单数和复数的“种子”的引用可以互换使用，并且指可以向其施用本发明的组合物的种子，通常为有生存力的种子。本文中提供的蔬菜种子指能够萌发为至少对于考虑的相关蔬菜品种而言典型的常规萌发水平的种子。因此，蔬菜植物结构是可以生长用于人类或驯养动物消费的那些。对于本发明的目的，“蔬菜植物结构”包括见于家用蔬菜中的那些结构，例如种子、鳞茎和块茎。对于本发明的目的，“家用蔬菜”是如本领域技术人员认可的那些。适于用本发明的组合物包衣的植物结构包括选自以下的那些:十字花科植物的成员(卷心菜、西兰花、菜花、羽衣甘蓝、抱子甘蓝{Brussels、球茎甘蓝)、洋葱、辣椒、番茄、葫芦科植物例如黄瓜、哈密瓜、矮生西葫芦、南瓜、奶油瓜(butternut squash)、热带南瓜、葫芦(calabazas)、笑瓜、西瓜、莴苣、西葫芦(小胡瓜)、茄子、胡萝卜、欧洲防风、马铃薯例如白马铃薯、蕉青甘蓝、芜菁、糖用甜菜、根芹菜、洋姜、朝鲜蓟、小白菜、疗菜、大白菜、豆类例如利马豆、青豆例如红花菜豆、扁豆、法国菜豆、蚕豆、辣根、韭葱、甜瓜、欧芹、萝卜、菠菜、甜玉米、糖用甜菜、佐餐食用的甜菜根、豌豆等。
[0012]有机载体物质选自可以被施用至蔬菜植物结构(例如种子)的有机物质，优选地作为干粉末施用，其中所述粉末颗粒具有预先确定的体积平均直径，或所述粉末颗粒以液体的形式施用，例如作为油质的配制物或作为含水配制物。
[0013]通常，在本发明中有用的有机载体物质以颗粒形式存在于本发明的组合物中，且具有如本文所定义的一定大小的体积平均直径。为了获得适用于本发明的体积平均直径的有机物质的颗粒，可以在粗磨机中将例如1-5公斤的块或板的形式的有机物质打碎或粗磨成小的毫米大小的片(例如近似直径为的大小,例如4mm-6mm)。随后可以使毫米大小的片通过粉碎工具例如标准磨例如Apex粉碎磨，并研磨或粉碎成具有在IOOMm - 500Mm范围内的近似直径，例如在250Mm - 300Mm范围内的近似直径的颗粒。随后可以将微米大小的经粉碎的颗粒经过微粉化装置，例如AFG微粉化空气磨，以获得在本发明中有用的期望的VMD范围例如15Mm - 20Mm的颗粒。本领域技术人员了解，用于获得小颗粒的此类步骤是本领域中公知的。优选地，本发明的干粉末组合物包含具有> 5μπι的体积平均直径，例如 8 μ m、9 μ m、10 μ m、11 μ m、12 μ m、13 μ m、14 μ m、15 μ m,高至 40 μ m,或其中的任何数值的体积平均直径的复合颗粒。如本文所述，所述复合颗粒的体积平均直径通常为> IOMffl或≥12Mm,并且可以处于10 μ m-200 μ m的范围内，并且可以具有处于其间任何位置的数值，例如≥10 μ m-?οο μ m ;或≥10μηι-40μηι;或≥10 μ m_30 μ m,或其间的任何期望的体积平均直径数值。优选地，本发明的干粉末组合物包含具有> 8μπι的体积平均直径的颗粒，例如 8 μ m、9 μ m、9.7 μ m、10 μ m、11 μ m、12 μ m、13 μ m、14 μ m、15 μ m 等，高至所选的任何体积平均直径例如高至200 μ m,或其间的任何体积平均直径例如40 μ m或30 μ m的体积平均直径的颗粒。具有> ΙΟμπι的体积平均直径的本发明的颗粒被认为对人类的胸部的危害较少，并且不被认为是变应原的。
[0014]在液体配制物中，如本文所述的预先确定的体积平均直径的颗粒悬浮于其中的悬浮剂配制物中并且被施用至种子，随后使用常规的干燥步骤将其干燥。当以干燥粉末的形式将有机载体物质施用至蔬菜植物种子时，有机载体物质的颗粒可以具有本文所述的任何常规大小的体积平均直径。在含油种子的包衣之前，可向这样的干燥粉末添加用于对抗节肢动物病原体例如昆虫、蜘蛛，并且在适当的情况下，它们的幼虫、卵、或蛹的化学品；用于对抗细菌性病原体的化学品；和用于对抗真菌性病原体的化学品。此外，可以将有益的活生物试剂添加至在本发明中有用的这样的干燥粉末，所述活生物试剂能够靶向蔬菜植物的细菌性病原体和/或靶向蔬菜植物的真菌性病原体。所选的有益的活生物试剂的孢子，例如真菌分生孢子，或不形成孢子的真菌的菌丝或菌丝体或与分生孢子相似的结构可以被添加至在本发明中有用的干燥粉末中。在本发明中有用的适合的有机载体物质通常由具有^ 50°C的熔点的有机物质例如蜡构成，更优选> 60°C，且最优选地由具有> 70°C的熔点的硬蜡构成。
[0015]在本发明中有用的天然蜡包括巴西棕榈蜡、蜂蜡、白蜡、紫胶蜡、鲸蜡、十六酸蜂花酯、鲸蜡醇十六酸酯、小烛树蜡、蓖麻蜡、小冠巴西棕蜡、羊毛蜡、甘蔗蜡、retamo蜡、米糠蜡
坐寸ο
[0016]在本发明中有用的合成腊包括选自石腊、微晶腊、聚乙烯腊、Fischer-Tropsch腊、取代的酰胺蜡、聚合的α -烯烃等的适合的蜡。
[0017]在本发明中有用的无机腊包括褐煤腊(例如Lumax? Bayer)、地腊(ceresinwax)、地腊(ozoce rite)、泥煤腊等。
[0018]适合的有机载体颗粒可以选自蜡，例如巴西棕榈蜡、蜂蜡、褐煤蜡、白蜡、紫胶蜡、鲸蜡、十六酸蜂花酯、鲸蜡醇十六酸酯、小烛树蜡、蓖麻蜡、小冠巴西棕蜡、羊毛蜡、甘蔗蜡、retamo蜡和米糠蜡，或其两种或多种的混合物。这样的蜡通常在熔化期间显示出高的晶格能的焓。优选地，所述有机载体物质为巴西棕榈蜡，其可以以液体的形式施用，通常以悬浮剂的形式施用，或更优选地以作为分离颗粒的粉末形式施用。
[0019]此外，在本发明的组合物中有用的有机载体颗粒可以包含其他的组分，例如选自以下的添加剂:uv阻断剂例如β-胡萝卜素或对氨基苯甲酸，着色剂例如荧光增白剂和可商购的着色剂例如食品着色剂，增塑剂例如甘油或豆油，抗微生物剂例如山梨酸钾、硝酸盐、亚硝酸盐、环氧丙烷等，抗氧化剂例如维生素Ε、丁基化羟基茴香醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)和可存在的其他抗氧化剂，或其混合物。本领域技术人员了解，对这些通常包括的添加剂的选择将根据最终的目的和注意到的需要而进行。
[0020]取决于设计，本发明的液体配制物可以配制为含水配制物或油质配制物。含水配制物可以包括表面活性剂，其选自可商购的表面活性剂，例如
Libsort).Sfwet L7T.Tween 80, Torpedo II, Newmans 了80, Fortune, Guard, Rhino, Biopower 等。
[0021]油质的配制物，即基于油的配制物，可以包含适用于本发明的任何油，其可以选自石油油料例如石蜡油，和植物油例如菜籽油、大豆油、葵花油、棕榈油等。在本发明中有用的油配制物包含如本文所述的有机载体颗粒，且它们又可以与流平剂，例如亲水性的沉淀的二氧化娃，例如 Sipernat 383 DS、Sipernat 320、EXP 4350 和 Sipernat D-17 等混合。这样的自由流动的试剂可以被分散于油中，例如用于消泡的目的。[0022]本领域技术人员了解，当含水配制物或油配制物可以用于施用在本发明中有用的生物试剂的情况下，在完成包衣后，液体成分应从经包衣的植物结构去除，例如通过使用常规的干燥方法而干燥去除，留下干燥颗粒形式的种子包衣组合物，其中所述种子包衣组合物由如本文所述的有机载体和至少一种同样如本文所述的生物试剂构成。
