一种灰树花三级菌种制作方法
【专利摘要】本发明一种灰树花三级菌种制作方法。包括一、二级菌种制作，三级菌种制作，菌包制作，接种培菌，催蕾，育菇，所述三级菌种制作包括培养基配方、培养基制作、装袋、灭菌、接种、培菌、养菌，其特征在于：所述培养基配方分为木条培养基配方和麦粒培养基配方，所述培养基制作包括木条培养基制作和麦粒培养基制作。与木屑菌种相比，本发明的菌种接种效率高5%～8%，菌种最大生长距离短50%～100%，培菌效率高20%～60%，且菌包上下菌龄较为一致，利于营养集中释放，首批菇产量可增加15%～30%；与液体菌种相比，本发明的菌种适用于我国现有菌种生产、检测及接种设备及技术人员，且其可降低培菌感染率2%～5%。
【专利说明】一种灰树花三级菌种制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于灰树花菌种【技术领域】，特别涉及一种灰树花三级菌种制作方法。
【背景技术】
[0002] 灰树花[Grifola frondosa (Dicks, ex Fr) S. F. Gray]，又名舞鸾，属担子菌亚 门、层菌纲、非褶菌目、多孔菌科、树花菌属。是WHO和FA0组织向发展中国家推荐的名贵经 济品种，是一种膳、药兼用的高档珍稀食用菌。
[0003] 我国从20世纪80年代初开始对灰树花进行人工驯化栽培，目前栽培规模较大省 份有河北和浙江，其它省份如辽宁、山东、山西、陕西、安微、江苏、湖北、福建等也有灰树花 的人工栽培，但规模都不大。灰树花的工厂化生产技术研究我国起步较晚，目前仍处于初始 阶段。
[0004] 灰树花与大多数食用菌相比，其菌丝萌发定植较缓慢、前期较稀疏、抗杂能力较 弱，同等情况下，培菌期较长。
[0005] 在灰树花生产中，尤其工厂化生产中，高纯度、易于检测菌种质量、可快速定植、盖 面、利于防止感杂、缩短菌包培菌期的三级菌种，是生产成功的关键技术之一。本发明在菌 种质量检测难度、盖面速度、防止感杂及缩短菌包培菌期上与现有三级菌种相比，优势显 著，且可在现有工厂化接种设备上实现高效率接种作业，适合工厂化生产。
[0006] 现有的灰树花木屑菌种配方为：杂木屑73%、麦麸25%、糖1%、石膏粉1%、含水量 60%，PH7。高压1.49X105帕，126°C灭菌1.5?2h。按无菌要求接入二级种，培养至菌丝 满瓶，养菌20?25天，即得到灰树花木屑菌种。其缺点在于：菌种最大生长距离较大，培菌 期较长，不适合工厂化生产高效培菌要求；菌种打碎较困难，影响接种速度。
[0007] 中国专利CN200910201986. 8记载了二级液体菌种制作方法：培养液中装入发酵 罐中，培养液与发酵罐的通气设备一起来菌，灭菌后冷却至25°C以下，接入一级液体菌种， 培养12?15d，即得到灰树花液体菌种。其缺点在于：菌种生产技术要求高，需要先进的培 养设备及专业的制种人员，难以适应我国灰树花生产现状；菌种检测技术要求高，需要先进 的检测设备及专业的检测人员，难以适应我国灰树花生产现状；菌种接种技术要求高，需要 先进的接种设备设施及专业的接种人员，难以适应我国灰树花生产现状；菌种培养基与生 产培养料成分差异较大，接种后定植、盖面较慢，培菌前1周易于感染杂菌。
[0008] 中国专利201110440012. 2公开了一种杏鲍菇菌种生产方法，包括：麦粒处理、枝 条处理、培养基调配、装瓶、灭菌、接种、菌种培养。该枝条麦粒菌种在杏鲍菇、金针菇生产， 尤其工厂化生产上得到较好应用，但尚未有用于灰树花栽培的报道，且由于灰树花与杏鲍 菇和金针菇生物学特性存在较大差异，该枝条麦粒菌种直接应用到灰树花栽培上效果极 差，几乎不能应用，主要表现在以下几个方面：1)软质枝条在灰树花菌种适期，腐烂较严重， 顶部用镊子一夹就碎，难以夹取，中上部易断折，导致接种废种率较高，影响接种效率，影响 程度视木条材质而异；2)灰树花菌丝在无杂木屑的麦粒培养基上生长较弱，接种后麦粒 菌种上易感染杂菌，易污染培菌和出菇环境；3)无杂木屑的麦粒培养基与生产培养料成分 存在较大差异，接种后定植、盖面较慢，培菌前1周易于感染杂菌。
