细辛萃取物及其用途
【专利摘要】本发明有关于一种细辛萃取物及其用途。该细辛萃取物是通过一包含下列步骤的方法所制得：将细辛植物体磨成粉末状；细辛的粉末与酒精混合后，经热回流萃取8小时，过滤收集萃取液；其萃取液经减压浓缩去除酒精；浓缩后的萃取物再经冷冻干燥得到细辛粗抽物。该萃取物可用于促进菇菌类的菌丝生长及子实体发生及/或抑制菇菌类培养过程中的污染菌活性。
【专利说明】细辛萃取物及其用途
【技术领域】
[0001] 本发明是关于一种细辛萃取物及其用途，其可用于促进茹菌类的菌丝生长及子实 体发生及/或抑制茹菌类培养过程中的污染菌。
【背景技术】
[0002] 随着消费者追求健康生活的意识升起、替代补充医学的接受度增加及保健食品的 科学验证结果，加速全球保健食品市场的蓬勃发展。从各地区市场分析，发现美国、欧洲及 日本为全球前H大保健食品消费市场，另亚太地区则为近年来成长最快速的市场，尤其是 中国及印度保健市场，预期将随着当地经济繁荣，人民生活质量提高等因素，快速扩张其市 场规模。
[0003] 食用茹菌类为一高经济价值的产品，属低热量且含有丰富蛋白质及维生素，为优 良天然的健康食品，目前全世界已不少国家均积极发展与生产(可W参考；庄老达，2003茹 类产销现况与辅导措施，农委会推广刊物138)。台湾目前栽种生产的茹菌类有香茹、金 针茹、杏鲍茹、秀珍茹、洋茹、鸿喜茹、木耳、灵芝、草茹、高温茹、蛇茹、夏季鲍鱼茹、己西磨 茹、柳松茹、茶树茹、珊瑚茹及猴头茹等，总产值接近新台币100亿元(可W参考；石信德、 陈景桐、陈启被，2011液态菌种于茹类产业之应用，茹类产业发展研讨会专刊：37-45)。惟 多样新兴茹类虽已经济生产，但仍有己西磨茹、杏鲍茹等产量较低，秀珍茹栽培易受青霉 菌污染，棒芝栽培仅止于菌丝体却无法产生子实体等技术瓶颈尚待克服(可W参考；庄老 达，2003茹类产销现况与辅导措施，农委会推广刊物138)。根据国外与中国大陆亦有记 载或报导多种茹类栽培中会遭受污染菌危害而造成经济上重大损失，其中尤W在茹类菌 种制作过程，常造成的污染源，如 Miizopns, Aspergillns, Penicillium, Trichoderma 及 化rysonilia等，该些霉菌在形态及特性上并不相同，但其共同点为生长快速且产抱量 大，因此，极易造成污染而影响茹菌类生长与出茹（子实体），可W参考Oliver AAert K抓PKEl, Alan J. CASTLEland Danny Lee RINKER,2003Ilie No;rth American mus虹oom competitor, Trichoderma aggressivum f. aggressivum, produces antifungal compounds in mushroom compost that inhibit mycelial growth of the commercial mushroom Agaricus bisporus Mycol. Res. 107 (12) : 1467 - 1475, W及 Jean-Michel SAVOIE, !Richard IAPICCO and Michele L. LARGETEAu-MAMouNsOOWactors in-uencing the competitive saprophytic ability of Trichoderma harzianum Th2in mushroom(Agaricus bisporus) compost. Mycol. Res. 105(11):1348-1356。
[0004] 茹菌类的培养中牛棒芝是属困难度较高的，棒芝又称牛棒芝、牛棒茹或红棒 芝，属于多孔科（Polyporaceae)非權菌目，多年生覃菌类，其学名历经多次修改后，于 2010 年 Dictionary of F^mgi (真菌字典）、MycoBank(真菌银行）称为"Taiwanofungus camphorates (Ganoderma comphoratum, Antrodia camphorata and Antrodia cinnamomea 属于同义名）；但生物保存中也仍采用Antrodia cinnamomea。牛棒芝生长于牛棒树的中空 树干内壁或枯死伏倒的牛棒木材阴暗面，子实体有强烈的棒香味，外型呈板状或钟状，表面 呈娃红色，红色面有许多细孔，内有抱子，味极苦，早期台湾原住民食用牛棒芝解宿醉。近代 研究报导证实牛棒芝具有预防保护与保护肝脏疾病的作用，如预防酒精性和CCL诱发的肝 损伤，抑制B型肝炎病毒，改善脂肪肝与肝纤维化，抑制肝癌细胞生长等，尚有相关文献 报导牛棒芝具有抗氧化及抗发炎活性；目前牛棒芝可W人工培植，有液体发酵法、固体培养 法和段木栽培法，而台湾对于棒芝菌种开发利用形式包含子实体（W野生或段木栽培的牛 棒芝子实体）及菌丝体（W固体与液态培养得到的牛棒芝菌丝体）。
