一种丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，通过以海藻酸钠为基本载体，配合壳聚糖、明胶、甘油、大米、泥炭、煤渣、麦芽根多种填充物混合得到混合物，混合物灭菌后，将菌剂包埋到混合物中得到菌剂混合物，将菌剂混合物通过物理挤压方式滴入到氯化钙溶液中制成球状物，在球状物固化清理后得到丛枝菌根真菌胶囊菌剂。在本发明中，内球囊霉真菌的孢子、菌根及菌丝包埋在海藻酸钠中，播种在未灭菌的土壤中时可以完成完整的侵染过程，随侵染时间的延长，侵染率均有提升。本发明的制备方法简单、成本低廉、毒性小，本发明的丛枝菌根真菌胶囊菌剂包埋材料易于被微生物分解，保存时间较长，同时可直接播种于大田中。
【专利说明】一种丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于胶囊菌剂制备【技术领域】，尤其涉及一种丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法。
【背景技术】
[0002]丛枝菌根(Arbuscularmycorrhizalfungus,丛枝菌根真菌)真菌是广泛存在于土壤中的内生菌根真菌，它可以与地球上80%的植物形成共生体系。研究表明，丛枝菌根真菌可以改善植物体内水分代谢，提高抗干旱、盐碱能力；增强植物抗病能力；促进植物对各种矿质元素的吸收与利用，从而促进生长，改善品质。而丛枝菌根真菌则利用宿主植物提供的碳水化合物维持自身生长和繁殖。丛枝菌根真菌是专性共生真菌，自身不能合成DNA，因此至今还无法像外生真菌一样进行纯培养进而工业发酵，只能依存植物根部与其共同繁殖生长。
[0003]液体菌剂生产简单，成本低廉，使用方便，但是运输困难，不利于真菌的生长和繁殖，储存时间不宜过长。固体菌剂是在液体菌剂基础上，加入适当物质和菌种生产而成，制作简单，运输及储存方便，缺点是同等质量和体积的菌剂含菌量低于液体菌剂。粉剂是将孢子混入填充料中制成的菌剂，储存、运输及使用较为方便，但菌剂中只有孢子，孢子发芽不好会影响菌剂的使用效果。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，旨在解决的问题。
[0005]本发明是这样实现的，一种丛枝`菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，包括以下步骤:
[0006]( I)以海藻酸钠为基本载体，往所述基本载体中加入填充物混合,将所述混合物灭菌，并将丛枝菌根液体菌剂均匀包埋到所述混合物中，得到菌剂混合物；其中，所述填充物为壳聚糖、明胶、甘油、泥炭、煤渣、麦芽根和大米粉其中至少一种；所述菌剂混合物中海藻酸钠、填充物以及丛枝菌根的质量百分比分别为2~3%、2~9%以及I~2% ；
[0007](2)将所述菌剂混合物通过物理挤压方式滴入到质量浓度比为1.5~4.5%氯化钙溶液中，在搅拌状态下，所述菌剂混合物的滴入物在氯化钙溶液中形成球状物，在所述球状物固化后取出，并将表面氯化钙用无菌水清洗后晾干，得到丛枝菌根真菌胶囊菌剂。
[0008]优选地，在步骤(1)中，所述填充物为占菌剂混合物质量百分比值为2%的壳聚糖、3%的明胶、5%的甘油、3~5%的泥炭、7~9%的煤渣、2~5%的麦芽根或2~5%的大米粉。
[0009]优选地，在步骤(1)中，所述填充物在使用前研磨均匀；
[0010]在步骤(1)中，所述液体菌剂与灭菌后混合物的温度均低于40°C，所述灭菌为在121°C、0.12MPa压力下蒸汽灭菌20min ；
[0011]在步骤(1)中，所述包埋的温度为20~40°C。
[0012]优选地，在步骤(1)中，丛枝菌根液体菌剂通过以下步骤制备:[0013]A、将丛枝菌根用胡萝卜离体根进行双重培养，获得丛枝菌根真菌培养物；
[0014]B、将所述丛枝菌根真菌培养物搅碎后，过400目筛并用无菌水筛除杂质，留取含有菌丝、孢子及菌根的丛枝菌根液体菌剂。
[0015]优选地,所述丛枝菌根为根内球囊霉菌(Glomusintraradices)。
[0016]优选地，在步骤(2)中，所述物理挤压方式为将所述菌剂混合物用恒流泵或注射器进行挤压；
[0017]在步骤(2)中，所述球状物的直径为3~6mm ;
[0018]在步骤(2)中，所述搅拌的速度不大于30rpm/min ；
[0019]在步骤(2)中，所述固化的时间为8~16h。
[0020]为克服现有技术的不足和缺点，在本发明中提供了一种丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，通过以海藻酸钠为基本载体，配合壳聚糖、明胶、甘油、大米、泥炭、煤渣、麦芽根多种填充物混合得到混合物，混合物灭菌后，将菌剂包埋到混合物中得到菌剂混合物，将菌剂混合物通过物理挤压方式滴入到氯化钙溶液中制成球状物，在球状物固化清理后得到丛枝菌根真菌胶囊菌剂。在本发明中，内球囊霉真菌的孢子、菌根及菌丝包埋在海藻酸钠中，播种在未灭菌的土壤中时可以完成完整的侵染过程，随侵染时间的延长，侵染率均有提升。本发明的制备方法简单、成本低廉、毒性小，本发明的丛枝菌根真菌胶囊菌剂包埋材料易于被微生物分解，保存时间较长，同时可直接播种于大田中。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]图1是本发明效果实`施例中丛枝菌根真菌胶囊菌剂I~8的外形观察结果图；
[0022]图2是本发明效果实施例中不同菌剂25天后的侵染率的结果比较图；
[0023]图3是本发明效果实施例中不同菌剂随着培养时间下侵染率变化示意图；
[0024]图4是本发明效果实施例中丛枝菌根真菌胶囊菌剂5储存不同时间后对高粱的侵染率变化示意图；
[0025]图5是本发明效果实施例中丛枝菌根真菌胶囊菌剂1、2以及4冷冻干燥前后侵染率变化示意图。
【具体实施方式】
[0026]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0027]实施例丛枝菌根真菌胶囊菌剂的生产
[0028](I)液体菌剂的制备
[0029]取R1-TDNA胡萝卜根双重培养获得的根内球囊霉菌(Glomusintraradices)固体菌剂(该菌剂的具体制备方法参见
【发明者】金海如 申请人:浙江师范大学