[0023]用于本发明的目的的生物试剂为可用于控制蔬菜植物的植物病原的种群的生物试剂，并且可以选自化学杀真菌剂、杀节肢动物剂例如杀昆虫剂和杀蝴剂、杀菌剂，还可以选自能够控制蔬菜植物结构例如种子、主根或能够生长出根和/或芽的其他结构的一种或多种种传病原或土传病原的种群的活生物试剂。优选地，通过使其不能繁殖的生物试剂和/或通过将其杀死而减少在蔬菜植物结构上或紧邻蔬菜植物结构的土传病原体的种群。在本发明中有用的生物试剂的实例包括用于蔬菜植物结构(例如种子)上的化学品，其选自本领域中通常使用的杀节肢动物剂例如杀昆虫剂和杀螨剂、杀真菌剂和杀细菌剂。这样的化学品的适合的实例包括烟碱类杀昆虫剂例如吡虫啉[仏)-1-(6_氯-3-吡啶基甲基)-N-硝基咪唑烷-2-亚基胺]、氨基甲酸甲酯杀昆虫剂例如灭虫威[4-甲基硫代-3，5-二甲苯基甲基氨基甲酸酯]、肟氨基甲酸酯杀昆虫剂例如硫双威[(3i?Z，12EZ)-?,, 7,9, 13-四甲基-5，11-二氧杂-2，8，14-三硫杂-4，7,9, 12-四氮杂十五烷_3，12-二烯-6，10-二酮]、和噻唑杀昆虫剂例如可尼丁 [仏)-1-(2-氯-1，3-噻唑-5-基甲基)-3-甲基-2-硝基胍](全部用于糖用甜菜)；在本发明中有用的杀真菌剂包括芳香族杀真菌剂例如氯硝胺[2，6- 二氯-4-硝基苯胺](用于甘薯)、托布津杀真菌剂例如Topsin M[甲基托布津](用于香瓜、洋葱(干洋葱和青葱)、二硫代氨基甲酸酯杀真菌剂例如福美双[二硫化四甲基秋兰姆或二硫化双(二甲基硫代氨基甲酰)](用于豆类、甜菜根(甜菜)、甘蓝类作物、胡萝卜、大白菜、黄瓜、茄子类(茄子)、芥菜、芜菁、莴苣、香瓜、秋葵、洋葱、豌豆、辣椒(胡椒)、南瓜、萝卜、菠菜、矮生西葫芦、甜玉米、番茄和西瓜)；和代森锰锌[亚乙基双(二硫代氨基甲酸)锰(聚合的)与锌盐的复合物](用于番茄)，酰基氨基酸杀真菌剂例如甲霜灵[N_(甲氧基乙酰基)-Λ/_(2，6-二甲苯基)-DL-丙氨酸甲酯](用于豆类、甜菜、胡萝卜、黄瓜、豌豆 、和甜玉米)；和酰基氨基酸杀真菌剂例如精甲霜灵[Ν-(甲氧基乙酰基)-Ν-(2，6-二甲苯基)-D-丙氨酸甲酯](用于豆类、甜菜、西兰花、胡萝卜、芹菜、大白菜、甘蓝类作物、黄瓜、茄子类大蒜、芥菜、青萝卜、辣根、韭葱、莴苣、香瓜、洋葱、大蒜辣根、欧芹、欧洲防风、豌豆、胡椒南瓜/笋瓜、萝卜、菠菜、矮生西葫芦、甜玉米、甘薯、番茄、和西瓜)，邻苯二甲酰亚胺杀真菌剂例如克菌丹DV-(三氯甲基硫代)环己-4-烯-1，2-二甲酰亚胺]用于豆类、甜菜、西兰花、甘蓝类作物、黄瓜、芥菜、青萝卜、香瓜、豌豆、胡椒、南瓜/笋瓜、萝卜、菠菜、番茄、矮生西葫芦、甜玉米、小扁豆、西瓜和白马铃薯，康唑杀真菌剂例如苯醚甲环唑[3-氯-4- [ (2RS, ARS\ 2RS, ASR) ~4~ 甲基-2- (1Η-1，2，4-三唑-1-基甲基)-1,3-二氧戊环-2-基]苯基-4-氯苯基醚]，吡咯杀真菌剂例如咯菌腈[4-(2，2-二氟-1，3-苯并二氧代-4-基)-1ff-批咯_3_臆](用于?类、甜菜、西兰花、胡萝卜、芳:菜、大白菜、甘蓝类作物、黄瓜、茄子类大蒜、芥菜、青萝卜、辣根、韭葱、莴苣、香瓜、秋葵(干燥的和绿色的)、洋葱、欧芹、欧洲防风、豌豆、胡椒南瓜/笋瓜、萝卜、菠菜、矮生西葫芦、甜玉米、甘薯、番茄、西瓜、和白马铃薯)，噁唑杀真菌剂例如恶霜灵[2-甲氧基-N- (2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)乙酰-2’，6’，-二甲苯胺](用于豌豆和豆类)和EBDC杀真菌剂例如混合物乙撑双二硫代氨基甲酸酯(用于马铃薯种用块茎)。[0024]本领域技术人员了解，本发明的组合物还可以直接添加至其中将种植本文所定义的植物结构的土壤或生长介质。这样的组合物可以作为粉末添加并与土壤混合或使用常规的步骤作为液体悬浮剂施用。
[0025]对于本发明的目的，土传病原体是能够定殖于蔬菜植物结构例如种子外皮的病原体和/或存活于土壤中并且能够对蔬菜植物结构例如种子起作用的病原体。这样的土传病原体通常为细菌和/或真菌。攻击蔬菜植物的土传细菌和真菌病原体的实例包括丝核菌属种iMhizoctonia spp.)(对例如豆类、葫芦科植物具有活性；对芸苔属种iBrassica spp.)豌豆具有活性的立枯丝核菌{R.soIani);莴苣、菠菜、马铃薯)，腐霉属种(Pythium spp.)(对例如豆类、胡萝卜、芹菜、芸苔属种、葫芦科植物、茄子、小扁豆、豌豆、胡椒、菠菜、莴苣、马铃薯和番茄具有活性)，镰刀菌属种(Fusarium spp.)(对例如豆类、葫芦科植物、番茄、豌豆、马铃薯具有活性)，疫霉属种(Phytophthora spp.)(对例如豆类和小扁豆、葫芦科植物、番茄、菠菜、马铃薯具有活性；对芸苔属种具有活性的大雄疫霉(P.megasperma)),轮枝孢属种{Verticillium spp.)例如黑白轮枝菌(K albo-atrum)和大丽轮枝菌(Kdahliae)(对芸苔属种、番爺、马铃薯具有活性)，小核菌属种lSclerotium spp.)(对例如豆类具有活性)，根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)(对芸苔属种和 spp.具有活性)，莖点霉属种(Phoma spp.)(对豌豆具有活性)例如黑胚莖点霉iPhomaIingam)(对芸苔属种具有活性)，欧文氏菌属种577/7.)(对葫芦科植物、番爺、莴苣、马铃薯具有活性)，假单胞菌属种iPsouckmoims spp.)(对葫芦科植物、番茄、菠菜、豆类、马铃薯具有活性)，链格孢属种(Alterrmria spp.)(对葫芦科植物、莴苣、豌豆、番茄、马铃薯具有活性)，青霉属种iPenicillium spp.)(对葫芦科植物具有活性)，链霉菌属种iStreptomyces spp.)(对马铃薯具有活性)等。
[0026]根据本发明的另一个方面，提供了蜡的有机载体颗粒在制备如本文所定义的包含如本文前述所定义的生物试剂的包衣组合物中的应用。在本发明此方面的优选方案中，所述包衣组合物为种子包衣组合物。在本发明的此方面的另一个优选的方案中，所述包衣组合物为储藏器官包衣组合物，其中所述储藏器官选自块茎、块状根、球茎、鳞茎、和根茎。所述有机载体颗粒选自天然蜡、合成蜡和无机蜡，其具有> 50°C的熔点，更优选> 60°C，且最优选地由具有> 70°C的熔点的硬蜡构成。在本发明此方面中有用的适合的蜡可以选自蜡，例如巴西棕榈蜡、蜂蜡、褐煤蜡、白蜡、紫胶蜡、鲸蜡、十六酸蜂花酯、鲸蜡醇十六酸酯、小烛树腊、蓖麻腊、小冠巴西棕腊、羊毛腊、甘鹿腊、retamo腊和米糠腊,或其两种或多种的混合物。优选地，在本发明此方面中使用的种子包衣包括巴西棕榈蜡作为有机载体。优选地，在本发明的此方面中,所述有机载体颗粒具有> 5Mm的平均体积直径，例如在> 8 μ m-200 μ m的范围内，如本文所述。
[0027]在本发明的第三个方面，提供了蜡作为颗粒形式的有机载体在本发明所述的蔬菜结构包衣组合物中的应用。在本发明的此方面中，所述有机载体颗粒选自天然蜡、合成蜡和无机蜡，其具有> 50°C的熔点，更优选> 60°C，且最优选地由具有> 70°C的熔点的硬蜡构成。在本发明此方面中有用的适合的有机载体颗粒可以选自巴西棕榈蜡、蜂蜡、褐煤蜡、白蜡、紫胶蜡、鲸蜡、十六酸蜂花酯、鲸蜡醇十六酸酯、小烛树蜡、蓖麻蜡、小冠巴西棕蜡、羊毛蜡、甘蔗蜡、retamo蜡和米糠蜡，或其两种或多种的混合物。优选地，在本发明此方面中有用的蜡载体颗粒包含巴西棕榈蜡的有机载体颗粒。仍优选地，在本发明此方面中有用的有机载体颗粒具有> 8Mm的平均体积直径，例如在> 10 μ m-200 μ m的范围内。
[0028]在本发明的第四个方面，提供了制备如本文所述的蔬菜植物结构包衣例如种子包衣组合物的方法，其包括:
1)选择有机载体物质，其中所述载体物质选自具有>50°摄氏度的熔点的蜡；
2)将所述有机载体物质粉碎为期望的平均体积直径>5Mffl的颗粒，例如平均体积直径在≥8 μ m-200 μ m的范围内的颗粒；和