[0005] 而牛棒芝的培养过程中，容易遭受污染（如遭木霉菌感染）而造成栽培业者损失 不贷，过去虽有利用化学药剂作为控制，但亦有二次污染或其它副作用的虞虑。
【发明内容】
[0006] 为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种细辛萃取物，通过对细辛进行 萃取，得到一种能够用于促进茹菌类的菌丝生长及子实体发生及/或抑制茹菌类培养过程 中的污染菌的细辛萃取物。
[0007] 本发明的目的还在于提供上述细辛萃取物在促进茹菌类的菌丝生长及子实体发 生及/或抑制茹菌类培养过程中的污染菌中的应用。
[0008] 为达到上述目的，本发明提供了一种细辛（Asarum heterotropides)萃取物，其是 通过包含下列步骤的方法所制得：
[0009] 将细辛植物体磨成粉末状；
[0010] 细辛的粉末与酒精混合后，经热回流萃取8小时，过滤收集萃取液；
[0011] 其萃取液经减压浓缩去除酒精；
[0012] 浓缩后的萃取物再经冷冻干燥得到的细辛粗抽物（Ashe-E)。
[0013] 细辛；巧风，止痛，散寒，发表，温肺化姨，行水气；能通精气。本发明是采 用马兜铃科多年生草本植物北细辛（Asarum heterotropides化.Schmi化var. mandshuricum(Maxim. )Kitag.)汉城细辛（Asarum sieboldii Miq. var. seoulense Nakai) 或华细辛（Asarum sieboldii Miq.)。前两种习称"细辛"，主产于迂宁、吉林、黑龙江；后一 种主产于陕西等地。夏秋采收，阴干生用。
[0014] 根据本发明的具体实施方案，优选地，上述细辛萃取物呈粉末状，且溶于选自W下 群组的溶剂；水、氯仿（CHCLg)、正下醇（n-BuOH)、甲醇（methanol)、正己焼（n-hexane)及其 组合。
[0015] 根据本发明的具体实施方案，优选地，上述的萃取方法进一步包含W下步骤：
[0016] 将干燥的细辛粗抽物（Ashe-E) W水溶解成息浮状；
[0017] 再W氯仿（CHCLs)与水W质量比1:1进行分配萃取；
[0018] 经减压浓缩后得到氯仿层（Ashe-C)。
[0019] 根据本发明的具体实施方案，优选地，上述的萃取方法进一步包含W下步骤：
[0020] 将氯仿层（Ashe-C) W 95wt%甲醇（methanol,质量百分比为95%)溶解；
[0021] W正己焼（n-hexane)与95wt%甲醇（methanol) W质量比1:1进行分配萃取；
[0022] 经多次正己焼（n-hexane)萃取后，合并正己焼（n-hexane)可溶层，经减压浓缩后 得到正己焼层（Ashe-C-H);
[0023] 余下的95wt%甲醇层经减压浓缩后得到甲醇层（Ashe-C-M)D
[0024] 根据本发明的具体实施方案，优选地，上述细辛萃取物是用于促进茹菌类菌丝生 长及子实体发生。更优选地，该茹菌类为香茹、金针茹、杏鲍茹、秀珍茹、洋茹、鸿喜茹、木耳、 灵芝、牛棒芝、草茹、高温茹、蛇茹、夏季鲍鱼茹、己西磨茹、柳松茹、茶树茹、珊瑚茹或猴头 茹。
[00巧]根据本发明的具体实施方案，优选地，上述细辛萃取物是用于抑制茹菌类培养过 程中污染菌的生长活性。更优选地，该污染菌为木霉菌（Trichoderma harzianum)。
[0026] 本发明采用中草药中的细辛的萃取物作为防治茹菌类培养过程中的污染菌；该细 辛萃取物除可抑制污染菌外，又可促进茹菌类的菌丝生长及子实体发生。此外细辛萃取物 的细胞毒试验亦显示无毒性又可增加免疫功能。细辛的萃取物可作为促进茹菌类生长促进 剂及茹菌类栽培期间的污染真菌如木霉菌等的抑制剂。
