病原体和物质陷阱的制作方法

病原体和物质陷阱的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种物质组合物作为药物组合物及其使用方法。所述物质组合物包括：由一个支架包围的至少一个活性部分，所述支架用于对象的选择性流入，所述对象能够与所述至少一个活性部分相互作用。
【专利说明】病原体和物质陷阱
[0001] 技太领域和背景持太
[0002]本发明涉及一种用于阻断、结合或处理底物和病原体的复合物。
[0003] 病毒性感染的有效治疗仍是现今生物医药的一大挑战。当今的猪流感和HIV大流 行表明现在的科学技术仍不能有效克制和治疗病毒爆发。
[0004]尽管病毒性疾病的数目巨大，但仅有少数特定可用的抗病毒疗法。迄今为止，疫苗 被当做治疗病毒最有效的形式。但是，疫苗可能没有效用或产生可能致命的副作用的危险。 除了疫苗，也有少量药物被设计通过抑制病毒或宿主酶来减轻病毒感染。这些小分子抑制 剂可能产生毒性副作用的风险，或由于病毒种群的突变导致耐药菌株的形成。
[0005] 所以，抗病毒疗法通常包括感染之前免疫系统的预防活化，或经小分子抑制剂的 病毒感染细胞的靶向。对于病毒在宿主细胞感染之前失活的关注太少。
[0006] 一种上述方法，包括：通过使用携带有膜结合病毒受体的脂质体、细胞或原型细胞 的，在宿主细胞模拟中病毒的失活。所述方法依靠病毒-宿主相互作用，其在进化上是保守 的，甚至面临快速的病毒适应性。
[0007] 含有受体的脂质体(蛋白-脂质体）是潜在的病毒靶标，还是进化的陷阱。因为 病毒不能够在它们里面复制并失活。脂质体陷阱的概念最初在DE3711724所述，其中，脂 质体陷阱作为HIV的抑制剂。类似的描述见于公开文件ES2088752和W01996/022763中。 US571S915描述了添加催化酶到脂质体膜以诱导损害结合的病毒。使用蛋白脂质体作为 药物传输系统的其它类似的抗病毒体系也已经被Bronshtein等描述（2011，Journal of Controlled Release, Vol· 51，Issue2，p_ 139-148)，也被 US5, 773,027、US2008/0138351、 US6, 544, 958、Tuthill 等（2006doi:10. 1128/JVI. 80. 1. 172-180.2006)、Zhukovsky 等 (2010PLoS0ne，5(10) el3249)描述。
[0008] 含有受体的非宿主细胞(典型的RBCs)作为病毒陷阱的使用被EP0298280所描述。 在这种方法中，缺少核的RBCs作为一种陷阱,在所述陷阱内，感染病毒颗粒不能复制。类似 的方法也已经在出版物 US5677176、US7462485 和《0penWetWare20. 380HIV Project》中描 述。
[0009] 定义为原型细胞的仿造细胞的颗粒也能够用作呈现病毒专一性的受体（Porotto et al. (2011)PLoS0ne, 6(3) :el6874)〇
[0010] 使用抗病毒树状分子（Reuter et al. (1999)Bioconjugate Chem. 10(2) :271_8) 和蛋白质纳米管（Komatsu et al. (2011)J Amer Chem Soc. 133(10) :3246-8)的其它外部 多孔的病毒失活方法也已经进行了研究。
[0011] 尽管上述方法能够有效的治疗特定的病毒，都不能够提供一种对于广谱的病毒疾 病的方案。此外，上述方法由于不希望的体内细胞/分子的相互作用会受到限定。所述相 互作用导致不利的毒性效应、差的药物代谢和抗病毒药物的不稳定性、和抗病毒药物在体 内被免疫系统和其它器官快速的清除。
[0012]因此，这里仍然需要一种方法，所述方法能够用于治疗广泛的病原体感染而不受 到现有技术方法的上述限制。


【发明内容】

[0013] 根据本发明的一方面，本发明提供了一种物质组合物，所述物质组合物包含由支 架包围的至少一种活性部分，所述支架用于因子的选择性流入，所述因子能够与所述至少 一种活性部分相互作用。 t〇〇i 4] 根据本发明如下所述优选实施例中的进一步特征，所述支架包括核酸结构、聚合 物结构、和/或硅结构。
[0015] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述核酸结构为DNA折纸结 构。
[0016] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述结构为微机电系统(Micro Electro Mechanical System，MEMS)结构。
[0017] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述因子为物质、微生物或细 胞。
[0018] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述微生物选自含有病毒、细 菌、真菌、寄生虫、古菌、海藻和原生生物的群。
[0019] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述物质选自含有肽、多肽、朊 病毒、油脂、油脂复合物、核酸、糖、过敏原、毒素、激素、抗体、药物、小分子、污染物和矿物质 的群。
[0020] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述支架用于允许直径为 0· 01-50 μ m的因子选择性的流入。
[0021]根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述支架用于允许直径为 0· 01-0· 08 μ m的因子选择性的流入。
[0022] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述活性部分能够结合所述因 子药物。
[0023] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述活性部分选自包含抗体、 适体、受体、螯合剂、配体、脂质体、纳米管、树状分子、原细胞、细胞、肽、蛋白质、酶、化学品、 清洁剂、毒素、药物和药物前体的群。
[0024] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述活性部分能够裂解所述因 子或使所述因子变形。
[0025] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述活性部分选自包含酶、核 糖酶、化学品、酸、碱和清洁剂的群。
[0026] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述活性部分能够通过对微生 物非内源性的部分来结合所述微生物。
[0027] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，至少一个活性部分连接基团所 述支架。
[0028] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，至少一个活性部分通过连接体 连接所述支架。
[0029] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，至少一个免疫调整部分连接到 所述支架上。
[0030]根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述支架为非脂质支架。
[0031]根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述支架包括PEG或PEG衍生 物、或透明质酸。
[0032]根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述支架形成一个具有内部腔 体的颗粒。
[0033]根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，至少一个活性部分置于所述腔 体内。
[0034]根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，至少一个活性部分在所述空腔 内连接所述支架。
[0035]根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，至少一个活性部分在所述空腔 内连接载体，所述空腔依靠空腔尺寸结合到所述支架。
[0036]根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，至少一个活性部分在与所述因 子的相互作用后能够释放分子。
[0037] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述分子选自包含标志物、毒 素、激素、药物、核酸、蛋白质和佐剂的群。
[0038] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述支架进一步包含靶向部 分。
[0039] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述靶向部分选自包含受体、 抗体、适配子、组织特异性部分、微生物特异性部分、配体和磁体的群。
[0040] 根据本发明的另一方面，本发明提供了药物组合物，包含所述物质组合物和药学 上可接受的载体。
[0041] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述药学上可接受的载体被挑 选出来以适合口服、粘膜、外用或全身给药。
[0042] 根据本发明的另一方面，本发明提供了一种从流体中分离所述因子的方法，包含： 将所述流体暴露在物质组合物下,所述物质组合物包括由支架包围的至少一种活性部分， 所述支架用于因子的选择性流入，所述因子能够与所述至少一种活性部分相互作用，从而 从所述流体中分离所述因子。
[0043] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述流体为生物流体。
[0044] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述将生物流体暴露在物质组 合物下是通过给受试者服用所述物质组合物来受到影响。
[0045] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述流体为水流体。
[0046] 根据本发明所述优选实施例中的更进一步的特征，所述物质组合物为过滤器的一 部分，所述过滤器位于一个容器的内部或表面上。
[0047] 根据本发明的进一方面，本发明提供了一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含 SEQ ID NO :209-476中提出的序列。
[0048] 根据本发明的进一方面，本发明提供了一种包含本发明所述分离的多核苷酸的微 粒。
[0049] 根据本发明的进一方面，本发明提供了一种分离的多肽，所述多肽包含SEQ ID NO :477-485中提出的序列。
[0050] 根据本发明的进一方面，本发明提供了一种微粒，所述微粒包括本发明所述分离 的多肽。
[0051] 本发明通过提供一种用于预防或治疗病原体感染和从生物和非生物的流体中纯 化物质的物质组合物及其使用方法，成功地克服了现有己知组合物的缺点。
[0052] 除非另有限定，正如本领域普通技术人员通常所理解的，所有在此使用的技术和 科学上的术语具有相同的意思，尽管类似或等同的在此描述的方法和物质能够用于实践或 本发明的测试,合适的方法和物质如下所述。在冲突的情况下，包括定义在内的专利说明书 将得到控制。另外，所述物质、方法和实施例仅用来说明本发明而不用于限定本发明。

【专利附图】

【附图说明】
[0053] 本发明在此只通过实施例参考相应的附图来进行描述。现在具体详细地参考附 图，所需要强调的是，所示的细节以实施例为准并只用于对本发明优选实施例说明性讨论 的目的，并认为所示的细节是最有效和容易理解本发明原理和概念方面的描述的原因。在 这方面，任何没有尝试显示本发明结构细节更详细地比本发明的基本理解是必要的，对于 本领域技术人员而言，所述附图的描述使本发明的多种形式可能应用于实践中，这是很明 显的。
[0054] 在附图中：
[0055] 图la-b简要描述了一种用于捕获实体物的组合物的实施例，参照本发明的指导 来构造。
[0056]图lc简要描述了一种用于捕获实体物的组合物的另一实施例，参照本发明的指 导来构造。
[0057]图2简要描述了一种用于捕获实体物的组合物的另一实施例，参照本发明的指导 来构造。
[0058] 图3a-c简要描述了使用图lc所示组合物的病毒捕获，红细胞如右侧所述的大小 来表示。
[0059] 图4a显示的是无孔聚苯乙烯微球的光学显微镜图。
[0060] 图4b-c显示的是无孔聚苯乙烯微球的扫描电子显微镜（SEM)图。
[0061] 图5a-b显示的是无孔和多孔聚苯乙烯微球的扫描电子显微镜（SEM)图。
[0062] 图5c-f显示的是多孔聚苯乙烯微球的扫描电子显微镜（SEM)图。
[0063] 图6a-b显示的是多孔聚苯乙烯微球的流式细胞仪读数，FL2-A读数（图6a)反映 在黄橙色光谱处的发射，而FL4-A读数（图6b)反映在远红外光谱处的发射。
[0064]图7a-b描述了未感染的SF9细胞结构，放大倍数：xl〇〇-图7a ;x400图几。
[0065] 图8a-b描述了感染杆状病毒的SF9细胞结构，放大倍数：xl〇〇-图8a ;x40〇图8b。
[0066] 图9a-b描述了经杆状病毒和抗病毒的聚苯乙烯微球处理的SF9细胞结构，放大倍 数：χ100-图 8a ;x400 图 8b。
[0067] 图9c显示的是通过本发明所述病毒陷阱，感染SF9细胞的杆状病毒体外脱离图， 通过GFP相对荧光来测量。
[0068]图9d显示的是通过本发明所述病毒陷阱，感染SF9细胞的杆状病毒体外脱罔图， 通过GFP相对荧光来测量。
[0069] 图10a描述了用本发明所述病毒陷阱对死人头蟑螂的注射。
[0070] 图10b显示的是通过本发明所述病毒陷阱，感染死人头蟑螂蟑螂的杆状病毒体内 脱离图，通过GFP相对荧光来测量。
[0071] 图11a-b显示的是说明杆状病毒病毒颗粒粘附到Triton包衣的多孔聚苯乙烯微 球附着的扫描电子显微镜（SEM)图。
[0072] 图12a显示的是根据本发明所述技术得到的DNA巴克球的透射电子显微镜（TEM) 图，所述球体形状具有估算的巴克球尺寸（500-800nm)。.