【发明内容】
[0009] 针对现有的灰树花生产所用的木屑固体菌种接种效率低、发菌慢(菌种最大生长 距离大）和液体菌种需要选进的制种、检测及接种设备和专业化检测接种人员等问题，本发 明提供一种适合我国现阶段灰树花生产的灰树花三级菌种制作方法。
[0010] 本发明解决上述技术问题的技术方案为： 一种灰树花二级囷种制作方法，包括一、-级囷种制作，二级囷种制作，囷包制作，接种 培菌，催蕾，育菇，所述三级菌种制作包括培养基配方、培养基制作、装袋、灭菌、接种、培菌、 养菌，其特征在于： 所述培养基配方分为木条培养基配方和麦粒培养基配方，所述木条培养基配方为：按 干重计，栗木木条（规格：〇. 4?0. 8cmX0. 4?0. 8cmX 10?18cm，木条长度应比出燕菌包 高度短1?5cm) 80%?88%、麸皮10%?18%、熟石膏粉0. 5%?3% ;所述麦粒培养基配方为： 按干重计，麦粒80%?88%、细杂木屑（松、杉、柏、樟木屑除外，粒径< 3mm) 10%?18%、熟石 膏粉0. 5%?3% ; 所述培养基制作包括木条培养基制作和麦粒培养基制作，所述木条培养基制作为：将 栗木木条用1°/。石灰水浸泡预湿120?130h，捞出木条，并用清水洗净不溶性石灰，浙干至无 水流出，再将麸皮与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿木条上，混匀待用； 所述麦粒培养基制作为：将麦粒用1%石灰水浸泡预湿72?80h，捞出麦粒，并用清水 洗净不溶性石灰，浙干至无水流出；再将细杂木屑与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿麦粒上，再 拌均匀，待用。
[0011] 上述的灰树花三级菌种制作方法，所述的装袋操作为：选用规格为13?16 cmX 27?35 cmXO. 004?0. 007cm的袋子，先将麦粒培养基在袋底垫0. 5?3cm厚的一 层，再将木条培养基整理成40?70根的小捆，并用橡皮筋固定，然后坚直放到袋内的一边， 接着再将麦粒培养基填充到另一边，麦粒培养基高出木条培养基〇. 5?2cm并覆盖木条培 养基，整平麦粒培养基，然后用套环及盖封袋。
[0012] 上述的灰树花三级菌种制作方法，所述的灭菌条件为：高压1. 49X 105帕，126°C灭 菌3. 5?4h，放入冷却室冷却至常温。
[0013] 上述的灰树花三级菌种制作方法，所述的接种操作为：在接种箱内按无菌操作接 入二级菌种。
[0014] 上述的灰树花三级菌种制作方法，所述的培菌方法为：温度22?24°C，湿度 60%?70%，空气清新，无光培养25?35天，至菌丝长满菌种袋，期间每隔5?10d检杂一 次。
[0015] 上述的灰树花三级菌种制作方法，所述的养菌方法为：温度20?22 °C，湿度 60%?70%，空气清新，无光养菌20?25天，得到灰树花三级菌种。
[0016] 上述的灰树花三级菌种制作方法，所述一、二级菌种制作方法为： 一级菌种制作包括培养基配制，装试管，121°c灭菌30min，冷却，无菌接种，24°C和相对 湿度65%条件下培养至菌丝满管；所述培养基采用加富PDA培养基配方，具体为：麦粒50g+ 土豆200g混合煮汁、葡萄糖20g、琼脂20g、pH值自然、制作培养基lOOOmL ; 二级菌种制作包括培养基配制，装瓶，125°C灭菌90min，冷却，无菌接种，24°C和相对湿 度65%条件下培养至菌丝满瓶；所述培养基采用木屑培养基配方，具体为：杂木屑75%，麸皮 15%、玉米粉8%、熟石膏粉1%、石灰1%，含水量60%。