【专利附图】
【附图说明】
[0027] 图1为本发明细辛萃取与各部分分层制备流程图。
[0028] 图2为在细辛粗抽物（Ashe-巧浓度2000ppm时，牛棒芝菌种AC5-1与对照组（CK) 的菌丝生长比较照片。
[0029] 图3为在细辛粗抽物（Ashe-巧浓度2000ppm时，木霉菌T1-1-1与对照组（CK)的 菌丝生长比较照片。
[0030] 图4为细辛粗抽物（Ashe-E)及氯仿层（Ashe-C)、正了醇层（Ashe-B)、水层 (Ashe-W)各分层对木霉菌T-2-1菌丝生长抑制活性的统计图（*p<0. 05, **p<0. 01，***p<0. OOlcompared with control)。
[0031] 图5为细辛粗抽物（Ashe-E)及氯仿层（Ashe-C)、正了醇层（Ashe-B)、水层 (Ashe-W)各分层对木霉菌T-3-1菌丝生长抑制活性的统计图（*p<0. 05, **p<0. 01，***p<0. OOlcompared with control)。
[0032] 图6为细辛粗抽物（Ashe-E)及氯仿层（Ashe-C)、正了醇层（Ashe-B)、水层 (Ashe-W)各分层对木霉菌棒木-1菌丝生长抑制活性的统计图（*p<0. 05, **p<0. 01，***p<0 .OOlcompared with control)。
[003引 图7为氯仿层（Ashe-C)及其分层正己焼层（Ashe-C-H)、甲醇层（Ashe-C-M)对木 霉菌 T-2-1 菌丝生长抑制活性的统计图（*p<0. 05, **p<0. 01，***p<0. OOlcompared with control)。
[0034] 图8为氯仿层（Ashe-C)及其分层正己焼层（Ashe-C-H)、甲醇层（Ashe-C-M)对木 霉菌 T-3-1 菌丝生长抑制活性的统计图（*p<0. 05, **p<0. 01, ***p<0. OOlcompared with control)。
[003引 图9为氯仿层（Ashe-C)及其分层正己焼层（Ashe-C-H)、甲醇层（Ashe-C-M)对木 霉菌棒木-1菌丝生长抑制活性的统计图（*p<0. 05, **p<0. 01, ***p<0. OOlcompared with control)。
[0036] 图10a-图IOd为细辛粗抽物（Ashe-巧对段木栽培的牛棒芝生长、子实体产生与 污染木霉菌影响的实作试验照片。
[0037] 图11为细辛粗抽物及各分层刺激巨瞻细胞株（THP-I)细胞分泌IL-IO的统计图 (分泌量增加与对照组若达到统计意义W冲< 0. 05 ;*冲< 0. Ol ;**冲< 0. OOl来表示； 分泌量减少则 W #P < 0. 05 ;##P < 0. Ol ;###P < 0. OOl 来表示）。
【具体实施方式】
[0038] 本发明是W茹菌类中的牛棒芝及木霉菌做为实施例说明，W细辛的萃取物针对牛 棒芝的菌丝生长及子实体发生的促进及抑制牛棒芝培养过程中的木霉菌（污染菌），详细 说明于后：
[00測萃取物制备
[0040] 先将细辛（Asarum heterotropides)植物体磨成粉末状，再将粉末与95%酒精混 合于容器内，比例约1:3 (w/w)，再经热回流萃取8小时，过滤收集萃取液，残渣粉块再重复 上述热回流萃取4次收集萃取液，将其萃取液合并经减压浓缩机浓缩去除酒精，浓缩后的 萃取物再经冷冻干燥去除水分得到干燥的细辛粗抽物（Ashe-E)(请参阅图1)。
[0041] 将干燥的细辛粗抽物（Ashe-E) W水溶解成息浮状，再W氯仿（CHCLs)与水进行 分配萃取，质量比为1:1，经多次氯仿（CHCLs)萃取后，合并氯仿（CHCLs)可溶层并经减压 浓缩后得到氯仿层（Ashe-C)萃取物。余下的水层再与正下醇（n-BuOH)进行分配萃取，质 量比为1:1，经多次正下醇层（n-BuOH)萃取后，合并正下醇（n-BuOH)可溶层并经减压浓缩 后得到正下醇层（Ashe-B)萃取物，水层亦经减压浓缩后得到水层（Ashe-W)萃取物。另将 氯仿层（Ashe-C) W 95wt%甲醇（methanol)溶解，再W正己焼（n-hexane)与95wt%甲醇 (methanol)进行分配萃取，质量比为1:1，经多次正己焼（n-hexane)萃取后，合并正己焼 (n-hexane)可溶层并经减压浓缩后得到正己焼层（Ashe-C-H)萃取物，余下的95wt%甲醇层 亦经减压浓缩后得到甲醇层（Ashe-C-M)萃取物。