3)将生物试剂添加至步骤2)的产品颗粒。
[0029]在本发明此方面中有用的生物试剂选自杀昆虫剂或杀螨剂或其混合物，或化学杀真菌剂，或真菌物种和/或细菌物种或其一种或多种的混合物。
[0030]可以用于本发明的包衣组合物的在本领域中通常被称为“生物拮抗剂”的活生物试剂(也被称为生物防治生物或生物防治剂)的实例包括假单胞菌属种，木霉属种{Trichoderma )例如绿色木霉<Τ.viride)(但不用于洋葱)(在拌种中对立枯丝核菌、菜豆壳球孢菌(Macrophomina phaseolina)和镰刀菌属种具有活性)，链霉菌属种例如利迪链霉菌 iStreptomyces Iydicus)(可获自 Natural Industries Inc., Houston,Texas, USA),白粉寄生抱菌分离菌M-10 (可获自 Ecogen Inc,Langhorne, USA),芽抱杆菌属种{Bacillus spp.)例如枯草芽抱杆菌GB03 {Bacillussubtil is GB03)、地衣芽抱杆菌{β.、和巨大芽抱杆菌{β.megaterium)(全部可获自 Growth Products, White Plains, USA),小盾壳霉{Coniothyriummini tans)(可获自 Prophyta Biologischer Pflanzenschutz GmbH, Germany)，放身寸形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)菌株 84 (可获自 AgbioChem Inc, Florida,USA),解淀粉欧文氏菌{Erwinia amylovora) HrpN harpin 蛋白(可获自 Eden BioscienceCorp., Bothell WA, USA),灰绿链霉菌 i^treptomyces gri seo viri cl is)菌株 K61 (可获自 Kemira Agro Oy, Helsinki, Finland),放射形土壤杆菌 K1026 (可获自 Bio-careTechnology, Australia) {Gliocladium catenulaturn)(可获自 Kemira AgroOy, Helsinki, Finland),哈茨木霉{Trichoderma harzianium Rifai)菌株 KRL-AG2(T-22)(可获自 Bioworks Inc, Geneva, USA),和绿粘帚霉{Gliocladium virens)(又名绿色木霉virens)) GL-21 (可获自 Certis Inc., Columbia, USA),枯草芽孢杆菌GB03 (用于豌豆和甜玉米)，和短小芽孢杆菌/7應GB34 (用于豌豆)。
[0031]用于蔬菜植物结构例如蔬菜种子的种子处理的适合的杀真菌剂为已知的。这样的化学品的适合的实例包括杀昆虫剂例如吡虫啉[⑵-1-(6-氯-3-吡啶基甲基)-N-硝基咪唑烷-2-亚基胺]、灭虫威[4-甲基硫代-3，5- 二甲苯基甲基氨基甲酸酯]、硫双威[i^EZ, H3，7,9, 13-四甲基-5，11-二氧杂-2，8，14-三硫杂-4，7,9, 12-四氮杂十五烷-3，12- 二烯_6，10- 二酮]、和可尼丁 [⑵-1-(2-氯-1，3-噻唑-5-基甲基)-3-甲基-2-硝基胍](全部用于糖用甜菜)；杀真菌剂例如氯硝胺[2，6_ 二氯-4-硝基苯胺](用于甘薯)、精甲霜灵DV_(甲氧基乙酰基)-#_(2，6-二甲苯基)-D-丙氨酸甲酯](用于大蒜、辣根、莴苣，Topsin M [甲基托布津](用于香瓜、洋葱(干洋葱和青葱)、福美双[二硫化四甲基秋兰姆或二硫化双(二甲基硫代氨基甲酰)](用于豆类、甜菜根(甜菜)、西兰花、胡萝卜、大白菜、黄瓜、茄子类(茄子)、芥菜、芜菁、莴苣、香瓜、秋葵、洋葱、豌豆、辣椒(胡椒)、南瓜、萝卜、菠菜、矮生西葫芦、甜玉米、番茄和西瓜)、甲霜灵[#-(甲氧基乙酰基)-#-(2，6-二甲苯基)-DL-丙氨酸甲酯](用于豆类、甜菜、胡萝卜、黄瓜、婉?、和甜玉米)、精甲霜灵[Λ"-(甲氧基乙酸基)-N-(2，6-二甲苯基)-D-丙氨酸甲酯](用于豆类、甜菜、西兰花、胡萝卜、芹菜、大白菜、甘蓝类作物、黄瓜、茄子类大蒜、芥菜、青萝卜、辣根、韭葱、莴苣、香瓜洋葱、欧芹、欧洲防风、豌豆、胡椒南瓜/笋瓜、萝卜、菠菜、矮生西葫芦、甜玉米、甘薯、番茄、和西瓜)、克菌丹Dv-(三氯甲基硫代)环己-4-烯-1，2- 二甲酰亚胺]用于豆类、甜菜、西兰花、甘蓝类作物、黄瓜、芥菜、青萝卜、香瓜、豌豆、胡椒、南瓜/笋瓜、萝卜、菠菜、矮生西葫芦、甜玉米、西瓜和白马铃薯、苯醚甲环唑[3-氯-4- [ {2RS, ARS, 2RS, ASR) ~4~ 甲基-2- (1H-1，2，4-三唑-1-基甲基)-1, 3- 二氧戊环-2-基]苯基-4-氯苯基醚]和精甲霜灵[N-(甲氧基乙酰基)-N- (2，6- 二甲苯基)-D-丙氨酸甲酯](用于甜玉米)、枯草芽孢杆菌GB03 (用于豌豆和甜玉米)、咯菌腈[4-(2，2-二氟-1，3-苯并二氧代-4-基)-\H_吡咯-3-臆](用于?类、甜菜、西兰花、胡萝卜、芳:菜、大白菜、甘蓝类作物、黄瓜、茄子类大蒜、芥菜、青萝卜、辣根、韭葱、莴苣、香瓜、秋葵(干燥的和绿色的)、洋葱、欧芹、欧洲防风、豌豆、胡椒南瓜/笋瓜、萝卜、菠菜、矮生西葫芦、甜玉米、甘薯、番茄、西瓜、和白马铃薯)、乙撑双二硫代氨基甲酸酯(EBDC)(用于马铃薯种用块茎)、短小芽孢杆菌GB34 (用于豌豆)。
[0032]这样的化学品的适合的实例还包括杀昆虫剂例如吡虫啉[该)-1-(6-氯-3-吡啶基甲基)-Ν-硝基咪唑烷-2-亚基胺]、灭虫威[4-甲基硫代-3，5- 二甲苯基甲基氨基甲酸酯]、硫双威[(3位，12ΕΖ)-?>, 7,9, 13-四甲基-5，11-二氧杂-2，8，14-三硫杂-4，7,9, 12-四氮杂十五烷-3，12-二烯-6，10-二酮]、和可尼丁 [该)-1-(2-氯-1,3-噻唑-5-基甲基)-3-甲基-2-硝基胍](全部用于糖用甜菜)等。
[0033]在本发明此方面中， 所述有机载体物质可以选自蜡，例如选自本文前述的那些蜡。适合的蜡可以选自蜡，例如巴西棕榈蜡、蜂蜡、褐煤蜡、白蜡、紫胶蜡、鲸蜡、十六酸蜂花酯、鲸腊醇十六酸酯、小烛树腊、蓖麻腊、小冠巴西棕腊、羊毛腊、甘鹿腊、retamo腊和米糠腊或其两种或多种的混合物。优选地，在本发明此方面中有用的蜡载体颗粒包含巴西棕榈蜡的干燥颗粒。优选地，所选择的载体物质为巴西棕榈蜡。
[0034]在本发明的另一个方面，提供了通过如本文所述的方法制备的蔬菜植物结构包衣组合物，例如种子包衣组合物。
[0035]在本发明的另一个方面，提供了如本文所述的包衣组合物，其用于蔬菜植物结构，例如种子。
[0036]在本发明的另一个方面，提供了使用包衣组合物包衣蔬菜植物结构例如蔬菜种子的方法,所述包衣组合物包含有机载体物质和对一种或多种真菌性病原体、细菌性病原体和节肢动物病原体的生物拮抗剂，以限制由所述病原体对所述蔬菜植物结构例如蔬菜种子造成的伤害，所述方法包括将生物拮抗剂添加至有机载体物质，其中所述有机载体物质为干燥颗粒的形式，将所述两种组分混合在一起，并以干燥颗粒的形式将所得组合物施用至蔬菜植物结构，例如蔬菜种子。因此，所述种子包衣组合物以干燥颗粒的形式施用。自然地，本领域技术人员了解，所述有机载体物质还可以包含添加的色素、增塑剂，和如本文所述的其他次要组分。在可选方案中，可以如本文所述以液体形式施用种子包衣，并且随后将种子干燥，在种子上时留下干燥颗粒形式的包衣组合物。然而，为了易于施用和保持低的生产成本，优选以干燥的颗粒形式施用包衣组合物。在本发明此方面中的有机载体物质可以选自巴西棕榈蜡、蜂蜡、褐煤蜡、白蜡、紫胶蜡、鲸蜡、十六酸蜂花酯、鲸蜡醇十六酸酯、小烛树蜡、蓖麻腊、小冠巴西棕腊、羊毛腊、甘鹿腊、retamo腊和米糠腊或其两种或多种的混合物。优选地，所述有机载体物质为干燥颗粒形式的巴西棕榈蜡。