[0073] 图12b简要描述了通过本发明所述DNA连接器自组装形成的巴克球体形状。
[0074] 图13描述了 DNA折纸形成的DNA立方体的角，所示DNA立方体用于本发明所述病 毒陷阱的支架。
[0075] 图14描述了电脑模拟生成肽与表达宿主特异性蛋白人类CD81病毒颗粒的预测相 互作用。

【具体实施方式】
[0076] 本发明的陷阱能够用于治疗或预防病原体病原体感染，同时消毒或清洁生物性流 体、水的供应等等。尤其，本发明能够用于诱捕和灭活病毒颗粒从而预防病毒在宿主或样品 内的复制和感染。
[0077] 结合附图和相应的描述，本发明的原理和操作可以更好的被理解。
[0078] 在具体描述本发明的至少一个实施例之前，应当理解的是，本发明在具体应用中 并不限定于下面描述的具体实施例。本发明能够为实施例或得以实现或在不同的方式下进 行。而且，在此所述的措辞和术语是描述的目的而不应视为对本发明的限定。
[0079] 引起慢性疾病的病原体感染，尤其是病毒感染，在病毒免疫的问题上呈现出多个 前所未有的挑战。
[0080] 尽管目前有一些抗病毒药物在使用，导致慢性疾病的病毒仍缺少有效的预防和治 疗药物。很多抗病毒药物正在发展以尽力给感染的个体提供有效的治疗。所述药物包括病 毒酶抑制剂、宿主细胞病毒结合抑制剂、抗转录和RNA干扰药物、免疫调节药物和病毒成熟 抑制剂。所述抗病毒药物由于到靶细胞和组织的无效释放和较短的治疗窗口而受到限制， 所述较短的治疗窗原因在于循环、毒性和免疫原性的快速清除和病毒对药物的适应和抗 性。
[0081] 用于从流体(如生物流体)中净化因子的方法为本领域技术人员所熟知的。所述方 法能够通过使用体积排阻或亲和结合技术用于选择性净化或捕捉生物流体内的病毒。
[0082] 所述能够亲和结合病毒的因子包括蛋白-脂质体或原型细胞，所述蛋白-脂质体 或原型细胞表现为结合微生物的受体、结合微生物和杂质的树状分子、结合微生物和杂质 的抗体和抗体配位物、和结合微生物和杂质的蛋白质纳米管。
[0083] 尽管上述方法能够潜在地用于从受试者血液中净化不需要的因子，如病毒，所述 方法有一些弊端，包括通过吞噬细胞在血流中快速清除、由异物导致的潜在的毒性/免疫 原性/病理性副作用、灭活/阻断被捕捉对象的失败、可捕获对象的较窄范围(如依靠内吞 机制感染宿主细胞的病毒在现有技术中并不能失去活性)、和有限数量的能够通过简单的 陷阱分子/复合物包围的因子。
[0084] 在转变为本发明以实践的过程中，本发明人意识到因子从诸如血液的流体中稳步 和有效的净化，例如，使用体内方法，需要两步协作的方法，即首先从所述流体中分离/阻 断所述因子然后捕获和可选地处理所述因子。
[0085]为了实现上述功能，本发明人设计了一种净化组合物(在此也定义为复合物)，所 述净化组合物尤其被构建用于首先从所述流体中分离/阻断所述因子然后捕获所述因子 和去除所述因子的活性(如，通过结合或处理所述因子)。
[0086] 所述两步方法对于病原体感染的体内预防或治疗特别有效。在上述情况中，由于 所述复合物设计用于首先阻断(例如，通过体积排阻流入)，然后在所述复合物的内部，并进 而在形成的免疫容积中处理所述病原体，能够结合/灭活所述病原体(位于所述内部容积） 的所述部分没有出现在宿主细胞上，从而不会引起免疫或毒性反应。
[0087] 本发明克服了当前抗病毒治疗不能充分解决病毒适应抵抗的限制。病毒是高适应 性和多形态的，并能够经历大量引起病毒的蛋白质域、尤其是病毒的酶活性部位的改变的 基因变化，导致靶向所述蛋白质的抗病毒药物的抵抗。此外，病毒也快速改变它们外部病毒 颗粒的形状(例如，通过同化宿主细胞蛋白质）以逃避免疫系统和特定的抗体。
[0088] 例如，目前通过病毒陷阱治疗的病毒不太可能产生适应性抗性，所述病毒陷阱包 括宿主细胞受体部分(如，含有人类受体⑶4、CCR5和CXCR4的舟形脂质体，用于HIV病毒的 失活)，然而，对所述受体为非反应性的病毒选择性地受到突变的压力，所述突变会抑制所 述病毒与所述宿主细胞反应和感染的能力。用陷阱治疗的病毒不受到病毒的快速和适应性 的多形态的影响，所述陷阱包括结合非内源性蛋白质到病毒的部分(如，宿主细胞蛋白质)。 特异地结合所述宿主细胞部分的活性部分(如四次跨膜蛋白、膜联蛋白），能够结合更宽范 围的病毒。
[0089] 通过在非免疫活性支架内阻断所述病毒结合部分，本发明限定了与宿主细胞间不 想要的相互作用，以及从宿主细胞中分离受限的病毒颗粒进而致使所述宿主细胞不受传 染。
[0090] 因此，根据本发明的一方面，本发明提供了一种物质组合物，包括至少一个被支架 包围的活性部分，所述支架用于因子的选择性流入，所述因子与所述一个或多个活性部分 相互作用。
[0091] 所述物质组合物的支架由任何能够形成颗粒状结构(如，3-D模型)的物质构成，所 述颗粒状结构为一个具有内部体积和流畅通过其中的表面多孔。正如在下面的具体描述， 所述颗粒由使用已知方法如聚合物化学、DNA纳米技术(如，DNA折纸）和微机电系统(MEMS) 合成的或生物的聚合物、油脂、分子筛、无机材料(例如，硅)、金属构成。实施例部分接着描 述了几种类型的颗粒和它们的构成。
[0092] 所述活性部分可以为任何能够与更广范围物质或病原体(例如，在蛋白质或细胞 膜的情况下的清洁剂)、或具体病原体或物质(例如，抗体或抗体片段）相互作用和失活的部 分。
[0093] 所述支架包括任何数目的任何尺寸的孔，基于阻断的被靶向的所述物质或病原 体。优选地，所述支架含有至少3个孔。所述孔可以设计为被动地或主动地阻断所述物质 或病原体。例如，一个具有孔直径为17nm的支架将使如猪圆环病毒的病毒流入，同时把活 的真核细胞和细菌阻挡在外面。一个具有4〇〇nm开口的支架能够使大多数病毒流入，同时 把真核细胞阻挡在外面。一个具有800nm开口的支架能够使所有病毒和大多数支原体细菌 细胞流入，而把人类细胞阻挡在外面。一个具有4000nm开口的支架能够使大多数细菌流 入，并把人类细胞阻挡在所述复合物的外面。同时，一个具有孔直径为l〇nm的支架能够使 如PrP蛋白质的朊病毒流入，并把大多数蛋白质和所有病毒、活的真核细胞和细菌阻挡在 外部。
[0094] 从而，在一个具体实施例中，具有约10-800nm直径的孔将适合用于捕获病毒，具 有在约0. 2-5 μ m之间直径的孔将适合用于捕获细菌，具有在约1-20 μ m之间直径的孔将适 合用于捕获真菌。
[0095] 从而，本发明所述的复合物支架可能含有最小直径为1、1.5、2、2·5、3、3·5、4、 4. 5、5、5. 5、6、6. 5、7、7. 5、8、8. 5、9、9· 5、10、10. 5、或 llnm 的孔；所述孔含有最大直径为 5、 6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20μηι 的孔。通常，所述支架的孔具有 50nm、100nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm、1U m、1. 5 U m、2 μ m、 2· 5 μ m、3 μ m、3· 5 μ m、4 μ m、4. 5 μ m、5 μ m、10 μ m、20 μ m，30 μ m、40 或 50 U m 的直径。
[0096] 从而，所述支架的功能在于通过尺寸选择来选择性捕获实体物，从而可作为一个 体积排阻的过滤器。只有足够小以能通过所述支架孔的所述实体物被捕获和吸收。
[0097] 一旦被支架的内部空腔阻断，所述物质或病原体出现在活性部分以进行处理。从 而，所述支架有两个目的，即所述物质或病原体的阻断和分离，进而屏蔽所述物质或病原体 到身体之外，相似地，屏蔽所述活性部位到所述宿主细胞之外，以及进而防止毒性作用，尤 其是屏蔽在免疫系统的细胞外，进而防止对所述活性部分的免疫反应。
[0098] 免疫分离所述活性部分增加了半衰期，以及因此增加了本发明所述复合物在体内 的疗效，也可以用于其它免疫原性的和可能有毒的体内活性部分。
[0099] 所述活性部分(例如，受体、酶）为免疫原性的分子和类似物，在颗粒(脂质体）或载 体的表面上出现的所述分子，通常如一些现有技术中的病毒陷阱，能够增加同陷阱免疫反 应的可能性以及其中部分或全部的灭活。
[0100] 本发明所述的两步分离和捕获组合物通过用中空的颗粒隔断活性部分打破了现 有技术的限制。上述方法保护了活性部分不被受试者的免疫系统排斥并延长了在体内所述 物质组合物的半衰期。通过从捕获和可选的灭活步骤中分开免疫分离的步骤，本发明的复 合物潜在地保护了免疫反应性分子免受受试者免疫系统的排斥和提高了本发明所述组合 物的循环时间。
[0101] 而且，现有技术的病毒陷阱，例如抗体和树状分子、或含有受体的蛋白脂质体，仍 然能够感染/免疫反应性宿主细胞，因为受束缚的病毒仍然存在于宿主细胞中。本发明的 分离方法是双向的，不但能使病毒或结合病毒的部分远离免疫系统而且能够使未受感染的 宿主细胞远离被病毒陷阱包围的病毒。
[0102] 本发明所述复合物能够用于体内或体外，以对任何流体样品的消毒或预防感染， 所述流体包括生物流体，如血液、尿、精液、唾液、黏液、淋巴液等等，非生物流体，如饮用水、 饮料、污水等等。
[0103] 用于本发明的一个优选的应用为预防或治疗病原体的感染，所述病原体如像血液 等生物流体中的病毒。在一些情况下，本发明所述组合物的功能是作为一种治疗药剂。
[0104] 因此，本发明提供了一种用于从诸如血液等流体对象中消除病原体或物质的新方 法，而不会暴露所述介质到潜在有害或免疫的化学物质中。
[0105] 正如上述描述的，本发明所述复合物在形状上是三维的，并包括一个内部腔体，在 所述腔体中包含一个或多个活性部分。 #
[0106] 提供上述"结构"的一个具体的复合物构造包括含有800nm孔洞的4μηι的聚苯乙 烯中空微球(所述支架）和外部PEG包衣(免疫隔离)。所述微球封装覆盖有triton清洁剂 的Ιμιη聚苯乙烯微球(活性部分)。另一种构造可以包括一种在外面涂装mPEG(免疫隔离)、 内部涂装表面活性蛋白-D (活性部分）的1 μ m DNA巴克球(支架)。
[0107] 本发明所述复合物支架能够由核酸纳米结构、聚合物、或硅片来制备。
[0108] 所述核酸(DNA/RNA)纳米结构是基本成分为核酸、核苷酸、或核苷的结构。核酸纳 米技术利用了如下事实：由于沃森-克里克碱基对的专一性，只有彼此互补的链的部分能 够结合彼此以形成双螺旋。核酸纳米结构的构造已经在一些出版物中得到描述，所述出版 物包括 W02008/039254、US2010/0216978、W02010/0148085、US5468851、US7842793、Dietz 等人（2009) [Dietz 等人（2009)，Science, Vol· 325, ρρ· 725-730]、Douglas 等人（2009) [Douglas等人（2009)Nature，Vol. 459, ρρ· 414]和其他的。实施例部分的实施例6和9_11 随后描述了用于适合于生成本发明DNA支架的序列和方法。
[0109] 实质上，天然的或人造的DNA或RNA序列能够控制以生成三维（3D)的结构。通常， 以DNA为基础的纳米结构利用DNA单链，所述DNA单链通过互补的、较短的DNA链的结合来 诱导形成3D构造。与之相反的，基于同样分子内的RNA-RNA相互作用，RNA通过形成三级 RNA基序以折叠成3D结构。基于折叠的单链DNA的纳米结构也是可行的。RNA双螺旋也可 以用于形成RNA 3D结构。
[0110] 因此，在本发明所述支架的一个优选实施例中，所述核酸纳米结构为DNA折纸。 DNA折纸是一种在纳米尺度上人工折叠生成DNA的方法，生成一个任意三维的可能作为诱 入或捕获实体的支架的形状。用于生成折纸类型的DNA纳米结构的方法已经得到了描述， 例如，在US7842793中，DNA折纸包含(例如）在多个较小"短"链的帮助下的病毒DNA较长 单链的折叠(例如)。所述较短链在不同位置结合到较长链上，从而形成3D结构。