[0042] 实施例1
[0043] 将5. 3kg的细辛根植物体磨成粉末状，再将粉末与95%酒精混合于容器内，比例约 1:3 (w/w)，再经热回流萃取8小时，过滤收集萃取液，残渣粉块再重复上述热回流萃取4次 收集萃取液，将其萃取液合并经减压浓缩机浓缩去除酒精，浓缩后的萃取物再经冷冻干燥 去除水分得到600. 81g干燥的细辛粗抽物（Ashe-E)。
[0044] 再将干燥的细辛粗抽物（Ashe-E) W水溶解成息浮状，再W氯仿（CHCLs)与水W 质量比1:1进行分配萃取，经多次氯仿（CHCLs)萃取后，合并氯仿（CHCLs)可溶层并经减压 浓缩后得到187. 22g氯仿层（Ashe-C)萃取物。余下的水层再与正下醇（n-BuOH) W质量 比1:1进行分配萃取，经多次正下醇层（n-BuOH)萃取后，合并正下醇（n-BuOH)可溶层并 经减压浓缩后得到132. OOg正下醇层（Ashe-B)萃取物，水层亦经减压浓缩后得到150. 99g 水层（Ashe-W)萃取物。另将氯仿层（Ashe-C) W 95wt%甲醇（methanol)溶解，再W正 己焼（n-hexane)与95wt%甲醇（methanol)进行分配萃取，质量比为1:1，经多次正己焼 (n-hexane)萃取后，合并正己焼（n-hexane)可溶层并经减压浓缩后得到115. 43g正己焼层 (Ashe-C-H)萃取物，余下的95wt%甲醇层亦经减压浓缩后得到30. 90g甲醇层（Ashe-C-M) 萃取物。
[0045] 本发明试验方法与检测
[0046] (1)牛棒芝；Antrodia cinnamomea菌种AC1、AC2(商雄师范大学)、AC2-1、AC5-1 (菌 种中也）、AC007、AC398(由艾莉丝生物科技公司提供）。
[0047] (2)木霉菌（Trichoderma harzianum Th2);菌株 T1-1-1、T1-2-1、T1-3-1 及棒 木-I (来自虎尾科技大学生物科技系应用微生物实验室）。
[004引 （3)生长培养基
[0049] 木霉菌生长培养基如表1所示。
[0050] 表 1
[0051]
【权利要求】
1. 一种细辛萃取物，其是通过一包含下列步骤的方法所制得： 将细辛植物体磨成粉末状； 细辛的粉末与酒精混合后，经热回流萃取8小时，过滤收集萃取液； 其萃取液经减压浓缩去除酒精； 浓缩后的萃取物再经冷冻干燥得到细辛粗抽物。
2. 如权利要求1所述的细辛萃取物，其是呈粉末状，且溶于选自以下群组的溶剂：水、 氯仿、正丁醇、甲醇、正己烷及其组合。
3. 如权利要求1所述的细辛萃取物，所述方法进一步包含以下步骤： 将干燥的细辛粗抽物以水溶解成悬浮状； 再以氯仿与水以质量比1:1进行分配萃取； 经减压浓缩后得到氯仿层。
4. 如权利要求3所述的细辛萃取物，所述方法进一步包含以下步骤： 将氯仿层以95wt%甲醇溶解； 以正己烷与95wt%甲醇以质量比1:1进行分配萃取； 经多次正己烷萃取后，合并正己烷可溶层，经减压浓缩后得到正己烷层； 余下的95wt%甲醇层经减压浓缩后得到甲醇层。
5. 权利要求1-4任一项所述的细辛萃取物在促进菇菌类菌丝生长及子实体发生中的 用途。
6. 如权利要求5所述的用途，其中，所述菇菌类为香菇、金针菇、杏鲍菇、秀珍菇、洋菇、 鸿喜燕、木耳、灵芝、牛樟芝、草燕、高温燕、蛇燕、夏季鲍鱼燕、巴西磨燕、柳松燕、茶树燕、珊 瑚燕或猴头燕。
7. 权利要求1-4任一项所述的细辛萃取物在抑制菇菌类培养过程中污染菌的生长活 性中的用途。
8. 如权利要求7所述的用途，其中，所述污染菌为木霉菌。
【文档编号】A01G1/04GK104224874SQ201310228179
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2013年6月8日 优先权日:2013年6月8日
【发明者】罗朝村, 戴佑存, 石丽仙, 叶怡玲 申请人:虎尾科技大学