[0037]本发明此方面中的处理组合物包括一种或多种生物试剂，其选自如本文前述的化学杀节肢动物剂例如杀昆虫剂和杀蝴剂、杀真菌剂、杀细菌剂和活生物试剂。
[0038]以下为说明本发明的实施例。应理解所述实施例不以任何方式解释为限制本发明。
[0039]图1:萝卜上的木霉属孢子负荷。
[0040]实施例部分
通过种子处理的方式控制菜豆(Phaseolus vulgaris)上的丁香假单胞菌丁香致病变种 iPseudomonas syringae pv syringae)[英国国家菌种保藏中心(UKNCC)]。
[0041]使用拮抗剂哈茨木霉、突光假单胞菌iPseudomonas fluorescens)和枯草芽孢杆菌[英国国家菌种保藏中心(UKNCC)]。
[0042]细菌性褐斑病 症状
丁香假单胞菌丁香致病变种可在多个种类的植物上导致疾病，但只有此细菌的独特形式导致被称为细菌性褐斑病的疾病。这些细菌可以在一些植物(包括食荚菜豆和干豆角)的表面上生长，而不导致疾病。以此方式存在的细菌被称为附生植物。豆类上的细菌性褐斑病通常在细菌发育的大规模附生种群之后发生。由于直至大暴雨之前不会发生严重的感染，因此没有症状不意味着不存在细菌。
[0043]细菌性褐斑病的初始的叶的症状是小的水浸泡的斑点，其发展为直径为约3_8mm的特别的坏死性棕色斑点，通常具有窄的扩散的黄色边缘。这些损伤可能扩大、合并、和脱落，使得叶具有破烂的外观。在豆荚上可形成下陷的棕色斑点。如果在豆荚发育的早期发生感染，则豆荚在感染部位可变得弯曲或扭曲。
[0044]常规的种子处理的缺陷
i)有限的给药能力-可以施用的农药的量受到实际将有多少与其粘住。
[0045]ii)有限的保护持续时间-由于施用至种子的生物试剂(例如化学试剂)的量相对较少，随着植物生长的生物试剂的稀释，以及生物试剂的破坏，所述持续时间通常较短。
[0046]iii)经处理的种子的保存期限有限-由于经处理的种子的保存期限可能是有限的，因此生产过量的经处理的种子是不期望的。
[0047]在施用至种子的是休眠的微生物的这种情况下，通过包含作为用于生物试剂的载体的巴西棕榈蜡颗粒，所有的这三种限制都可以被克服或显著降低。在有利的条件下，所述微生物在发育的种子或幼苗的外部生长和定殖。生物试剂可有助于减少种子腐烂、幼苗疾病或根腐病。
[0048]进行以下测试以检验包含巴西棕榈蜡颗粒的潜在作用。
[0049]阶段1-分离培养物 1.培养物保持使用指定有登记号的各分离物的继代培养物保持纪录。与所述继代培养物有关的所有的平板和载玻片都用登记号标记。
[0050]此外，由各原始培养物制备永久性的乳酚(LP)装片，并归档以用于参照目的。
[0051]在经过活的宿主继代之前，发生不多于三代的继代培养，并重新分离以保持所述生物的适合度。
[0052]在4°C下，将继代培养物在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)上储藏以备将来使用。
[0053]对各分离物指定登记号，并用此号码标记继代培养物。
[0054]提取DNA用于同一性验证，并在-20°C下储藏。在-20°C下将纯培养物的参照样品储藏于甘油上。一旦完成实验，重复培养物的DNA鉴定以确认所述生物在工作期间未发生突变。
[0055]2.致病剂的培养物
病原细菌从患病的组织至纯培养物的分离是鉴定和描述疾病的标准技术。它是证实先前未遇到的生物的病原性的必需步骤。
[0056]技术通常涉及:
a.表面灭菌处理；
b.使用适当的预防措施，涂布(可在选择性培养基上涂布)患病组织的样品；
c.继代培养以得到纯培养物。
[0057]3.培养物的纯化
将人工接种植物的小的消毒的根片在水琼脂上培养。最常出现的细菌菌落很可能是目标病原体。在被感染的植物组织中还可能存在多种腐生生物，并且它们可能与主要病原体一起生长入培养基中。常规的表面灭菌由以下组成:使用0.1%的次氯酸钠(NaOCl -有时被称为“NaCIO”)溶液擦拭组织(或将组织浸入)，随后用无菌的蒸馏水漂洗。为了获得病原体的纯培养物，使用火焰烤过的环或手术刀从菌落的生长边缘获取小样品，并且划线在预倾倒的PDA平板的表面上。包含的30mg/l的放线菌酮(能够抑制腐生的真菌生长的抗真菌剂)降低了细菌污染的风险。随着划线条斑在琼脂上发展，分离孢子，直到获得单独的孢子，将由所述孢子生长出单独的菌落。
[0058]重复此步骤直至获得纯培养物。
[0059]4.单独孢子的分离
单独孢子的分离对于研究病原变异性是重要的。将孢子的接种物置于包含10 ml无菌水的管中。将此孢子悬浮液延着薄的自来水琼脂培养基的表面上的标记线进行划线，并在22°C下温育。在24小时温育后，使用立体显微镜选择萌发的孢子，并每次将一个孢子转移至另一个琼脂平板。
[0060]5.用于微观检验和参照的载玻片制备
病原体而不是疾病的鉴别，需要对被感染的组织的显微镜检验。
[0061]将一滴水放入已在载玻片上建立的蜡环中。使用灭菌的并冷却的接种环，获得细菌菌落的极小样品。轻轻地将细菌混入水滴中。热固定细菌样品以将细菌杀死，紧紧地将涂片固定在显微镜载玻片上并使得样品更容易地染色。首先将细菌样品风干。随后使干燥的载玻片通过本生灯的火焰3或4次，涂片侧向上。一旦载玻片热固化，就对其进行染色。
[0062]丁香假单胞菌丁香致病变种为革兰氏阴性细菌。由于细胞壁肽聚糖的位置和外部的LPS膜，因此革兰氏阴性细菌染色呈粉色。与革兰式阳性细胞壁相比较，革兰氏阴性细菌的细胞壁在化学上更为复杂且更薄。肽聚糖仅占革兰氏阴性细胞壁的5-20%，且不是最外层，而是位于质膜和外膜之间。此外膜与质膜相似，但较不易被透过且由被分类为内毒素的有害物质，脂多糖类(LPS)构成。
[0063]革兰氏染色步骤如下进行:
1.用结晶紫(主染色)冲洗载玻片。
[0064]2.1分钟后，用水洗漆载玻片。
[0065]3.用碘冲洗载玻片(碘为使结晶紫与革兰氏+细胞壁结合的媒染剂)。
[0066]4.1分钟后,用水洗漆载玻片。[0067]5.用丙酮醇冲洗载玻片(醇为脱色剂，其将染色剂自革兰氏阴性细胞除去)。
[0068]6.在10或15秒后，用水洗涤载玻片(不要使脱色剂停留太长时间，否则其可能也会将染色剂自革兰氏阳性细胞除去)。
[0069]7.用Safrinin (复染剂)冲洗载玻片。
[0070]8.1分钟后，用水洗涤载玻片。
[0071]9.轻轻地将载玻片吸干。其即已准备好在油浸下使用明视野复合显微镜(1000xTM)观察。
[0072]在通过脱色剂除去主染色剂之后留下复染剂，革兰氏阴性细胞将呈现粉色。
[0073]10.生长和培养基
在一系列温度:15°C、20°C和25°C下评价继代培养物的生长和萌发。检验一系列的培养基的适合性。尽管PDA通常适于大多数的真菌物种，但已发现使用低营养琼脂例如自来水琼脂降低增殖性生长(prolific growth),并且可以促进孢子形成。因此,在评价实验中包括PDA、自来水琼脂、和来自文献的选择性培养基，改进的Tween培养基B (McGuire,R.G.1986 Plant Disease 70: 887)。