[0111] 本发明所述核酸纳米结构可能由此为DNA折纸连接片和/或其可能有可诱 导的形状。例如，所述可诱导的核fe纳米结构已被Andersen [Andersen等人（2009 ) Nature, vol. 459, ρρ· 73-77]、Dietz [Dietz 等人（2009) Science, Vol. 325, ρρ· 725-730]、 Voigt[Voigt 等人（2010)Nature Nanotechnology，vol_5，pp.200-203]、Han[Han 等人 (2011) Science, Vol. ：332, pp. 342_346]等报道。用于设计核酸纳米结构的软件包可以在 www. cdna. dk/origami 获得。
[0112] 正如在此所述的，在本发明所述复合物的核酸纳米结构中使用的核酸指的是任何 长度的聚合形式的核酸，无论是核苷酸、脱氧核苷酸还是核酸肽（PNAs)，都包括嘌呤和喃P定 碱基、或其它天然的、化学或生物学修饰的、非天然的、或衍生核酸碱基。多核酸的主链包括 典型地出现在RNA或DNA上的糖和磷酸基团，或修饰或取代的糖或磷酸基团。多核酸可能 包括修饰的核酸，例如，甲基核酸和核酸类似物。因此，术语"核苷"、"核酸"、"脱氧核苷，，和 "脱氧核酸"通常包括类似物，例如，在此所述的类似物。
[0113]典型地，核酸包括磷酸二酯键，但是，核酸可能包括一个修饰的主链，例如，所述主 链包含磷酰胺、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯。
[0114] 0-甲基磷酸酰胺键和核酸肽主链连接。其它核酸衍生物包括含有阳离子主链、非 离子主链和非核糖主链的核酸。包含一个或多个碳环糖的核酸也在所述核酸的定义内。正 如被本领域技术人员熟知的，所有上述核酸类似物可能用作生成纳米结构的多核酸的辅助 链或一部分。此外，天然的核酸或类似物的混合物也可以被使用。ΡΝΑ (肽核酸）包括增强 稳定性的肽核酸衍生物。
[0115]因此，不同类型和构造的核酸也被用作生成纳米结构支架，所述支架包括右旋 DNA、右旋RNA、PNA、锁核酸（LNA)、苏阿糖核酸（ΤΝΑ)、乙二醇核酸（GNA)、桥基核酸（ΒΝΑ)、二 胺吗啉代寡核苷酸（ΡΜ0)以及核酸衍生物，如非沃森-克里克核酸 dX、dK、ddX、ddK、dP、dZ、 ddP、ddZ。
[0116] 在一些实施例中，本发明包括多核酸的纳米结构包括一种或多种不同的核酸结构 (如，至少20种、至少 5〇种、至少100种、或至少1000种、或更多不同的核酸分子)。所述核酸 可能为单链或双链、或包含双链或单链两者序列部分的核酸。所述核酸也可能为DNA、两个 基因组和cDNA、RNA或混合，其中，所述核酸包括任何脱氧核糖核酸和核糖核酸任意组合、 和包括尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、肌苷、黄嘌呤、次黄嘌呤、异胞嘧啶、异鸟 嘌呤等等碱基的任意组合。所述核酸包括核苷酸、核苷和核苷酸衍生物、和修饰的核苷，例 如胺基修饰的核苷。
[0117] 本发明的DNA纳米结构也使用了多种较短的单链核酸(辅助链）（如，DNA)以直接 用于多核酸长单链(在DNA纳米结构中，被叫做支架链)的折叠形成通常直径在i〇〇-5〇〇〇nm 的所需模型。因此，本发明所述复合物的核酸支架可能大约为100-5000nm，但是取决于环 境，10、15或20 μ m的更大的支架也可以被使用。
[0118] 在另一实施例中，本发明所述复合物支架可能为聚合结构，其中，基本成 分为聚合物，如聚醋酸乙烯酯（PVA)、聚乳酸（PLA)、乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA)、 甲基丙烯酸二甲胺乙酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物、PAN[Xiang et al，Hazard Mater. 2010Janl5;173(1-3):243-8]、或 PM1A[Yuan et al，Langmuir. 2009Mar3;25(5):2 729-35> Zhang et al, Colloid Interface Sci. 2009Augl; 336 (1) : 235~43> Lin et al. L angmuir· 2008Dec2; 24(23) :13736-41]、聚原酸酯（卩(^)[此11紅帥&1.(2000)11.1^以1·· Sci Mater. Med· 1 1(6) :345-55]、聚磷腈[Allcock (1994) Biomaterials, 15 (8): 563-9]、聚 酸酐[Shieh et al. (1994) J.Biomed. Mater REs· 28 (12): 1465-75]、聚磷酸脂[Richards et al· (1991) J_ Biomed· Mater· Res. 25(9) : 1151-1167]、聚乙交酯（PGA)、聚三甲基碳酸酯 (PTMC)、聚（L-乳酸）和聚（羟基乙酸）（PLLG/PGA)、PGA、PLLA-PGS、1，3-丙二醇（PD0)、 聚乙烯、聚酮（PEEK)、海藻酸、含有聚L-赖氨酸的海藻酸(海藻酸/PLL)、海藻酸钠、琼脂 糖、透明酸、水凝胶，例如甲基丙烯酸羟乙酯（HEMA)、甲基丙烯酸羟乙酯-甲基丙烯酸甲酯 (HEMA-MMA)、甲基丙烯酸、甲基苯烯酸酯、壳聚糖、胶原、纤维素、和其他。所述聚合物的作用 是作为半透膜，并被称为生物安全膜。
[0119] 在一个进一步的实施例中，本发明所述复合物的支架为硅微观结构，例如形成 生物胶囊的桂片。用于制备上述娃片的方法己经被Desai等报道[Desai et al. (1998) Biotechnology and Bioengineering, vol. 57, no. 1, pp. 118-120]"
[0120] 在另一个进一步的实施例中，本发明所述复合物的支架进一步包括用于将所述支 架靶向到体内特定器官的靶向部分。例如，所述靶向部分为器官-特异性配体或受体、或其 他如可以结合到靶向器官细胞外基质的器官-或细胞-特异性分子，
[0121]在另一个进一步的实施例中，本发明所述复合物的支架进一步包括；在复合物同 样被吞食或吞噬的情况下，能够同样杀死如吞噬细胞等细胞的分子(如毒素)。
[0122]因此，本发明所述支架也可能有免疫调节剂、或诱导细胞死亡的毒性或细胞毒性 部分，如阿仑膦酸钠、氯膦酸二钠、AppCCUp (氯膦酸二钠代谢物)、DMDP (甲基-5-脱氮蝶 啶)、自杀基因的序列或产品等等。
[0123]本发明所述支架可以从非免疫性材料来制备。如PLGA[Lin et al. Biomaterials. 2012Jul;33 (20):5156-65]、PVA[Efthimiadou et al，Int J Pharm_2012May30;428(1-2):1 34-42]、冗聚糖[Mu et al，Mol Pharm_2012Janl; 9 (1):91-101 ;Lu et al，Biointerfaces. 2011Aprl; 83 (2) :254-9]、纤维素 [Metaxa et al，J_ Colloid Interface Sci.2012Mayl8]、 月父原蛋白[Helary et al，Acta Bio mater. 2012Junl5_Epub ahead of print]。另外，所述 支架能够被非免疫调节剂材料覆盖，例如，所述支架能够被聚乙二醇（PEG)或它的衍生物所 涂装（参考 Macromol Biosci. 2004Mayl7;4(5) :512-9)。
[0124] 所述支架能够含有靶向部分，以靶向本发明所述复合物到特定性的器官。所述部 分可以用于靶向本发明所述复合物到受感染的器官。
[0125] 所述靶向部分为器官-特异性部分，病毒-特异性受体、抗体、配体、碳水化合物、 蛋白质、肽、脂质、或磁性部分。
[0126] 根据一个优选的实施例，所述支架在它的外部含有肝脏-特异性配体，直接连接 本发明所述复合物到肝脏。类似地，其它器官可能为靶标,如胰腺、心脏、脾脏、肾脏、淋巴结 等等。
[0127] 所述活性部分是任何能够特异性或非特异性结合/处理所述物质或病原体的分 子或结构。
[0128] 所述活性部分是脂质体、纳米管、适体、树状分子、蛋白质、肽、受体、酶、配体、抗 体、螯合剂、去垢剂、毒素、药物或药物前体。
[0129] 脂质体为磷脂双分子层构成的囊泡，并在它的表面上靶标-特异性部分或结合实 体的部分起作用，所述部分如配体、受体、抗体、碳水化合物、蛋白质或脂质。所述脂质体可 能为在受体上的病毒-特异性受体，如CD4、CCR5、CXCR4、CCR2、CCR3、跨膜四蛋白CD81、人类 清道夫受体SR-ΒΙ、密封蛋白-1、闭锁蛋白、肝配蛋-B2、CD46、CAR、av整合蛋白、HAVCR-1、 EGFR (表皮生长因子受体)、SLAM、乙酰胆碱受体、神经营养蛋白受体、p75NTR、唾液酸、粘多 糖、乙酰肝素、透明质酸(透明质酸)、胶原、明胶、聚丙烯酸、壳聚糖。可供选择地，或额外地， 脂质体也可以在它的腔体内携带另一种活性部分，如酶，比如，脱氧核糖核酸酶、核糖核酸 酶、蛋白酶、糖苷酶、或脂肪酶，以及其他；碱基、酸、抑制剂、不可逆转的粘结剂等等。
[0130] 可能作为清除剂的其他活性部分为蛋白质纳米管(制备方法见于Qu and Komatsu (2010) ACS Nano, Vol. 4, No. 1，ρρ· 563-573)、树状分子（制备方法 US4, 289, 872、 US4, 410, 688、US4, 507, 466、4, 558, 120、US4, 568, 737、US4, 587, 329、US6, 190, 650、 W088/01178、WO88/OII79、和W〇88/01180)、适体、蛋白质、酶、配体(如受体)、抗体、螯合剂 (例如，EDTA)、原细胞、毒素、药物或药物前体。
[0131] 正如在此提到的"适体"为相对短可以同很多蛋白质的高亲和性结合的核酸（DNA、 RNA或两者的组合)序列。适体通常在场独生有25-40个核苷酸并具有大约18-25kDa范围 的分子量。对于靶标具有较高单一性和亲和性的受体能够通过一个称为SELEX(由指数式富 集法得到的配体系统演化)的体外演化过程来获得[参考，例如Zhang et al. (2004)Arch. Immunol· Ther· Exp· 52:307-315在此包含整体上的引用]。
[0132] 正如在此提到的"抗体"涉及到自然衍生的、或自然生成的抗体，所述抗体可以是 多细胞繁殖的或单细胞繁殖的。可供选择地，抗体可以通过例如化学合成等合成制备，或通 过从典型抗体生产细胞或细胞株上特定mRNA的分离重组来制备。特定mRNA随后经历标准 分子生物学操作(获得cDNA、诱导cDNA到表达载体等等）以产生重组制备的抗体。该技术 是本领域技术人员所熟知的。
[0133] 对于蛋白质的多细胞繁殖抗体的生成对于本领域技术人员来讲是一种已知的技 术，并且该技术已被描述，尤其是，在Current Protocols in Immunology的第二章 （John E. Coligan et al. (eds.), Wiley and Sons Inc)〇
[0134] 生成单细胞繁殖抗体的技术在很多文章和教材中得到描述，如上述的Current Protocols in Immunology 的第二章 （Kohler and Milstein(1975)Nature256;495_497)、 和 US4, 376, 110。
[0135] 术语"抗体"也可以意味着包括完整的分子以及其中的片段，如：scFv、Fv、Fab'、 Fab、双链抗体、线性抗体、能够结合抗原的抗体中的F(ab'）2抗原结合片段（Wahl et al· (1983) J. Nucl. Med. 24, 316-325)。
[0136] 本发明中使用的抗体的Fab和F(ab'）2以及其他片段可能根据预期用途通过不同 的标记来示踪。所述标记可以为能够杀死靶标的有毒标记。
[0137] 去垢剂可能作为细胞破碎类方法。非限定性的去垢剂的清单包括CHAPS、 TritonXIOO、SDS、吐温、和类似物。所述去垢剂的作用并不必须是作为清洁剂，也可以是代 替严格意义上的"捕获"或"捕捉"所述实体，同样，它们可选择地或连带地降解实体。因此 所述清洁剂类似于酶，通过实体的裂解或降解来进行作用。
[0138] 酶可以用于扰乱细胞壁，所述酶包括溶菌酶、溶葡球菌酶、消解酶、纤维酶、变溶菌 素、聚糖酶、蛋白酶、甘露糖等等。其他的实例包括，如水解酶。正如上述的去垢剂，酶不一 定作为清洁剂，因为所述酶严格意义上不能"捕获"或"捕捉"所述实体，但是能分解它们。
[0139] 捕获之后，本发明所述复合物的活性部分可能释放一个分子，如细胞毒素、激素、 药物、核酸、蛋白质、辅药或化学物质(酸、碱)。所述分子或化学物质用化学反复改变所述实 体(如破坏病原体的膜或蛋白质结构)。
[0140] 所述活性部分固定在位于支架中或内侧的颗粒或载体上。所述固定可以是通过共 价键、亲和相互作用，如生物素-亲和素/链霉亲和素相互作用、或通过其他固定方法。对 于可能起固定以结合其他己知特定分子的分子实例，包括、但不限定于：抗体、铁蛋白、多组 氨酸标记肽、原癌基因标记肽、组氨酸标记肽、血凝素等等。
[0141] 根据一个优选实施例，所述固定分子为抗体、受体或配体(如：生物素-亲和素)。
[0142] 根据一个优选实施例，所述载体为一种聚苯乙烯纳米颗粒。
[0143] 正如在此所述的，本发明能够用于物质或病原体的阻断和处理。
[0144] 所述物质可以为一种存在于生物或非生物的流体的元素、化合物或分子。例如，所 述物质为存在于血液、水、毒素、可消费液体产品如啤酒或葡萄酒等等中的杂质或污染物。
[0145] 所述病原体可以为任何生物体，所述生物体包括朊病毒、病毒、细菌、原生生物、真 菌、古细菌或者寄生虫。
[o^46]、当用于受试者时，如人类的体内或体外治疗，本发明有治疗/预防的应用，从而用 于预防或治疗处于毒素、不希望的分子/化合物或感染等危险中的受试者。例如，本发明能 够用于除去毒素，如蓖麻毒素、葡萄球菌肠毒素 B (SEB)或二噁英，不需要的分子或复八物 如LDL(低密度脂蛋白)、葡糖糖、自我反应性抗体、朊病毒、过敏原，致癌因子，如肿瘤坏 3死因 子-a (TNF-a)等，或感染原，如病毒。
[0147]根据本发明的一个优选实施例，所述复合物能够用于除去、中和、或消除微牛物 如病毒、细菌、真菌、原生生物或古细菌。 '、
[0148]感染性病毒的实例包括：逆转录病毒科(例如，人力免疫缺陷病毒，如mu、也被 称为HTLV-in: LAV或HTLV-III/LAV、或HIV-ΠΙ ;和其他分离株，如HIV-LP)、小核糖核酸 病母科(例如，脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒、肠道病毒、人类柯萨奇病毒、鼻病毒、艾柯 ^毒)、杆状病毒科(例如，导致肠胃炎的菌株)、披膜病毒科(例如，马脑脊髓炎^毒、风疹病 母)、黄病母科(例如，登革病毒、脑炎病毒、黄热病病毒)、冠状病毒科(例如，冠状病毒)、弹状 病毒科j例如，疱疹性口炎病毒、狂犬病毒)、丝状病毒科(例如，埃博拉病毒)、副黏液病毒科 (例如，副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞体病毒)、正粘病毒科(例如，流感病 毒)、亚病毒科(例如，汉坦病毒、布尼亚病毒、静脉病毒和内罗病毒)、沙粒病毒科(出血热病 毒)、呼肠病毒科(例如，呼吸道肠道病毒、环状病毒、和轮状病毒)、双核糖核酸病毒科、肝脱 氧核糖核酸病毒科(乙型肝炎病毒)、小DNA病毒科(细小病毒)、乳多空病毒科(乳头瘤病毒、 多瘤病毒)、腺病毒科(多数腺病毒)、疱疹病毒科(单纯性疱疹病毒 （HSV) 1和2、水痘-带状 疱疹病毒、巨细胞病毒（CMV)、孢疹病毒)、痘病毒科(天花病毒、牛痘病毒、痘病毒)、和虹彩 病毒科(例如，非洲猪热病)、和未分类的病毒(海绵组织脑科的病原对象)、 delta-肝炎病毒 (被认为是一种乙型肝炎病毒的缺陷随体)、非甲型、非乙型肝炎病毒(类型卜内部传输；类 型2-表面传输（比如，丙型肝炎）；诺瓦克病毒和相关病毒、和星状病毒)。
[0149]感染性细菌的实例包括：幽门螺旋菌、伯氏疏螺旋体、嗜肺军团菌、分支细菌(例 如，结核分枝杆菌、禽结核分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、戈登分枝杆菌)、金黄色酿脓葡萄球 菌、淋球菌、脑膜炎双球菌、单核细胞增多性李斯特氏菌、酿脓链球菌（甲类链球菌)、无乳链 球菌（乙类链球菌)、链球菌(绿色链球菌)、粪链球菌、牛链球菌、链球菌(厌氧的 sps.)、肺 炎链球菌、致病性弯曲杆菌sp·、肠球菌sp.、流感嗜血杆菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、棒状杆 菌SP.、猪红斑丹毒丝菌、梭状芽孢梭菌、破伤风梭菌、产气肠杆菌、披衣菌、克雷白氏肺炎杆 菌、多吗杆菌、拟杆菌sp.、具核梭杆菌、念珠棘虫链杆菌、苍白密螺旋体、雅司螺旋体、流感 嗜血杆菌、钩端螺旋体、以色列放线菌、以及其他。
[0150]作为病原体的原生生物的实例为：引起疟疾的恶性疟原虫、刚地弓形虫（弓形虫 病)、和杜氏利什曼虫(利什曼病)，以及其他。
[0151] 能够用于结合流感病毒颗粒的肽部分的实例在下面的实施例部分被提供。能够 用于结合病毒的活性部分(诸如流感病毒蛋白神经氨酸苷酶或结合病毒颗粒的宿主蛋白 质)、或者诸如人蛋白CDSI结合其他微生物的活性部分的配体，在Cellular proteins in influenza virus particles [Shaw et al，PLoS Pathog_2008Jun6; 4(6): el000085]中进行 了描述。
[0152] 根据本方面的一个优选实施例，所述复合物能够利用生物战制剂通过除去、中和 或消除一旦受感染的微生物，用于预防由细菌战物质或流行性疾病引起的潜在感染，例如， 病毒、细菌、真菌、原生生物或古细菌。
[0153]在生物战中使用的病毒的实例有痘病毒(例如，天花、猴痘)、脑炎病毒(例如，委内 瑞拉马脑炎病毒、西部马脑炎病毒、东部马脑炎病毒)、沙粒病毒(例如，拉沙病毒、阿根廷沙 粒病毒、玻利维亚沙粒病毒、巴西沙粒病毒、委内瑞拉出血热病毒)、布尼亚病毒(例如，茹福 利-瓦利病毒、克里米亚-戈登病毒、汉坦病毒)、和丝状病毒(例如，马尔堡病毒、埃博拉病 毒)、黄病毒(例如，黄热病病毒、登革热病毒、科萨努尔森林黄病毒、鄂木斯克HFs)、以及其 他。
[0154]类似地，受试者可能需要消除、除去或中和其他实体或物质，而不一定为病原体， 所述实体或物质可能导致病理学、生理干扰、或中毒，例如，核酸、小分子、朊病毒、蛋白质、 碳酸酯、脂质、毒素、毒液、药物、毒物、过敏原、金属、或污染物，如可能需要或希望同样从体 系中清除或净化的任何物质。所述实体或物质进一步如下所述。
[0155] 本
【发明内容】
中，核酸指的是多核苷酸(例如，包含连接到磷酸基和可交换的有机碱 的糖(像核糖或脱氧核糖）的分子，所述碱既可以是取代的吡啶(例如，胞嘧啶（C)、胸腺嘧啶 (T)、尿嘧啶（U))或取代的嘌呤(例如，腺嘌呤（A)或鸟嘌呤（G)))。在此所使用的，术语指的 是核苷酸以及寡脱氧核苷酸。该术语也包括多聚核苷糖(例如，缺少磷酸基的多聚核苷糖） 和任何包含其他有机碱的聚合物。核酸分子可能源自天然原料(例如，基因、cDNA、RNA)，或 可能源自重组或合成的原料(例如，由寡核苷酸合成制备的原料)。
[0156] 小分子为低分子量的有机化合物，所述有机化合物被定义为不是聚合物。所述术 语"小分子"，尤其在在药物领域，通常限制为高亲和性的结合生物聚合物的分子，所述生物 聚合物如蛋白质、核酸或多糖和其他改变活性或作用的生物聚合物。对于所述小分子，最高 分子量限制大约为800道尔顿，这允许快速通过细胞膜的分散可能性从而所述小分子能够 到达分子内作用部位。非常小的寡聚物也可以被认为是小分子，如二核苷酸、肽如抗氧化剂 谷胱甘肽、和二糖如蔗糖。
[0157] 所述朊病毒为感染原，其由错误折叠形式的蛋白质组成。朊病毒在多种哺乳动物 中与传染性海绵状组织脑病变有关，所述脑病变包括牛的牛绵状脑病（BSE，也被称为疯牛 病)、人类的克罗伊茨费尔特-雅各布病（CJD)。所有已知的朊病毒疾病影响大脑的结构或 其他神经器官，并且所有通常是无法医治的和通常致命的。
[0158] 正如在此所述的，"碳水化合物"、或"糖"，也可以为单糖、双糖，如葡萄糖、蔗糖或 乳糖，或者多糖，例如，淀粉、纤维素、碳酸化合物络合物如葡糖氨基葡聚糖寡糖、
[0159] 正如在此所述的，术语"蛋白质"和"多个蛋白质"将被说明以包括所有任意长度的 氨基酸残基的聚合物，因此所述术语包括多肽，以及在传统上定义的、为多肽的子集的蛋白 质，和肽，肽为更短的、由氨基酸通过酰胺结合构成的基本聚合物。蛋白质通常包括任 何氨基酸的序列，序列的一级和二级结构足够生成三级和/或四级结构的更高水平。所述 蛋白质不同于肽，在于肽不具备形成三级和/或四级结构的能力。所述蛋白质的分子量典 型地至少为15千道尔顿。在本发明说明书中，应当理解的是，所述蛋白质可能包括氨基酸 的L-光学异构体或D-光学异构体，以及还包括合成的氨基酸。所述蛋白质可能进一步通 过含有其他一些连接所述蛋白质的链来修饰，例如碳水化合物(糖蛋白）、脂质(脂蛋白）、?粦 (磷酸化蛋白）、硫等等。可能通过本发明所述复合物被捕获或捕捉的蛋白质包括抗体、酶、 细胞因子、激素等等。可能需要用本发明所述复合物进行捕获的该蛋白质的一个具体的实 施例为淀粉样β蛋白。其他分子如非蛋白质的细胞交流分子或神经传导物质，例如cAMP、 多巴胺、血清素、肾上腺素等等也可能是从受试者循环中被还原或消除的靶标。
[0160]正如在此所述的，"脂质"包括脂肪、固醇、脂溶性维生素(例如，维生素 A、D、E和 K)、单甘脂、二甘酯、磷脂质，和其他。可能需要通过本发明所述复合物捕获的所述脂质的一 个具体的实施例为低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C)。
[0161]正如在此所述的，"毒素"是一种由活细胞或微生物产生的有毒的物质，包括：血毒 素、光毒素、蓝藻毒素、坏死毒素、神经毒素(例如，短裸甲藻毒素)、细胞毒素、蜂毒素和真菌 毒素。毒液是常用术语，该术语指的是任何种类的某些类型的动物通过叮或刺的方式注射 到受害者的毒素。产生毒液的动物的一个简单列表如：蜘蛛、蝎子、蛇、鱼、章鱼、水母、蜜蜂、 黄蜂、蚂蚁、駒鼯、鼹鼠、以及其他。