[0074]使用经火焰烤的木塞穿孔器从活跃生长的培养物的边缘切下5_直径的盘。将其颠倒置于预先倾倒的培养基平板的中心。对于每个培养基类型和温度制备5个重复(总计45个平板)。对各温育器中的平板施以完全的随机化。对平板进行观察，直至一个培养物成功地完全覆盖任一种培养基中的平板。此时进行以下测量:菌落直径、颜色和边缘。此外，记录孢子形成的水平。
[0075]使用经火焰烤的木塞穿孔器从各平板切下五个5mm的盘，并悬浮于20ml的蒸馏水(+0.05% Tween 20?)中。随后将样品超声2分钟，以释放孢子，并随后漩涡以有助于均一的孢子悬浮液的形成。使用标准的计数方法，使用改善的Neubauer血球计评价样品的孢子浓度。
[0076]计算各培养基类型的平均值，并且应用ANOVA以检验结果的显著差异。
[0077]阶段2 -体外研究:
1.筛选微生物和巴西棕榈蜡以测定相互作用
为了解释观察到的作用，对比巴西棕榈蜡，筛选微生物、病原体和拮抗剂，以鉴定任何仅载体的作用。这将使得能够测定处理效果以及由于使用拮抗剂以及巴西棕榈蜡颗粒的应用而导致发生的任何协同作用。
[0078]a.基于上述实验的发现，使用合适的培养基的平板。使用高压灭菌器将经空气研磨的巴西棕榈蜡灭菌，并随后使用双刀片磨研磨，产生具有130Mm的近似VMD的颗粒。随后将经灭菌的培养基冷却至50°C (熔融阶段)。随后将巴西棕榈蜡引入培养基。测试两种浓度的巴西棕榈蜡:lg/l和10g/l。使用经火焰烤的木塞穿孔器从活跃生长的培养物的边缘切下5_直径的盘。将其颠倒置于预先倾倒的培养基/巴西棕榈蜡平板的中心。对于每个浓度制备5个重复，并在生长/孢子形成的最优温度(如先前的实验中所测定)温育。使用获自上述生长和培养基实验的数据，将生长速率和特性与对照相比较。
[0079]使用ANOVA分析差异。
[0080]b.将病原体的盘和拮抗剂与不同的巴西棕榈蜡处理剂一起粉化，并且置于适合的培养基上。为能够进行此实验，要求巴西棕榈蜡颗粒不含微生物。对经处理的生物和未经处理的生物的生长进行比较。
[0081]2.d.研究针对病原体的拮抗作用
1.拮抗剂对于丁香假单胞菌丁香致病变种的生存力的作用(体外测试I)
在PDA或预先确定的培养基上，在双培养物测试中测试对抗病原细菌的所有拮抗性分离物。将丁香假单胞菌丁香致病变种和待测试的拮抗剂分离物的琼脂栓在9cm琼脂平板上以7cm间隔排列。在13.5°C、18°C和22.58°C下温育7天之后，评价抑制区域和重叠区域。当拮抗剂在丁香假单胞菌丁香致病变种上生长的情况下，通过显微镜(IOOx)研究两者之间的相互作用区域。此外，在第一次接触后5天，通过将蔬菜盘转移至水琼脂平板上测试相互作用区域中丁香假单胞菌丁香致病变种的生存力。将各实验重复3次，每个重复使用3个样品。
[0082]i1.拮 抗剂对于体外产生的丁香假单胞菌丁香致病变种的萌发的作用(体外测试II)
将均一大小的丁香假单胞菌丁香致病变种孢子置于拮抗剂的6天龄的培养物上(PDA，200C )。在20°C下温育14、28和35天之后，将每个重复(每个拮抗剂三个重复)的8个孢子自琼脂平板转移至水琼脂。在光学显微镜下(IOOx)对由这些孢子的生长进行评价。
[0083]3.病原性的确认
实施Koch法则的步骤(Koch 1890，设计用于建立致病微生物和疾病之间的致病关系的标准)。
[0084]a)描述由患病的作物植物表现的症状。
[0085]b)分离可疑的病原体-相同的培养物应由具有相似症状的植物分离。
[0086]c)获得纯培养物并使用其接种健康的植物物质。
[0087]d)观察由接种的植物表现的症状-症状应与初始地在作物植物中观察到的那些症状相同。
[0088]e)自新患病的物质再次分离病原体。培养物应与初始的纯化的培养物相同。
[0089]1.间接施用-植物
使用健康的植物-可以使用由纯琼脂培养物或由烧瓶中生长的培养物制备的孢子悬浮液直接地对土壤进行接种。可以在萌芽后添加真菌孢子或细菌悬浮液，使得根系统被悬浮液浸透。随后观察植物7天并记录症状。实施Koch法则以确认症状与接种的病原体有关。
[0090]i1.直接施用-种子用于制备孢子悬浮液的接种物在包含无菌种子的水琼脂上生长。从菌落刮出真菌孢子和菌丝或细菌孢子和营养生长物并转移至无菌水。将此孢子悬浮液施用至种子并混合以确保均一的分布。随后将种子:
?置于潮湿的滤纸上并在最优生长温度下温育5天。
[0091].播种在热灭菌的盆栽堆肥中，并在最优生长温度下在种子箱中温育7天。
[0092]记录两组实验的症状表现和萌发，并实施Koch法则。
[0093]4.巴西棕榈蜡/拮抗剂协同定位分析
使用孢子分离器制备孢子的干燥粉末配制物。使用除湿器和二氧化硅小球将配制物的含水量降低至低于5%。使用Neubauer血球计和标准化的计数方法测定孢子浓度。
[0094]在Boyes微粉化方法中的空气研磨中的步骤(用于分别具有约15Mm和75Mm的VMD的巴西棕榈蜡颗粒)
1.首先，根据制造商的说明，在KT Handling Ltd 04型粗磨机(序列号729/C)中将2kg巴西棕榈腊块粗磨成约4-6mm的片。
[0095]2.随后,使粗磨的片经过Apex Construction Ltd 314.2型号粉碎磨(序列号A21306)并且将大小进一步减小至250-300um的范围。
[0096]3.随后，根据制造商的说明，使粉碎的颗粒经过Hosokawa Micron Ltd Alpine100AFG喷射磨(序列号168092)，将磨设定在适合的速度(对于具有15Mm的VMD的颗粒，速度为8000rpm或对于具有75Mm 的VMD的颗粒，速度为2500rpm)，以及0.03巴的正系统压力。
[0097]4.将研磨空气保持在6巴，将系统冲洗空气流和分级轮间隙冲洗空气均设定为最小0.5巴且不高于0.75巴，清洁空气过滤器将记录不多于5巴的δ，以获得所需的具有15um或75Mm的VMD的最终粒度。
[0098]在三个负荷(见下文)下将Entostat与蔬菜种子组合。
[0099]对分别具有15Mm和75Mm的VMD的两种大小的巴西棕榈蜡颗粒，以两种不同比例(1:3,2:2)与孢子配制物组合进行检验。使用电子显微照相术分析巴西棕榈蜡/孢子混合物的样品，以确定协同定位作用。记录观察到的任何变化。
[0100]此外，将提及的两种大小的巴西棕榈蜡均与菌丝体的均质化样品混合，并如上所述进行检验。
[0101]5.巴西棕榈蜡颗粒负荷
通过使用显微照相术(定性)和荧光分析(定量)估算粘附到种子的巴西棕榈蜡颗粒。使用分别具有15Mm和75Mm的VMD的两种大小的巴西棕榈蜡颗粒(含1% glo-brite)。三种组合:两种比例的巴西棕榈蜡/孢子配制物，和赋形剂对照(仅巴西棕榈蜡)，产生总计6种处理。将处理施用至IOg种子并重复三次。由各次重复获取三个子样品，并将平均值用于分析。
[0102]对于荧光分析，将三个Ig样品各自添加至5ml乙醇，并超声处理以有助于巴西棕榈腊颗粒自种子的释放。使用Perkin Elmer L55突光计(Perkin Elmer, Ma, USA)分析样品。使用ANOVA进行处理之间的差异的统计学分析。
[0103]作物物种之间的种子大小和结构显著地不同，且这影响施用比率和方法。通过将种子和巴西棕榈蜡配制物在置于Wheaton辊上的圆筒中翻转5分钟而获得均质的混合物，所述圆筒通过包含具有角度的内部轮叶而适于产生侧向混合/翻转。
[0104] 阶段3-体内:
将丁香假单胞菌丁香致病变种以及最成功的拮抗剂模型用于一系列的体内试验。基本设计是温度为主区因素(15°C、20°C和25°C )且巴西棕榈蜡/拮抗剂比例(2种处理:2x孢子)为子区因素的裂区试验。使用上述方法制备各处理的4个均质混合物，并且这些表示重复次数。
[0105]处理:
1)施用比率1- 7.5 X IO6分生孢子kg—1
2)施用比率2- 7.5 X IO8分生孢子kg—1