[0162]正如在此所述的，"过敏原"是任何可以导致过敏的物质。过敏原的典型的实施例 包括：花粉、尘螨、宠物皮屑、坚果、香料、海产品、花生、木本坚果、蛋类、牛奶、水母、鱼、小麦 和它的衍生物、和大豆和它的衍生物、以及lOppm或以上的亚硫酸盐(基于化学的，常见于 食品的调料和助色剂中)、火蚁、毒葛、蜂刺、药物(例如，盘尼西林)、和乳胶。真菌引起的过 敏原包括担子孢子、侧耳菌、枝孢菌、杯形秃马勃、曲霉属真菌和交链孢霉属-盘尼西林家 族、fomes pectinatis。所述过敏原的列表很广，还包括昆虫毒液、动物头屑、真菌孢子等 等。自然界的、动物和植物过敏原的实施例包括尤其以下属的蛋白质：犬属(家犬)、尘螨属 (例如，粉尘螨)、猫属(家猫)、豚草属（阿叶豚草)、黑麦草属(例如，多年生黑麦草或多花黑麦 草)、柳杉属（圆球柳杉)、交链孢霉属(互隔交链孢霉)、车前草属(例如，长叶车前草)、墙草属 (例如药用墙草、或欧蓍草)、小蠊属(例如，德国小蠊)、蜂属（黑麦草蜂）柏木属(例如，意大 利柏木、亚利桑那柏木、和大果柏)、刺柏属（Juniperus sabinoides、北美圆柏、欧洲刺桕、 杉木)、金钟柏(例如，东方金钟柏)、扁柏属(例如，日本扁柏)、大蠊属(例如，美国大蠊)、冰草 属(例如，偃麦草)、黑麦属(例如，黑麦)、小麦属(例如，小麦)、鸦茅属(例如，果园草)、羊茅属 (例如，牛尾草)、早熟禾属(例如，草地早熟禾或加拿大早熟禾)、燕尾属(例如，野燕麦)、绒毛 草属(例如，绒毛草)、黄花茅属(例如，黄花茅)、燕麦草属(例如，高燕麦草)、剪股颖属(例如， 小糠草)、梯牧草属(例如，猫尾草)、藺草属（例如，藺草)、雀稗属(例如，百喜草)、蜀黍属（例 如，高粱)、和雀麦(例如，光雀麦)。
[0163]正如在此所述的，"药物"涉及到一种医用药物或通常认为是消遣性药物意义的药 物，如安眠药、乙醇或尼古丁。
[0164]医用药物，也涉及到用药或药剂的领域，包括退烧药、镇痛药(止痛药)、抗生素、防 腐剂等等。不同类型的用药具体到被治疗的体系，用药的简单列表包括：抗酸剂、抑制药、 抗胀气剂、抗多巴胺、质子栗抑制剂（PPIs)、H 2-受体拮抗体、细胞防护剂、前列腺素类似 物、轻泻药、解痉剂、止泻药、胆酸螯合剂、类阿片、β受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、利尿剂、强 心苷、抗心律失常药、硝酸盐、抗心绞痛药、血管收缩剂、血管舒张剂、外围催化剂、抗高血压 药、血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、阻断剂、抗凝血剂、肝素、抗血小板 药、溶纤维蛋白药、抗血友病因子、止血剂、动脉硬化/胆固醇抑制剂、血脂调节剂、他汀类 药物、抗精神病药、抗抑郁药、抗呕剂、抗痉挛药/抗癫痫药、抗焦虑药、巴比妥类药物、运动 障碍药、兴奋剂、苯二氮平类药物、环吡咯酮类、多巴胺对抗剂、抗组胺、胆碱能药物、抗胆碱 能药物、大麻类、NSAIDS、扑热息痛、三环抗忧郁药、骨骼肌松弛药、雄激素、抗雄激素、促性 腺激素、类固醇、抗利尿激素类似物。
[0165] 因此，本发明的复合物可能用作由于用药或消遣性药物引起的服药过量的治疗。
[0166] 正如在此所述的，所述"药物前体"涉及一种基于引发剂而产生活性作用（或更高 活性）的化合物。药物前体为在生理学条件下容易发生化学变化以使化合物有效和活性的 化合物的结构型改良。很多药物前体衍生物在本领域是已知的，如依赖于药物前体的水解 分裂或氧化激活的物质。一个药物前体的实施例，非限制地，可以为醚(药物前体)、但然后 代谢水解为羧酸作为活性实体的化合物。其他的实施例包括化合物的肽衍生物等等。
[0167] 正如在此所述的，"毒物"可能是化学战剂(例如，芥子气)、蓖麻毒素、杀虫剂、除草 齐!J，或者其他。
[0168] 金属中毒是一种严重的健康问题，因而用于消除不论是受试者循环还是用于人类 消费液体中的有害剂量的金属得到高度的关注。
[0169] 因此，本发明所述复合物也可以用于捕捉或捕获当金属摄入过量和/或在受试者 和积累导致中毒的金属和污染物。所述金属包括：例如，铅、汞、镉、铝、铋、金、镓、锂、银、钡 盐、针、钴、镁、三氧化砷、铬、钴、铜、铁、镍、硒、铊和锌。所述污染物包括有毒污染物，例如二 噁英和它的衍生物。
[0170] 图la-c和2解释了本发明复合物的几个实施例，所述复合物在此指的是复合物 10。
[0171] 复合物10包括配置是含有一个内部腔体14的三维颗粒的多孔支架12。腔体14 包括连接位于腔体14并受它尺寸约束的载体18 (例如，颗粒）的活性部分16 (图1)或连 接支架12的内表面20 (图2)。
[0172] 支架12包括具有特定直径范围孔22,所述直径根据用于俘获靶向的所述实体而 选择。例如，支架10设计用于捕获流感病毒，具有100-800nm直径的孔22。
[0173] 图1所示的支架10能够由随后实施例部分的实施例1-2中的聚苯乙烯微孔/纳 米颗粒来构建。图2所示的支架10能够使用实施例9-10所述的DNA来构建，尤其是通过 实施例4和11所述的DNA折纸技术来构建。
[0174] 图3a-c说明了使用图lc中支架10的病毒捕获。图3a说明了在复合物支架的外 部的病毒颗粒，图3b说明了病毒颗粒穿过复合物支架的孔的选择性流入，以及图3c说明了 病毒颗粒与活性部分(例如，抗体）间的相互作用。红血球如右边所示以说明比例。
[0175] 正如上文所述的，本发明所述复合物可用于生物流体的体外或体内治疗(例如，感 染的解毒或预防或治疗）或非生物流体的处理(例如，水的纯化)。
[0176] 因此，根据本发明另一方面，本发明提供了一种从液体中除去所述物质或病原体 的方法。
[0177] 本发明所述方法的一个优选应用是对经受或易受病原体感染的受试者的治疗。
[0178] 所述治疗通过给药本发明所述能够从受试者中捕获病原体的复合物来实施。正如 在此使用的，术语"受试者"涉及到动物、优选为哺乳动物，如人。
[0179] 本发明所述复合物可以将其本身给药于受试者，或在药物组合物中与合适的载体 或辅料相混合。
[0180] 在此使用的，"药物组合物"涉及到一种或多种在此所述的活性成分与其他化学成 分的制剂，如生理学上适宜的载体或辅料。药物成分的目的在于促进化合物向微生物的给 药。
[0181] 在此使用的，术语"活性成分"指的是对期望的生物效应有效的所述复合物。
[0182] 在下文中，短语"生理学上可接受的载体"和"药学上可接受的载体"，可以互换 使用，涉及到不能导致微生物明显刺激和取消给药化合物的生物活性和性能的载体或稀释 齐!J。辅药包括在上述短句中。
[0183] 在此，术语"辅料"涉及到一种添加到药物组合物中的惰性物质以进一步促使活性 成分的给药。辅料的实施例，不受限制地，包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖类和多种类型的淀 粉、纤维素衍生物、明胶、植物油、和聚乙二醇。
[0184] 用于药物的处方和给药的技术可能在最新出版的"Remington's Pharmaceutical Sciences"（雷明登氏药学全书，Mack Publishing Co·,Easton，PA)中找到，其在此通过引 用的方式整体引入。
[0185] 合适的给药途径可能，例如，包括：口服、直肠给药、转化粘液质，尤其是经鼻的、肠 内的、或非肠胃给药，包括肌肉内注射、皮下注射、和髓内注射，以及囊内、直接心室内、静脉 内的、腹膜内的、鼻内、或眼内注射。
[0186] 可选地，一受试者可以是局部而不是全身的方式给药所述药物组合物。例如，通过 直接到病人组织部位的药物组合物的注射。
[0187] 本发明所述药物组合物可能通过本领域已知方法来制备，例如，通过传统的混合、 溶解、造粒、包衣、磨细、乳化、封装、捕捉、或冻干方法。
[0188] 与本发明相一致的供使用的药物组合物因此可能按着传统方式使用一种或多种 包含辅料或助剂的生理学上可接受的载体来制成剂型，促使活性成分到能够用于生理学上 的制剂。合适的配方依赖于选择的给药途径。
[0189] 对于注射，药物组合物的活性成分可能在水溶液中，优选在生理学上兼容的缓冲 液中来制成剂型，所述缓冲液如汉克溶液(Hank' s溶液)、林格溶液（Ringer' s溶液）或生 理盐缓冲液。对于转化粘液质给药，适合于载体被渗透的渗透剂用于剂型中。所述渗透剂 在本领域通常是己知的。
[0190] 对于口服给药，所述药物组合物能够通过将活性化合物与本领域已知的药学上可 接受载体的结合来制成剂型。所述载体使所述药物组合物被制成剂型，如片剂、丸剂、包衣 丸剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、料浆、悬浮液等等，用于病人的口服给药。对于口服使用的药 物制剂可以使用固体辅药来制备，可选地，在加入所期望的合适的助剂之后，研磨结果混合 物，和处理颗粒的混合物，以获得片剂或包药丸芯。合适的辅料，尤其是填料，如糖类，包括 乳糖、蔗糖、甘露糖、或山梨糖；纤维素制剂，如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、 明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟基丙基甲基-纤维素、和碳水甲基纤维素钠；和/或生理学上 可接受聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮（PVP)。如果需要，崩解剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、 或海藻酸或其中的盐，如海藻酸钠，可能被添加。
[0191] 包衣丸芯具有合适的覆层。为了这个目的，浓缩的糖溶液可能被使用，可选地 包含阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆胶、聚乙二醇、二氧化钛、漆溶液 （lac(luer solution)和合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或颜料可以添加到片剂或包衣覆层，以用 于识别或描述活性化合物剂量不同组合。
[0192]用于口服的所述药物组合物包括由明胶、以及由明胶和塑化剂制成的柔软、封闭 胶囊制备成的推入配合(put-fit)胶囊，所述塑化剂如甘油或山梨醇。所述推入配合胶囊可 能包含存在于与填料的混合物中的的活性成分，所述填料如乳糖、粘结剂，如淀粉、润滑油， 如滑石或硬脂酸镁、和可选地稳定剂。在软的胶囊中，所述活性成分可能溶解或悬浮在合适 的液体中，如脂肪油、液状石蜡、或液体聚乙二醇。另外，稳定剂可以被添加。所有用于口服 给药的剂型对于所选给药流程应该有合适的剂量。
[0193]对于口腔含化给药法，所述组合物可能采取传统方式制成制剂的片剂或含片。 [0194]对于吸入给药，根据本发明供使用的活性成分以从受压包装中气溶胶喷雾给药或 使用适当挥发气的喷雾器的形式方便的送药，挥发气例如：二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二 氯-四氟乙烷、或二氧化碳。在加压气溶胶的情况下，剂量可能通过提供阀门以按计量送药 来判定。例如，在分配器中供使用的明胶胶囊和药筒可能制成为含有粉末混合的化合物和 合适的粉末基质(如乳糖或淀粉）的剂型。
[0195]在此描述的所述药物组合物可能用于肠胃外给药。例如，通过弹丸注射或连续灌 注。用于注射的剂型可以是单位剂量形式存在，例如，在安瓿;中或者多次量容器中，可选的 添加了防腐剂。所述组合物可能为悬浮液、溶液或油乳剂或水乳剂媒介，并且可能包含赋形 剂，如悬浮剂、稳定剂、和/或分散剂。