3)对照1-赋形剂对照(仅巴西棕榈蜡)
4)对照2-无处理
混合物(真正的重复):A、B、C、D
各混合物的子样品:α、β
根据随机的区组设计安排混合物和处理。
[0106]盆栽研究
各温度(生长室)包含60个植物盆栽。
[0107]根据供应商的建议播种经处理的种子。在用IOml 丁香假单胞菌丁香致病变种孢子悬浮液接种之前，将土壤/堆肥(1:1 John Innes 2号和泥炭堆肥)热灭菌，并在播种前充分混合。
[0108]将植物置于生长室中21天的时间，并在萌芽后每48小时观察症状表现。通过毛细作用垫施水，每天两次。
[0109]在21天后，将植物自其盆中移出，并进行以下评价测量:
?%萌发
?%萌芽前立枯病
?%萌芽后立枯病 ?根重
?芽重。
[0110]此外，基于损伤等级(FA0 1971)评价症状表现。
[0111]对每种处理，使用AN0VA，比较由子样品α、β、Y获得的测量的平均值。
[0112]自显示症状的5个植物获得样品并实施Koch法则以确认致病生物(通过与主培养物的参考载玻片进行比较)。
[0113]重复进行实验。
[0114]第二实施例
使用霜脲氰，通过种子处理的方式控制菜豆上的立枯丝核菌[英国国家菌种保藏中心(UKNCC)]。
[0115]实验设计-如上述实施例1中的盆栽研究
使用铜平底锅熔化巴西棕榈蜡。在冷却过程中，添加巴西棕榈蜡质量的1%的霜脲氰。允许此混合物固化，随后，使用实施例1中描述的方法，通过空气磨刨削和加工，以制备具有25Mm的VMD的颗粒。[0116]用于盆栽研究的处理_
对照1-赋形剂对照(仅巴西棕榈蜡)
对照2 -无处理
处理1-每kg种子5g 1%霜脲氰巴西棕榈蜡 处理2 -每kg种子1.6g 1%霜脲氰巴西棕榈蜡 评价和分析与先前的盆栽研究相同。
[0117]第三实施例 涉及:
使用噻虫嗪，通过种子处理的方式控制金针虫属种iAgriotes spp.鞘翅目:叩甲科)，其也被称为线虫，为磕头虫的幼虫形式。
[0118]早季线虫损害由被挖空的种子组成，其中，幼虫已在萌发期间进入。幼苗植物也可能受到钻入在土壤线下的植物的幼虫的损伤或被其杀死。偶尔地，线虫钻入较大的植物的茎，并掘入几英寸，但损害不显著。
[0119]实验设计-如上述实施例1的盆栽研究
使用铜平底锅熔化巴西棕榈蜡。在冷却过程中，添加巴西棕榈蜡质量的1%的噻虫嗪。允许此混合物固化，随后，通过磨刨削和加工(使用实施例1的方法)，以制备具有25ΜΠ1的VMD的颗粒。
[0120]用于盆栽研究的处理_
对照1-赋形剂对照(仅巴西棕榈蜡)
对照2 -无处理
处理1-每kg种子4.2g 1%噻虫嗪巴西棕榈蜡 处理2 -每kg种子1.3g 1%噻虫嗪巴西棕榈蜡
在使用盆栽土填充之前，将空盆用尼龙网筛物质内衬。建立线框，并且将尼龙网筛在框上打结，以提供笼形的实验场所，其设计使得昆虫不能逃离处理的区域。
[0121]使种子萌发三天，随后将5只第三龄的幼虫添加至各盆的土壤表面，随后将筛笼重新密封。
[0122]观察进行21天。
[0123]评价植物的:
?%萌发 ?损害 ?根重 ?芽重。
[0124]按照实施例1中详述的步骤，以检验哈茨木霉[英国国家菌种保藏中心(UKNCC)]、荧光假单胞菌[UKNCC]和枯草杆菌[UKNCC]对胡椒{Capsicum sp.)的细菌性病原体丁香假单胞菌丁香致病变种的拮抗作用。
[0125]按照实施例1中详述的步骤，以检验哈茨木霉[英国国家菌种保藏中心(UKNCC)]、荧光假单胞菌[UKNCC]和枯草杆菌[UKNCC]对豌豆iPisum sativum)的细菌性病原体丁香假单胞菌的拮抗作用。
[0126]按照实施例1中详述的步骤，以检验哈茨木霉[英国国家菌种保藏中心(UKNCC)]、荧光假单胞菌[UKNCC]和枯草芽孢杆菌[UKNCC]对矮生西葫芦{Cucurbita pepo)的细菌性病原体丁香假单胞菌丁香致病变种的拮抗作用。
[0127]按照实施例2中详述的步骤，以检验甲霜灵对于胡椒的真菌性病原体腐霉属种的作用。
[0128]按照实施例2中详述的步骤，以检验灭菌唑对于西葫芦的真菌性病原体丝核菌属种的作用。
[0129]按照实施例2中详述的步骤，以检验甲霜灵对于豌豆的真菌性病原体根腐丝囊霉(Aphanomyces euteiches)的作用。
[0130]按照实施例3中详述的步骤，以检验噻虫嗪对胡椒的害虫线虫ifonochrusvesper tinus)的作用。
[0131]按照实施例3中详述的步骤，以检验吡虫啉对矮生西葫芦的害虫南方玉米根虫{JJiabrotica undecimpunctata howardi)的作用。
[0132]按照实施例3中详述的步骤，以检验噻虫嗪对豌豆的害虫斑点夜蛾(Feltiasub terranea)的作用。
[0133]使用包含木霉属种和巴西棕榈蜡颗粒的种子包衣抑制萝卜中真菌性疾病的致病剂
木霉属种(子囊菌门(Ascomycota))作为生物防治剂在抗植物病原体的防御中的潜能是已知的。
[0134]木霉菌丝能够穿透其他真菌的菌丝并且自其中抽取营养，导致对宿主的抑制并最终导致其死亡。木霉显示出快速的菌丝体生长并且能够与其他真菌竞逐养分。
[0135]有多种作为作物保护产品销售的可商购的木霉配制物。这些配制物通常作为可湿的粉末配制物供应并且作为浸液(drench)施用至种植区域。此施用形式的缺陷在于必须处理整个种植区域，而需要所述处理的是紧紧围绕种子或植物的区域。递送至此区域的分生孢子的数量越大，它们能够给予的控制水平越高。因此，在木霉的应用中，能够将足量的分生孢子递送至要求的区域的靶向施用系统提供优于常规施用的明显优势。
[0136]实验目标:为评价Entostat作为种子包衣技术用于递送有益的微生物的潜在应用
方法
在Boyes微粉化方法中的空气研磨中的步骤(用于具有约IOMm的VMD的巴西棕榈蜡颗粒)。
[0137]1.首先，根据制造商的说明，在KT Handling Ltd 04型粗磨机(序列号729/C)中将2kg巴西棕榈蜡块粗磨成约4-6mm的片。
[0138]2.随后,使粗磨的 片经过Apex Construction Ltd 314.2型号粉碎磨(序列号A21306)并且将大小进一步减小至250-300um的范围。
[0139]3.随后，根据制造商的说明，使粉碎的颗粒经过Hosokawa Micron Ltd Alpine100AFG喷射磨(序列号168092)，对于具有约IOMm的VMD的颗粒，将磨设定在12，500rpm的速度，和0.03巴的正系统压力。
[0140]4.将研磨空气保持在6巴，将系统冲洗空气流和分级轮间隙冲洗空气均设定为最小0.5巴且不多于0.75巴，清洁空气过滤器将记录不多于5巴的δ，以获得具有9.7Mfli的VMD的最终粒度。
[0141]在三个负荷(见下文)下将Entostat与含油种子组合。
[0142]1.基线数据:种子包衣技术
1.1种子包衣。使用具有9.7Mm的VMD的巴西棕榈蜡颗粒，将具有95%的萌发百分比的哈茨木霉(包含7.75xl09菌落形成单位g' Sylvan Bio, Loches, France)施用至由Herbiseed提供的萝卜(Cherry Belle品种,Twyford, UK)。基于获自文献的信息,将目标负荷设定为每粒种子IO5个分生孢子。
[0143]以不同的比例将巴西棕榈蜡颗粒与干燥的分生孢子粉混合，并将0.01g (0.2质量％)直接施用至干种子，每个浓度5g种子。对于每个浓度，将10粒种子的四个批次用于评价分生孢子负荷。
[0144]使用的分生孢子与巴西棕榈蜡的比例为:
100%分生抱子、50%分生抱子、25%分生抱子和9%分生抱子，在各情况下剩余部分由巴西棕榈蜡颗粒构成。