[0196]用于肠胃外给药的药物组分包括以水溶液形式的活性剂型的水溶液。另外，活性 成分的悬浮剂可以制备为合适的油或水基注射悬浮液。合适的亲脂溶剂或媒介包括脂肪 油，如芝麻油、或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯、甘油三酯、或脂质体。水注射悬浮液可能含 有增加悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇、或葡萄聚糖。可选地，悬浮液可能还 包括合适的稳定剂或增加活性成分溶解性的物质，以允许较高浓度液体的制备。
[0197]可供选择地，在使用前，所述活性成分可以是为粉末形式，用于与合适的媒介进行 构建，例如，无菌、无热原的、水基溶液。
[0198] 持续释放（SR)、延长释放（ER、XR、或XL)、限时释放或定时释放、控制释放（CR)、或 连续释放（CR或Contin)药丸为制备成随着时间缓慢溶解和释放药物的片剂或胶囊剂型。 持续释放片剂被制备，从而活性成分嵌入到非溶性物质的基质中（例如，丙烯酸树脂、多糖 等等)，进而溶解的药物通过基质上的孔扩散出来。在一些SR剂型中，所述基质物理膨胀形 成凝胶，从而药物首先溶解在基质中，然后通过外表面离开。
[0199] 控制释放和持续释放的不同在于：控制释放完全为零阶释放，g卩，随着时间的药物 释放与浓度无关；另一方面，持续释放意味着药物在时间周期内缓慢的释放。它可能是或不 是控制释放。
[0200] 本
【发明内容】
中适合使用的药物组合物包括如下组合物：其中，活性成分以有效的 足以实现预期目标含量存在。更具体地，"治疗有效量"意味着有效用于阻止、减轻、或改善 失调症状或延长被治疗受试者存活的活性成分的数量。
[0201] 治疗有效量的检测被本领域技术人员所熟知，尤其是根据在此提供的具体描述。
[0202] 对于任何用于本发明方法的制剂，剂量或治疗有效量首先能够由体外和细胞培养 实验来估算。例如，剂量可以在动物模型中得到以实现所需的浓度或滴度。这一信息能够 用于人体内有效剂量的更精确的检测。
[0203] 在此所述的活性成分的毒性和治疗效果通过体外、培养或实验动物标准药物规 程来测得。从体外或细胞培养实验和动物研究获得的数据能够用于制定人体使用剂量的 范围。所述剂量可能依靠使用的剂量形式和给药流程来变化。精确的规划、给药流程、 和剂量可以由每个医师针对病人的条件来选择。（参见： Fingl，E.et al.(1975)，〃The Pharmacological Basis of Therapeutics, "Ch. 1，ρ·1·)。
[0204]剂量的量和给药间隔可能单独的调整以提供足够的活性成分的血浆或大脑水平 以诱使或抑制生物效应(例如，最小有效浓度，MEC)。MEC对于每种制剂来将是变化的，但可 以由体外数据估算得到。达到MEC的必须剂量依靠个人特征和给药流程。检测试验能够用 于检测血浆浓度。
[0205]基于被治疗的情况的严重程度和响应性,在持续几天到几周的疗程中，或直到痊 愈或疾病状态的减小，配药可以为单一或多重给药。
[0206]当然，给药的组合物的用量依靠于被治疗的受试者、病症的严重程度、给药方式、 处方医师的判断等等。
[0207] 本发明所述组合物，如果需要，可以存在于包装或配药装置中，如FDA批准的试剂 盒，其可能包含一种或几种含有活性成分的单位剂量。例如，所述包装可能包含金属或塑料 薄膜，如吸塑包装。所述包装或配药装置可以由给药指示来配合。所述包装或配药装置也 可以由调节药物的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的通知来配合。所述通知是由 机构批准的用于人或兽给药的组合物的形式的反映。例如，所述通知可能包括FDA对于处 方药批准的或定制产品的标签。包括在药物上可接受载体中制备本发明所示的剂型也可也 可以制备，位于合适的容器中，和标上用于指示状态的治疗标签，进一步如下所述。
[0208] 一旦给药至受试者，所述支架就"过滤"生物流体，所述活性部分在支架内以靶向 或非靶向的方式捕捉或处理实体。显然，并非所有出现在生物流体中的组分通过所述支架 上的孔，例如，血红细胞太大以致于不适合通过孔，并进而不能经过所述支架的孔。
[0209]当在体内使用时，本发明所述复合物当然要从受试者中清除出去，例如，通过吞噬 细胞或经过肾脏。当本发明所述复合物用于减小免疫原性的情况下，从身体中清除有可能 会减缓。
[0210] 本发明所述复合物也可以形成可定位在身体血管内的装置的一部分。例如，复合 物可以并入容器内，例如生物胶囊(例如，商标的免疫分离装置)。生物胶囊的进 一步描述请参考 US2010/0028398 或 US2011/0092949。
[0211] 所述胶囊可以构建成过滤装置，并位于（固定)主要血管，或器官中。它可以像嫁接 或注入特定器官的过滤器一样起作用，所述具体的器官如脾脏、肺脏、心脏、肾脏、淋巴结等 等。进一步，所述容器可以在生物流体(例如，GI流体或血液循环）内自由流动。
[0212] 本发明所述复合物进一步包括用于捕获病毒的部分。所述部分为病毒-特异性受 体，如在此所述的，抗体、配体、受体等等。正如先前所述，病毒特异性作用的受体的非全部 的列表为：CD4、CCR5、CXCR4、CCR2、CCR3、跨膜四蛋白⑶81、人类清道夫受体SR-ΒΙ、封闭蛋 白-1、闭合蛋白、肝配蛋白-B2、CD46、CAR、av整合蛋白、HAVCR-1、EGFR (表皮生长因子受 体)、SLAM、乙酰胆碱受体、神经营养受体、p75NTR、唾液酸、粘多糖和硫酸乙酰肝素。
[0213] 本发明所述复合物还可以进一步包括用于捕获微生物的部分。所述部分可以是被 寄生微生物结合的宿主-特异性部分，如蛋白质、碳氢化合物、脂质、抗体、配体和受体等。 作为被寄生微生物结合的宿主-特异性部分的蛋白质的非全部的列表包括：膜联蛋白（如 膜联蛋白A1、膜联蛋白A2、膜联蛋白A4、膜联蛋白A5、膜联蛋白All)、四次穿膜蛋(如CD81、 CD9)、CD59、亲环蛋白、β_微管蛋白、丝切蛋白1、烯醇1、脂肪酸合成酶、γ-谷氨酰转移酶 1、磷脂酰肌醇聚糖4、磷酸甘油酯激酶、丙酮酸激酶、S100钙结合蛋白All、原肌球蛋白1、转 凝蛋白
[0214] 本发明所述复合物也可以用于从生物样品中除去病原体或物质。例如，血液或组 织样品(悬浮在缓冲液中)可以通过含有本发明所述复合物的装置。病原体或物质通过所述 复合物进行"过滤"，并被活性部分捕获和失活。
[0215] 正如在此所述的，本发明复合物也可以用于纯化非生物流体去除物质，如杂质、毒 素等等。所述流体可以为任何来源的水、饮料、液体培养基、污水、血液样品、液体污染物等 等。
[0216] 正如在此所述，术语"杂质"指的是悬浮颗粒、寄生虫、细菌、藻类、病毒、真菌、古生 菌、原生生物、有机碎片、金属、核酸、小分子、病毒颗粒、蛋白细胞、蛋白质、肽、烃、脂质、毒 素、毒液、药物、毒物、过敏原或污染物。
[0217] 当应用于体外时，尤其是非活的体系时，本发明所述复合物可以可选地通过离心 分离、沉淀、通过色谱分析、由磁铁力来推动，或电泳分离等等进行清理。
[0218] 为了变于磁性分离，所述支架用 Yabin等人[European Polymer Journal Volume4 3, Issue3, March2007，Pages762_772]、或 Liua 等人[Journal of Colloid and Interface Science, Volume375, Issuel, lJune2012，Pages70_77]所述的方法来改善。
[0219] 因此，本发明所述复合物进一步包括标记，如磁性、荧光或冷光标记，用于从液体 中纯化所述复合物，例如，通过FACS，磁性分选器等等。
[0220] 本发明所述复合物作为试剂盒来包装，所述试剂盒包括粉末或悬浮页形式提供的 复合物、附属的试剂用于给药所述复合物(例如，缓冲液等等)、给药装置(例如，注射器）和 供使用的说明书。
[0221] 治疗感染HIV或流感的人类受试者的典型记录如下所述。
[0222] 用抗HIV的复合物对HIV感染夸试者的治疗
[0223] 抗HIV复合物通过使用DNA折纸技术构建中空微球模型的、直径Ιμπι的支架 来产生(参加实施例部分进一步描述)。DNA微球的外表面有300nm的孔，并聚乙二醇化 (PEGylated，PEG化)，和含有CD4和CCR5受体的500nm (内直径）脂质体在微球内被捕获。 所述脂质体通过抗体连接到核酸支架。
[0224] 治疗方法：
[0225] 在盐载体上含有25, 000, 000单位的抗HIV复合物的药剂量通过缓慢滴加注入输 送给病人（IV)，基于病毒载量，药剂量被重复的或调整。
[0226] 感染流感夸试者的治疗
[0227] 抗流感复合物通过在聚苯乙烯、晶体硅、PLGA、或壳聚糖形成的支架内构建抗病毒 唾液酸的树状分子来形成，所述支架在每侧都具有400nm的孔并被PEG化。
[0228] 治疗方法
[0229] 包括10, 000, 000捕获单位/1ml的剂量的鼻用喷雾用于预防药或感染的治疗。
[0230] 应当理解的是，本发明所述方法也能够用于治疗植物或其他多细胞生物体的病原 体感染。例如，病毒陷阱可以直接注射到树中（通过树干注入）以在整个树中全身分布。所 述注射在树的底部IS英寸、每个6英寸间隔进行所述。注射深度在5/8〃和15/8〃之间。 10 英寸直径的树将用大约1. 5盎司的注射。
[0231]在此使用的术语"大约"指的是±10%。
[0232]本发明其它主题、优势、新的特征，通过下述实施例的检查，对于本领域技术人员 来讲将变得清楚明了；所述实施例并不意味着一种限制。另外,上述描述的和后面权利要求 书部分要求保护的本发明实施例和各方面的每一种变化在下述实施例中获得实验支持。 [0233] 实施例
[0234]现场，结合上述的说明，参考下面的实施例，以不受限制的方式阐述本发明。
[0235] 实施例1
[0236] 聚苯乙烯微球陷阱
[0237] -定数量的聚苯乙烯（PS)被生产，并限定相关尺寸分布和孔隙大小范围。
[0238] 材料和方法
[0239] 无孔微球
[0240] 使用一个500ml三颈圆底烧瓶溶解3. 75g的聚乙烯吡咯烷酮到150ml乙醇和 62.5ml甲氧基乙醇的混合物中，所述烧瓶上配有一个冷凝器和一个机械搅拌器。所述混合 物的温度通过油浴缓慢上升到73°C，同时氮气鼓泡到体系中。
[0241] 单独地，一个l〇〇ml圆底烧瓶用来溶解1. 5g苄基过氧化到37. 5ml苯乙烯中，该溶 液在氮气保护下通过磁力搅拌器来搅拌。在温度稳定后，100ml烧瓶的内容物倒入到所述 500ml三颈圆底烧瓶中，并反应过夜。
[0242] 在洗涤之前，微球在光学显微镜下观察以评估它们的尺寸和同质性。
[0243] 反应混合物均匀分布在12个50ml小瓶中并用乙醇洗涤6次以除去苯乙烯残留， 然后用50%乙醇水溶液洗涤1次和用水洗涤2次。洗涤通过在离心机中5500rpm下旋转所 述小瓶8分钟并缓慢除去上层清液来完成。经过所述洗涤，样品过夜冻干。
[0244] 多孔微球
[0245] 多孔微球通过改善 Omer-Mizrahi 和 Margel [Polymer Volume51, Issue6, 2010, Pa gesl222-1230]描述的过程来制备。简单地说，lg冻干的PS微球悬浮在50ml水和lml乙 醇中，所述悬浮液然后超声处理8分钟（ 35%振幅)，然后在配有磁力搅拌的100ml圆底烧瓶 中臭氧分解20分钟。
[0246] 生成的样品用水洗涤（5500rpm下8分钟)，直到上层清液中没有臭氧剩下，根据添 加碘化钠后颜色变化来测定。
[0247] 洗涤的样品小球悬浮在9ml水中并均匀分布到9个20ml微量瓶中，每个微量瓶中 含有lml水，相当于大约l〇〇mg PS。添加7ml的1. 43%十二烷基硫酸钠（SDS),然后添加不 同体积的甲基丙烯酸缩水甘油酯（GMA):〇.lml x2、0.2ml x2、0_25ml、0.3ml x2、0.35ml x2。 添加14mg重亚硫酸钠后，每个瓶在室温下搅拌过夜。所述样品然后用30%乙醇水洗涤2次， 乙醇洗涤2次和20%乙醇洗涤一次。所述洗涤每次在5500rpm下进行8分钟。