[0145]1.2 计数。通过使用血球计(Improved Neubauer, Hawksley, Lancing, UK)进行直接计数以测定种子的分生孢子负荷。
[0146]兹#数:悬浮液的制备。
[0147]通常在水载体中配制繁殖体，但具有疏水细胞壁的那些(例如木霉)不易悬浮于水中。为了使疏水的繁殖体均一地悬浮于水中，需要超声处理和/或使用机械悬浮方法。使用微型杵进行繁殖体的机械悬浮提供了分生孢子在水中的良好悬浮液，而没有导致对细胞的损害。表面活性剂也可有助于繁殖体的悬浮(0.05%的TWeen20)。为了使疏水的分生孢子悬浮，将收获的分生孢子置于1.5ml微量离心管中，将~0.5ml无菌水添加至所述管，将微型杵插入管中，并将分生孢子物质轻轻地用微型杵手动搅拌。微型杵与电动机(例如Kontes, Argos球团研磨棒电动机)连接并且将悬浮液剧烈搅拌，同时将所述研磨棒上下移动和左右移动约30秒。由于血球计方法不能分辨能有生存力的和无生存力的繁殖体，因此需要确定孢子生存力，由此可以在有生存力的繁殖体的基础上准备剂量。
[0148]对每个处理，在4个批次的种子上进行种子洗涤和木霉负荷的计数。通过置入Eppendorf管中的1ml无菌0.05% Tween20 (或替代物-相似的非离子表面活性剂/分散剂)中，并且漩涡30秒以自种子表面除去分生孢子，从而将接种物从种子洗去。随后将样品超声处理两分钟以破坏任何分生孢子簇。将获得的计数用于计算由各种处理包衣的种子的平均分生孢子负荷。将使用100%分生孢子粉获得的结果用作基准，且将与其作比较的分生孢子/巴西棕榈蜡组合粉末作为对负荷的效率的测定。
[0149]通过在木霉特异性培养基(TSM)上的稀释铺板实现对分生孢子生存力的确认(参见下文)。设定稀释系列，并自所述系列接种平板，一式两份。7天后进行菌落形成单位(CFU)计数，允许对种子上的接种物水平进行定量。此外，将新鲜的未使用的分生孢子铺板，以提供种子施用之前和之后的对照。
[0150]还测量萌发百分比。通过将100μl中的约IO6个分生孢子铺展在9cm皮式培养皿中的培养基上而获得令人满意的分生孢子密度。在25°C下将分生孢子在黑暗中温育5天，并且，随后使用乳酚将待观察的区域固定。使用倒置的复式显微镜的相差显微术使得能够对分生孢子进行充分检验。[0151]如果芽管的长度为所研究的繁殖体的直径的两倍，则认为分生孢子是有生存力的。在任意选择的视野中或在平行的横断面中，对使用目镜测微计限定的萌发的和未萌发的分生孢子的数目进行计数。最少计数300个分生孢子以提供准确的估计。期望测定在一式两份的培养物上和相同平板上不同的位置处的繁殖体的生存力。
[0152]这允许对种子包衣技术进行校准以对于每种包衣方法，在种子上获得相似水平的木霉负荷。
[0153]1.3种子萌发。在9cm皮式培养皿中，将来自每种处理的一个批次的种子(5粒种子)置于种子测试纸(Whatman 181)上。将培养皿用Parafilm密封并在20°C下保持7_10天，并测定萌发率。使用未处理的种子重复此步骤。
[0154]制备木霉选择培养基(改良自Williams, Clarkson等,2003),如下所述:
对于1000ml
基础培养基成分:
0.2g MgSO4
0.9g K2HPO4
0.15gKCl
1.0g NH4NO3
3.0g葡萄糖
0.15g玫瑰红
20g琼脂
950ml蒸馏水
基础培养基加工
在IL Erlenmeyer烧瓶中将液体成分与除琼脂以外的全部固体成分混合。添加20g琼脂并搅拌或震荡。用棉絮塞住并用金属箔覆盖。高压蒸汽灭菌。
[0155]灭菌培养基(每升)
0.25g结晶的氯霉素
0.2g五氯硝基苯
0.2g克菌丹
1.2ml 霜霉威(Previcur)
50ml无菌蒸懼水
种子重量
用作种子批次的均匀性的测量。对8个重复的25粒种子进行称量，并且记录变异系数(CV)。此系数应不超过5的值。如果其超过5，则重复所述步骤，且将所有16个样品的平均值用于计算每克的种子数。
//'-.-1fSi) (V --ιΙΨ fgi
奴卜CUBO OCW 4.216 8.Q2I5
[0156]结果
使用血球计的直接计数
使用血球计测定的哈茨木霉干燥孢子配制物的初始孢子密度(在5%水含量)为7.75X IO9 个孢子 g_1 (n=4, ±2.6 x IO7 95%CL)。
[0157]种子洗液的孢子计数
【权利要求】
1.蔬菜植物结构包衣组合物，其中所述包衣组合物包含至少一种颗粒形式的有机载体物质和具有对抗至少蔬菜植物的一种或多种病原体的活性的一种或多种生物试剂，其中所述载体物质选自具有> 50°摄氏度的熔点的蜡。
2.如权利要求1所述的包衣组合物，其中所述植物结构为蔬菜植物的种子的植物结构。
3.如权利要求1所述的包衣组合物，其中所述蜡的颗粒具有>5Mffl的体积平均直径。
4.如权利要求1-3中任一项所述的包衣组合物，其中所述颗粒具有在8-200Mm的范围内的的体积平均直径。
5.如权利要求1-4中任一项所述的包衣组合物，其中所述生物试剂选自化学试剂和活生物试剂；或其两种或多种的混合物。
6.如权利要求1-5中任一项所述的包衣组合物，其中所述生物试剂选自化学杀真菌齐L1、杀节肢动物剂包括杀昆虫剂和杀蝴剂、杀细菌剂；或其两种或多种的混合物。
7.如权利要求1-6中任一项所述的包衣组合物，其中所述生物试剂选自杀真菌剂和杀昆虫剂；或其两种或多种的混合物。
8.如权利要求1-7中任一项所述的包衣组合物，其中所述杀真菌剂选自在本发明中有用的杀真菌剂并且包括芳香族杀真菌剂例如氯硝胺[2，6- 二氯-4-硝基苯胺]，托布津杀真菌剂例如Topsin M [甲基托布津]，二硫代氨基甲酸酯杀真菌剂例如福美双[二硫化四甲基秋兰姆或二硫化双(二甲基硫代氨甲酰)]和代森锰锌[亚乙基双(二硫代氨基甲酸)锰(聚合的)与锌盐的复合物]，酰基氨基酸杀真菌剂例如甲霜灵[#_(甲氧基乙酰基)-#-(2，6_ 二甲苯基)-DL-丙氨酸甲酯];和酰基氨基酸杀真菌剂例如精甲霜灵[#_(甲氧基乙酰基)-#_(2，6-二甲苯基)-D-丙氨甲酸酯]，邻苯二甲酰亚胺杀真菌剂例如克菌丹[N-(三氯甲基硫代)环己-4-烯-1，2-二甲酰亚胺]，康唑杀真菌剂例如苯醚甲环唑[3-氯-4- [ {2RS, ARS, 2RS, ASR) ~4~ 甲基2，4-三唑-1-基甲基)-1, 3- 二氧戊环-2-基]苯基-4-氯苯基醚]，枯草芽孢杆菌GB03，吡咯杀真菌剂例如咯菌腈[4-(2，2-二氟-1，3-苯并二氧代-4-基)-LY-吡咯-3-腈]，噁唑杀真菌剂例如恶霜灵[2-甲氧基-N- (2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基)乙酰-2’，6’ - 二甲苯胺](用于豌豆和豆类)和EBDC杀真菌剂例如混合物乙撑双二硫代氨基甲酸酯；及其两种或多种的混合物。
9.如权利要求1-8中任一项所述的包衣组合物，其中所述杀节肢动物剂为杀昆虫剂，其选自吡虫啉[⑶-1-(6-氯-3-吡啶基甲基)-N-硝基咪唑烷-2-亚基胺]、灭虫威[4-甲基硫代-3，5-二甲苯基甲基氨基甲酸酯]、硫双威[(3M，12￡Z)-3, 7,9, 13-四甲基-5，11- 二氧杂-2，8，14-三硫杂-4，7，9，12-四氮杂十五烷_3，12- 二烯-6，10- 二酮]，和噻虫胺[仏)-1-(2-氯-1，3-噻唑-5-基甲基)-3-甲基-2-硝基胍];和其两种或多种的混合物。
10.如权利要求1-9中任一项所述的包衣组合物，其中所述有机载体物质选自具有>50°C的熔化温度的腊，例如巴西棕榈腊、蜂蜡、褐煤腊、白蜡、紫胶蜡、鲸腊、小烛树腊、蓖麻蜡、小冠巴西棕蜡，和米糠蜡；或其两种或多种的混合物。