[0248] 结果
[0249] 无孔微球
[0250] 在光学显微镜下观测到的聚苯乙烯微球群体，表现出同质性，直径范围在 2. 1-2. 2 μ m(图4a)。当在扫描电子显微镜下观测，大多数微球干燥时为大约1. 7 μ m直径， 而含水时为2· 2 μ m (图4b-c)。
[0251] 多孔微球
[0252] 与GMA反应制备的均匀的多孔微球群，孔的直径范围在3· 5-4· 1 μ m和孔的直径范 围在0.3-1.(^111(图5^)，结果是所述微球尺寸膨胀。低的0齡（0_51111)容积不影响微 球，GMA容积从0. 5增加到1. 5ml,制备中空微球和退化微球的均匀群体。增加臭氧分解时 间到40分钟得到类似的结果。
[0253] 讨论
[0254] 在此描述的方法学生成了聚苯乙烯微球的均匀群体。孔生成使用臭氧分解和聚合 反应结合的方法，导致较窄的孔直径范围，能够使微球的作为直径范围在50-250nm内的杆 状病毒的陷阱来应用。
[0255] 实施例2
[0256] 聚苯乙稀纳米球载体
[0257] -定数量的聚苯乙烯（PS)被生产，并限定相关尺寸分布和孔隙大小范围。
[0258] 材料和方法
[0259] 600nm聚苯乙烯微球
[0260] 该方法改编自 Goodwin 等人[C0LL0ID&P0LYMER SCIENCE Volume252，Number6(1974)，464-471]所述的方法。简单来说，lml苯乙稀添加到8. 5ml的 2· 5xl(T3M氯化钠溶液中，然后添加〇. 5ml0. 05M的过硫酸钾溶液。生成的混合物在20ml闪 烁计数瓶中73°C下搅拌过夜，然后用水洗涤2次，用乙醇洗涤2次和用水洗涤2次。洗涤通 过在离心机中（lOOOOrpm下12分钟）旋转所述小瓶并缓慢倾倒上层清液来执行。
[0261] 25〇nm聚苯乙烯微球
[0262] 在20ml闪烁计数瓶中，5ml十二烷基硫酸钠（SDS)与5ml的4, 4' -偶氮双（4-氰 基戊酸)混合。用NaOH调节pH到7. 8,并添加0.75ml苯乙烯，然后在73°C下搅拌过夜。样 品通过离心器旋转（llOOOrpm下20分钟）来洗涤，并缓慢倾倒上层清液。
[0263] 结果
[0264] 600nm聚苯乙烯微球
[0265] 所述聚苯乙烯微球通过使用动态光散射（DLS/Nanophox)来分析尺寸，由此得到的 直径为591±77nm。
[0266] 250醜聚丙乙烯微球
[0267] 所述聚苯乙烯微球通过使用动态光散射（DLS/Nanophox)来分析尺寸，由此得到的 直径为231±31應,苯乙烯容积减小到〇· 3ml，生成同样尺寸的微球。
[0268] 讨论
[0269] 具有590nm或230nm平均直径的两种纳米球群体得以生成。两种群体能够分散到 4 μ m的如实施例i所述的聚苯乙烯微球中，所述聚苯乙烯微球有范围在300nm-10〇〇nm范围 的孔直径。通过用活化剂(如病毒结合部分等等)涂装所述纳米球并在所述微球中隔离所述 纳米球，这能够生成一个免疫优先的抗病毒陷阱。
[0270]聚苯乙烯多孔微球形成对身体免疫系统呈惰性的陷阱的外部表面，陷在所述微球 内部的涂装的纳米球受到保护不受免疫系统伤害并能够结合和固定通过所述微球孔进入 所述陷阱的病毒。
[0271] 实施例3
[0272] 体外实验中的杆状病毒
[0273] Sf9培养基体系被用来测试4 μ m涂装有能够结合和/或失活杆状病毒颗粒的各种 表面活化剂的聚苯乙烯微粒的有效性。
[0274] 材料和方法
[0275] 陷阱
[0276] 为了将氢蓖麻油、多熔素、两性霉素、吐温、TritonlOO-X、组织蛋白酶、表面活性蛋 白D或抗-gp64 (用于杆状病毒包膜蛋白的特异性抗体）结合到多孔聚苯乙烯微球上进而 生成病毒陷阱，结合生物素-亲和素结合剂被使用。
[0277] 若丹明B被用作对照以保证合适的结合。牛血清白蛋白（BSA)和抗-IL13被使用 作为阴性对照，因为它们预期不会干扰病毒感染。
[0278] 生物素与活化剂的结合
[0279] 赛默飞（Thermo Scientific)的 EZ-link TFPA-PEG3 -生物素试剂盒(广品号： 21303, Mw=664g/m)被用来共价结合。所述TFPA-生物素试剂通过UV光激活，并促进生物 素结合到存在于活化剂化合物的C-H键中。每种活化剂用〇· lmg、相当于1. 51χ ΙΟΛιι?οΙ的 生物素试剂孵育。正如试剂盒报告所述，1〇 : 1生物素和活化剂的摩尔比是生物素酰化的 最佳比。因此，每种活化剂的1.51xl(T5被用于生物素结合剂。
[0280] 在反应中使用的以下每个活化剂的量：
[0281] · 0· 34mg 的多溶素：平均 Mw=22, 500g/mol。
[0282] · 0· 014mg 的两性霉素：Mw=924g/mol。
[0283] · 0· 0185mg 的吐温：Mw=1227. 5g/mol (密度假设为 lg/ml)。
[0284] · 9. 8 μ g 的 Tritonl00-X : Mw=647g/mol (密度假设为 lg/ml) ·
[0285] · 2 μ g的组织蛋白酶：Mw=28, 900g/m -相当于6· 9χ10_5μ mol。为了保持生物素 试剂：活化剂比例稳定在10 : 1，〇· 46 μ g的生物素试剂被使用。
[0286] · 0. 〇45mg的氢化蓖麻油：平均Mw=3000g/mol (密度假设为lg/ml)。
[0287] · 0· 045mg 的表面活化蛋白 D : Mw=65000g/mol -相当于 3· 1χ1(Γ5μ mol。为了保 持生物素试剂：活化剂比例稳定在10 : 1，0· g的生物素试剂被使用
[0288] · 7. 2 μ g 的 Pvhodamine B : Mw=479g/mol〇
[0289] 在PBS中，TFPA-生物素试剂和活化剂混合到最终15〇 4 1的量，并在黑暗下孵育2 分钟，接着，溶液被孵育1〇分钟，在365111111^灯（23(^,0_17六111?，391)下5。111。通过赛默飞 的EZ-link sulfo-NHS-生物素试剂盒(产品号21217，Mw=454_ 5g/m)，对照试剂共价结合到 生物素。试剂通过稳定的酰胺键与任一含有伯胺的分子快速反应以连接到生j 勿素标记上。 正如试剂盒报告所述，1〇 : 1生物素和活化剂的摩尔比是用于生物素结合的最佳比。
[0290] 在反应中使用的以下每种活化剂的量： 、
[0291] ·〇. 〇33g 的牛血清白蛋白：Mw=665〇0g/mol，Ν=0· 5μηιο1，2. 3rag 的生物素试剂被 使用。 、
[0292] · 10 μ g Wife -gp ： Mw=150, OOOg/mol, 0. 3 μ g
[0293] · l〇 μ g 的抗-IL13 抗体：Mw=150, OOOg/mol，N=6.67xl(T5m，0· 3Pg 的生物素试剂 被使用。
[0294]用多孔PS微球涂装的别藻蓝素-链霉亲和素（APC-亲和素）
[0295]总数为5000万的微孔聚苯乙烯微球被用于亲和素涂装。所述微球用ΡΗ=9· 6的 50mM的碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液洗涤3次，并用20 μ g的APC-亲和素（Mw=60000g/m，产品 号4〇52〇7, BioLegend)、相当于3. 33xl〇-4 μ m，在500 μ 1碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液中，RT条 件下使用摇床孵育3〇分钟。所述微球然后用PBS洗涤3次。所述微球的浓度通过Accuri C6流式细胞仪进行测量，同时400万微球的等份被制备。
[0296] 生物素化活化剂和APC-亲和素涂装的多孔聚苯乙烯微球的结合
[0297]每等份APC-亲和素涂装的多孔聚苯乙烯微球与所述活化剂生物素反应混合物进 行混合，并在RT条件下使用摇床孵育30分钟。每等份随之用PBS洗涤4次。所述微球浓 度用Accuri C6流式细胞仪进行测量。
[0298] 结果
[0299] 多孔聚苯乙烯微球的流式细胞仪读数（Accuri C6)如图6a_b所示。FL2-A读数 (图6a)反映黄橙光谱处的发射。而FL4-A读数（图6b)反映远红外光谱处的发射。若丹明 B具有一个在625nm处的最大发射，对应于FL2-A中的读数。别藻蓝素（APC)具有在一个 在661nm处的最大发射，对应于FL4-A中的读数。图6a-b显示了聚苯乙烯微球的FL2-A和 FL4-A读数(黑色)，涂有APC-亲和素的聚苯乙烯的FL2-A和FL4-A读数(红色)、和包裹若丹 明B的涂有APC-亲和素的聚苯乙烯的FL2-A和FL4-A读数(蓝色)。所述聚苯乙烯微球(黑 色）在FL2-A和FL4-A中都具有一低强度的读数；涂有APC-亲和素的聚苯乙烯微球(红色） 在FL 2_A上具有一低强度的读数，但是在FL4-A中有一高强度的读数；包裹若丹明B的涂有 APC-未和素的聚本乙稀(蓝色）在FL2-A和FL4-A中都具有一'尚强度的读数。
[0300] 流式细胞仪读数能够指示多孔聚苯乙烯微球的APC-亲和素涂层和活化剂的生物 素化，因为通过若丹明B的生物素化来指示是成功的。
[0301] 细胞
[0302] 27°C下，Sf9细胞在SFM921血清-游离昆虫细胞培养基(表达系统）中繁殖。Sf9 细胞在I2孔板的单层上或在振动为130rpm的摇瓶的悬浮液中生长。
[0303] 足够的E. coli DH10BAC细胞，包含杆粒(杆状病毒穿梭载体质粒）和辅助质粒，根 据制造商（Invitrogen)的操作手册，被用于产生重组杆粒。基因插入（GFP)到所述杆粒由 PCR进行验证。在6个孔板中，通过使用ESCORT的生物转染试剂，Sf9细胞与重组杆粒DNA 进行传染。所述细胞在27°C下孵育5h，漂洗并继续孵育72h，培养基被收集、离心，含有病毒 的上层清液用于2-3个连续感染，引起病毒颗粒的扩增。
[0304] Sf9细胞（2*105cellS/ml)接种在12孔板上，其中，每孔1ml。细胞的感染在感染 复数（Μ0Ι)为10的条件下用两种不同方法来操作：预孵育和预防。在预孵育模式中，病毒 用不同的陷阱单独孵育30分钟，在5000g下离心3分钟，上层清液添加到细胞中。在预防 的模式中，陷阱添加到细胞中，然后也添加病毒颗粒。所述孔板在27?下放置在调湿器中 48小时，通过强力移孔里的内容物来收集，并用FACS (C6accuri)进行GFP荧光分析。 [0305] 结果与讨谈
[0306]病毒能够损害它们引起的受感染宿主生物体是已知的。目前，没有抗病毒试剂能 够表现出抗生素的有效性或多谱适用性。
[0307]本发明提供了一种通过提供病毒陷阱来抵抗病毒感染的新方法，所述病毒陷阱能 够物理上或化学上灭活感染原，如病毒。本发明也提供了一种用于观察和量化各种病毒陷 阱构造的抗病毒活度的模拟系统。 _
[0308] 与受感染的Sf9细胞（图8a和8b)相比，细胞培养实验显示，健康的未处理的Sf9 细胞（图7a和7b)的活力表现出明显的区别。Sf 9细胞用病毒和多孔聚苯乙烯陷眺（图9a 和9b用箭头表示陷阱）共同处理，带来大多数感染的Sf9细胞明显的挽救，这些细胞，从品 质上讲，与受感染细胞相比，更相似于健康的未处理细胞。
[0309] 感染相关的杆状病毒的挽救进一步被定量评估。正如图％和9d所示，感染抑制 的最高速率通过单独PS、吐温、聚赖氨酸、表面活化蛋白D和Triton来获得。