11.如前述权利要求中任一项所述的包衣组合物，其中所述颗粒为巴西棕榈蜡颗粒。
12.如前述权利要求中任一项所述的包衣组合物，其中所述病原体为细菌物种、真菌物种或节肢动物物种。
13.如权利要求1-5中任一项所述的包衣组合物，其中所述活生物试剂为至少一种生物拮抗剂，其以位于所述颗粒的表面上和/或所述蔬菜植物结构，例如种子的表面上的细菌孢子和/或真菌孢子的形式存在。
14.有机载体在制备包括如权利要求5-9中任一项中定义的生物试剂的如权利要求1-13中任一项所述的包衣组合物中的应用，其中所述有机载体由蜡的颗粒构成。
15.如权利要求14所述的应用，其中所述包衣组合物为蔬菜种子包衣组合物。
16.如权利要求14或权利要求15所述的应用，其中所述有机载体颗粒选自天然蜡、合成蜡和无机蜡，其具有> 50°C的熔点，优选> 60°C的熔点，且优选地由具有> 70°C的熔点的硬蜡构成。
17.如权利要求14-16中任一项所述的应用，其中所述有机载体颗粒选自巴西棕榈蜡、蜂蜡、褐煤蜡、白蜡、紫胶蜡、鲸蜡、十六酸蜂花酯、鲸蜡醇十六酸酯、小烛树蜡、蓖麻蜡、小冠巴西棕腊、羊毛腊、甘鹿腊、retamo腊和米糠腊,或其两种或多种的混合物。
18.如权利要求14-17中任一项所述的应用，其中所述蔬菜植物结构包衣组合物包含巴西棕榈蜡的颗粒。
19.如权利要求12-16中任一项所述的应用，其中所述有机载体颗粒具有>5Mm的体积平均直径，例如在8 μ m-200 μ m的范围内的体积平均直径。
20.蜡作为干燥颗粒的形式的有机载体在如权利要求1-13中任一项所述的蔬菜种子包衣组合物中的应用。
21.如权利要求20所述的应用，其中所述有机载体颗粒选自天然蜡、合成蜡和无机蜡，其具有> 50°C的熔点，更优选> 60°C的熔点，且最优选地由具有> 70°C的熔点的硬蜡构成。`
22.如权利要求20或21所述的应用，其中所述有机载体颗粒选自巴西棕榈蜡、蜂蜡、褐煤蜡、白蜡、紫胶蜡、鲸蜡、十六酸蜂花酯、鲸蜡醇十六酸酯、小烛树蜡、蓖麻蜡、小冠巴西棕蜡、羊毛蜡、甘蔗蜡、retamo蜡和米糠蜡，或其两种或多种的混合物。
23.如权利要求20-22中任一项所述的应用，其中所述种子包衣组合物包含巴西棕榈蜡的有机载体颗粒。
24.如权利要求20-23中任一项所述的应用，其中所述有机载体颗粒具有>5Mm的平均体积直径，例如在> 8 μ m-200 μ m的范围内的平均体积直径。
25.制备如权利要求1-13中任一项所述的蔬菜种子包衣组合物的方法，包括: (1)选择有机载体物质，其中所述载体物质选自具有>50°摄氏度的熔点的蜡； (2)将所述有机载体物质粉碎为期望的体积平均直径>δμπι的颗粒，例如体积平均直径在8 μ m-200 μ m的范围内的颗粒；和 (3)将生物试剂添加至步骤2)的产品颗粒。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述有机载体物质选自巴西棕榈蜡、蜂蜡、褐煤蜡、白蜡、紫胶蜡、鲸蜡、十六酸蜂花酯、鲸蜡醇十六酸酯、小烛树蜡、蓖麻蜡、小冠巴西棕蜡、羊毛腊、甘鹿腊、retamo腊和米糠腊,或其两种或多种的混合物。
27.如权利要求25或权利要求26所述的方法，其中所述物质为巴西棕榈蜡。
28.如权利要求1-13中任一项所述的包衣组合物，其用于蔬菜植物结构上。
29.如权利要求28所述的包衣组合物，其中所述蔬菜植物结构为蔬菜种子，其选自以下的种子:十字花科植物成员(卷心菜、西兰花、菜花、羽衣甘蓝、抱子甘蓝、球茎甘蓝)、豆类、甜菜、西兰花、胡萝卜、芹菜、大白菜、葫芦科植物、茄子类(茄子)、大蒜、芥菜、青萝卜、瑞典甘蓝、芜菁、糖用甜菜、根芹菜、洋姜、朝鲜蓟、小白菜、青豆例如红花菜豆、扁豆、法国菜豆、蚕豆、辣根、韭葱、莴苣、香瓜、秋葵(干燥的和绿色的)、洋葱、欧芹、欧洲防风、豌豆、胡椒(辣椒)、南瓜/笋瓜、萝卜、菠菜、矮生西葫芦、甜玉米、甘薯、番茄、西瓜、和白马铃薯。
30.使用包衣组合物包衣蔬菜植物结构例如蔬菜种子的方法，所述包衣组合物包含有机载体物质和对于一种或多种真菌性病原体、细菌性病原体和节肢动物病原体的生物试剂，所述方法包括将生物试剂添加至有机载体物质，其中所述有机载体物质为干燥颗粒的形式，将所述两种组分混合在一起，并将所得组合物施用至蔬菜植物结构，例如蔬菜种子。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述包衣组合物包含以干燥颗粒的形式施用至蔬菜植物种子的干燥的颗粒组合物。
32.如权利要求30或权利要求31所述的方法，其中所述包衣组合物包含有机载体物质，所述有机载体物质包含颗粒形式的有机蜡，其选自具有> 50 0C的熔点的蜡，例如巴西棕榈蜡、蜂蜡、褐煤蜡、白蜡、紫胶蜡、鲸蜡、十六酸蜂花酯、鲸蜡醇十六酸酯、小烛树蜡、蓖麻腊、小冠巴西棕腊、羊毛腊、甘鹿腊、retamo腊和米糠腊,或其两种或多种的混合物。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述包衣组合物包括一种或多种生物试剂，其选自化学杀昆虫剂和杀蝴剂、杀真菌剂、杀细菌剂和活生物试剂。
34.如权利要求30-33中任一项所述的方法，其中所述有机载体物质为巴西棕榈蜡。
35.如权利要求34所述的方法，其中所述生物试剂选自杀真菌剂和杀昆虫剂。
36.如权利要求30-3 4中任一项所述的方法，其中所述生物试剂是活生物试剂，其选自假单胞菌属种iPseudomonas spp.)例如丁香假单胞菌iP.syringe)、突光假单胞菌{P.fluorescens) A506,木霉属种{Trichoderma spp.)例如绿色木霉(J.viride),链霉菌属种iStreptomyces spp.)例如利迪链霉菌i^treptomyces Iydicus)，白粉寄生抱 iAmpelomyces quisqualis)分离菌 M_10,芽抱杆菌属种(Bacillus spp.)例如枯草芽抱杆菌(Bacillus subtil is) GB03、短小芽抱杆菌(Bacillus pumilus) GB34、地衣芽孢杆菌(汉,和巨大芽孢杆菌(5.?egaieriw?),伯克氏菌属种(Burkholder!a spp.)例如洋葱伯克氏菌 Wisconsin 型(β.cepaciatype Wisconsin) >小盾壳霉、Coniothyrium、放射形土壤杆菌 iAgrobacterium radiobacter)菌株84、灰绿链霉菌i^treptomyces griseoviridis)菌株K61、放射形土壤杆菌K1026,粘帚霉属种{Gliocladium spp.)例如链抱粘帚霉{G.catenulatmi)霉(Jrichodermaharzianium) Rifai菌株KRL-AG2 (T-22、枯草芽孢杆菌GB03或短小芽孢杆菌GB34，和绿粘帚霉{Gliocladium virens)(又名绿色木霉)GL-21。
37.包含如权利要求1-13中任一项所述的包衣组合物的蔬菜植物结构。
38.如权利要求37所述的蔬菜植物结构，其为种子或鳞茎或块茎。
39.如权利要求37或权利要求38所述的蔬菜植物结构，其为蔬菜种子。
40.包衣的蔬菜植物结构，例如蔬菜种子，其包含如权利要求1-13中任一项所述的包衣组合物。
【文档编号】A01P7/00GK103635084SQ201280030540
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2012年4月19日 优先权日:2011年4月20日
【发明者】N.H.H.杰索普 申请人:埃克索塞克特有限公司