[0310] 实施例4
[0311] 杆状病毒的体内实验
[0312] Blaberus craniifer蟑螂，别名"死人头"蟑螂，被用作体内模型来评估多孔聚苯 乙烯微球陷阱的有效性和毒性。
[0313] 材料和方法
[0314] 多孔聚苯乙烯微球陷阱与杆状病毒混合并立即注射到所述蟑螂的腹部血腔，从而 探针刺入到第三和第四腹部腹片之间，接近于侧边缘（图l〇a)。每个蟑螂中，注射总数为 10 μ 1，包含1 μ 1杆状病毒和合适量的陷阱，对于每个蟑螂，达到总数为165000的陷阱颗 粒。在注射前，蟑螂在-20°C下放置7分钟以使它们麻木。
[0315] 用于注射实验的陷阱为覆盖有Triton、聚赖氨酸、表面活化蛋白D (简称SFPD)、 抗-GP64抗体（gp64)或牛血清白蛋白（BSA)中任意一个的聚苯乙燦颗粒。裸露的聚苯乙摇 颗粒用来做对照。2个蟑螂被用来注射相同的陷阱作为重复，此外，作为阳性对照，2个蟑螂 只被注射杆状病毒，作为阴性对照，2个蟑螂没有被注射。
[0316] 在注射5天后，通过刺穿后胸腿根部的膜并轻轻挤压所述蟑螂以缓慢释放血淋 巴，来收集血淋巴细胞。通过已经含有25μ 1冰冷的抗凝剂缓冲液（30mM柠檬酸、30mM柠檬 酸钠、0· 5MEDTA、0· 02%叠氮化钠）的微吸管头，25 μ 1的血淋巴被快速地收集，并悬浮到含 有50 μ 1冰冷的抗凝剂缓冲液艾本德管（印pend〇rf)中。所述细胞被计数，所述细胞的相 对GFP突光通过C6accuri流式细胞仪来被测量。
[0317]
[0318] 由于杆状病毒在本实验中表达胞质GFP标记，血淋巴细胞的相对GFP荧光为病毒 感染的直接测量。相对GFP荧光与只注射杆状病毒的蟑螂的相对GFP荧光做对比。
[0319] 过论
[0320]所述陷阱并不产生影响所述蟑螂的任何明显的毒性。而且，注入的陷阱降低了与 感染相关的GFP荧光（图10b)。覆盖有Triton或聚赖氨酸的陷阱得到的结果与没有注射的 样品具有相比性，显示了整个感染的完全的挽救。
[0321] 实施例5
[0322] 杆状病毒粘附在陷阱
[0323]陷阱与病毒进行孵育，以显示稳定杆状病毒细胞颗粒的能力，从而促进它们的抑 制能力。
[0324] 材料和方法
[0325]原子每种活化剂的400, 〇〇〇个陷阱与10 μ丨病毒轻轻地混合超过2'。每个样品随 后用lml PBS洗涤，并在5g下离心8分钟。之后，除去上层清液，添加 lml PBS，样品轻轻地 混合8分钟，然后在5g下离心8分钟。900 μ 1的上层清液被除去，所述微球悬浮在剩余的 100 μ 1溶液中。
[0326] 所述陷阱含有以下活化剂：吐温、Triton、两性霉素、表面活性蛋白D。裸露的多孔 微球和覆盖有亲和素的多孔微球都作为对照来使用。
[0327] 结果
[0328] 当使用对照陷阱时，即，裸露的多孔微球和覆盖有亲和素的多孔微球只显示了病 毒颗粒与所述微球表面最低结合，含有的Triton (图11a-b)、吐温和两性霉素的陷阱显示 了病毒颗粒的中度结合，如所示。
[0329] SEM通过碳素涂装在玻璃表面来实现。加速电压为3kV。工作距离为2. 6-2. 9ram。 棒如每个图片所示。粘附到陷阱的表面的颗粒在期望的杆状病毒颗粒尺寸范围，50-300nm。
[0330] 实施例6
[0331] DNA折纸支架
[0332] 本发明所述的DNA折纸为基础的支架的设计在caDNAno的帮助下得以发展，图 像接口为基础的计算机辅助设计环境开发用于辅助蜂窝状褶皱折纸设计的产生（Douglas etal，（2009)Nucleic Acids Research，首次网上发表 doi:10.1093/nar/gkp436)。
[0333] DNA折纸为基础的支架通过结合20nM支架DNA、和ΙΟΟηΜ的每一种常用的寡核苷 酸、包括 5mM Tris、lmM EDTA(20°C下 pH 为 7.9)、和 22mM 或 15mM MgCl°C 的缓冲液和盐。折 叠通过快速加热变性、然后从80到61?缓慢冷却超过80分钟、再然后60到24°C冷却超过 173h得以实现。为了观察到的产生的产品，样品在冰水浴中，2%琼脂糖胶（0.5X TBE，llmM MgC12, 0· 5mg/ml溴化乙啶）上70V下电泳4h。
[0334] 基本上，任何纯的随意的和高复杂性(非重复）的ssDNA可作为折纸DNA的支架。 可以使用的序列的实施例为 M13mpl8 (SEQ. ID. NO. I)、p7308 (SEQ. ID. NO. 2)、p7560 (SEQ. ID_N0.3)、p7560old(SEQ_ID.N0.4)、p75601ab(SEQ.ID.N0_5)、p7560antisense(SEQ_ ID. NO. 6)、p7704(SEQ_ ID. NO· 7)、p77041ab(SEQ. ID. NO. 8)、p8064(SEQ_ ID. NO· 9)、p80641ab (SEQ· ID. NO· 10)、p8100(SEQ. ID. NO. ll)、p8100a(SEQ. ID. NO· 12)、p8100b(SEQ. ID· NO· 13)、 p8100c (SEQ.ID.N0_14)、p8634 (SEQ.ID.N0_15)、pEGFP (SEQ.ID_N0.16)。
[0335] 例如，主要使用的DNA序列，例如，可以是如caDNAno的绘图网站（http: // cadnano. org. /gallery, html)所提供的，并在下表 1 中。
[0336] 表 1
[0337]

【权利要求】
1. 一种物质组合物，包含：由一个支架包围的至少一个活性部分，所述支架用于对象 的选择性流入，所述对象能够与所述至少一个活性部分相互作用。
2. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述支架包括核酸、聚合物、和/或娃 结构。
3. 如权利要求2所述的物质组合物，其特征在于，所述核酸结构为DNA折纸结构。
4. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述对象为物质、微生物或细胞。
5. 如权利要求4所述的物质组合物，其特征在于，所述微生物选自病毒、细菌、真菌、寄 生虫、古细菌、海藻和原生生物组成的组。
6. 如权利要求4所述的物质组合物，其特征在于，所述物质选自肽、多肽、朊病毒、脂 质、脂质复合物、核酸、碳水化合物、过敏原、毒素、激素、抗体、药物、小分子、污染物和矿物 质组成的组。
7. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述支架用于允许直径为 0. 01-50 μ m的对象选择性的流入。
8. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述支架用于允许直径为 0. 01-0. 08 μ m的对象选择性的流入。
9. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述活性部分能够结合所述对象。>
10. 如权利要求9所述的物质组合物，其特征在于，所述活性部分选自抗体、适体、受 体、螯合剂、配体、脂质体、纳米管、树状分子、原细胞、细胞、肽、蛋白质、酶、化学品、清洁剂、 毒素、药物和药物前体组成的组。
11. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述活性部分能够裂解所述对象或 使所述对象变形。
12. 如权利要求11所述的物质组合物，其特征在于，所述至少一个活性部分选自酶、核 糖酶、化学品、酸、碱和清洁剂组成的组。
13. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述至少一个活性部分连接到所述 支架。
14. 如权利要求13所述的物质组合物，其特征在于，所述至少一个活性部分通过连接 体连接所述支架。
15. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述支架在脊椎动物中基本为非免 疫原性的。
16. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述支架为非脂质支架。
17. 如权利要求I5所述的物质组合物，其特征在于，所述支架包括PEG或PEG衍生物， 或者包括透明质酸。
18. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述支架形成一个具有内部腔体的 颗粒。
19. 如权利要求18所述的物质组合物，其特征在于，所述至少一个活性部分设置于所 述腔体内。
20. 如权利要求18所述的物质组合物，其特征在于，所述至少一个活性部分在所述腔 体内连接所述支架。
21. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述至少一个活性部分在与所述对 象相互作用下能够释放分子。 >
22. 如权利要求21所述的物质组合物，其特征在于，所述分子选自标志物、毒素、激素、 药物、核酸、蛋白质和佐剂组成的组。
23. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述支架进一步包含^向部分。
24. 如权利要求23所述的物质组合物，其特征在于，所述靶向部分选自受体、抗体、适 体、组织特异性部分、微生物特异性部分、配体和磁体组成的组。
25. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述至少一个活性部分与位于所述 支架上的一种载体相连接。
26. 如权利要求25所述的物质组合物，其特征在于，所述载体陷入所述支架内。
27. 如权利要求2所述的物质组合物，其特征在于，所述结构为微电子机械系统(MEMS) 结构。
28. 如权利要求4所述的物质组合物，其特征在于，所述结合部分能够使配体非内生性 结合到所述微生物。
29. 如权利要求1所述的物质组合物，其特征在于，所述支架进一步包括至少一个免疫 调整部分。
30. -种药物组合物,包含权利要求1所述的物质组合物和药学上可接受的载体。
31. 如权利要求30所述的药物组合物，其特征在于，所述药学上可接受的载体被挑选 出来以适合口服、粘膜、外用或全身给药。
32. -种从流体分离对象的方法，包括，将所述流体暴露在物质组合物下，所述物质组 合物包括由支架包围的至少一种活性部分，所述支架用于对象的选择性流入，所述对象能 够与所述至少一种活性部分相互作用，从而从所述流体中分离所述对象。
33. 如权利要求32所述的方法，其特征在于，所述液体为生物流体。 34_如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述将生物流体暴露在物质组合物下是 通过给受试者服用所述物质组合物来实现。 3δ·如权利要求32所述的方法，其特征在于，所述液体为含水流体。
36. -种分离的多核苷酸，包括SEQ ID NO :209-476中提出的序列。 3L -种微粒，包含权利要求36所述的分离的多核苷酸。
38. -种分离的多肽，包括SEQ ID NO :477-485中提出的序列。
39· -种微粒，包括权利要求38所述的分离的多肽。
【文档编号】C07K16/00GK104203092SQ201280051213
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2012年8月23日 优先权日:2011年8月26日
【发明者】埃雷兹·阿哈龙·利夫内 申请人:维科纳米医药有限公司