[0017] 上述的灰树花三级菌种制作方法，所述的菌包制作方法为：按配方配制灰树花培 养料，装包，包中央打直径1. 5?2. 5cm，深度大于木条长度0. 5?3cm的接种孔，用套环 封口，灭菌。
[0018] 上述的灰树花三级菌种制作方法，所述的接种培菌方法为：将灭菌完毕的菌包冷 却至室温，按无菌操作接入灰树花三级菌种，木条菌种插入接种孔，麦粒菌种盖面（略大于 套环即可)，放入培菌室培养25-30天至菌丝长满菌包。
[0019] 上述的灰树花三级菌种制作方法，所述的催蕾包括瓦片制作和原基分化，其方法 参照本 申请人:已有的中国专利CN102511310B，具体如下： 瓦片制作方法为：瓦片展平为半椭圆形，椭圆形长径为菌袋直径的3/4?1倍，短径为 菌袋直径的3/8?1/2,短径为长径的1/3?2/3,将椭圆弯为瓦片形，瓦片圆孤直径为菌袋 直径的1/2?4/5,即将瓦片覆于菌袋上，瓦片与菌袋间因为直径差会形成一空间，菌丝长 满后经后熟培养5?10天，将菌包移入出菇房，在菌袋侧壁菌丝浓密处开直径2?2. 5cm 的圆孔作为出菇孔，将孔内培养料剐去2?3mm，将菌包平放于地面或架子上，在孔上盖瓦， 温度控制在17?19°C，湿度控制在75?80%，C0 2浓度控制在1500mg/kg以下，并给予 200?800LUX的光照； 原基分化方法为：覆瓦催蕾8?10天，出菇孔长出脑状原基，去掉覆瓦，温度控制在 18?20°C，湿度控制在85?90%，C02浓度控制在1000mg/kg以下，并给予400?1000LUX 的光照。
[0020] 上述的灰树花三级菌种制作方法，所述的育菇方法为：覆瓦催蕾15?16天，温度 控制在16?24°C，湿度控制在85%左右，C0 2浓度控制在1500mg/kg以下，并给予400? 1000LUX的光照，直至采收。
[0021] 本发明所采用的上述技术方案以菌种袋作为容器，但也可使用适当大小的菌种瓶 作为容器，亦可达到相同的技术效果。
[0022] 术语释义 菌种最大生长距离：培菌过程中，菌丝长满菌包需要延伸的最远距离。
[0023] 本发明的有益效果在于： 1、本发明通过限定木条材质，可降低废种率8%?15%，提高接种效率10%?20%。
[0024] 2、本发明通过优化麦粒培养基组成，可提高菌丝活率，杜绝麦粒菌种接种后再次 感染杂菌。
[0025] 3、本发明通过往麦粒培养基内添加适量细杂木屑，可提前激活菌丝纤维素和木质 素降解酶类，加快菌种定植、盖面速度，可使得培菌前1周感染杂菌的可能性大大降低。
[0026] 4、本发明的菌种与木屑菌种相比：接种效率高5%?8%，菌种最大生长距离短 50%?100%，培菌效率高20%?60%，且使用本菌种，菌包上下菌龄较为一致，利于菌包营养 集中释放，首批菇产量可增加15%?30% ;本发明的菌种与液体菌种相比：适用于我国现有 的菌种生产、检测及接种设备及技术人员，培菌效率相当，但其定植、盖面较快，且菌种本身 具有较好的抗菌、隔菌效果，同等情况下，可降低培菌感染率2%?5%。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明并不限于此。
[0028] 实施例1 一种灰树花三级菌种制作方法，包括如下步骤： (1) 一、二级菌种制作： 一级菌种制作包括培养基配制，装试管，121°c灭菌30min，冷却，无菌接种，24°C和相对 湿度65%条件下培养至菌丝满管；所述培养基采用加富PDA培养基配方，具体为：麦粒50g+ 土豆200g混合煮汁、葡萄糖20g、琼脂20g、pH值自然、制作培养基1000mL ; 二级菌种制作包括培养基配制，装瓶，125°C灭菌90min，冷却，无菌接种，24°C和相对湿 度65%条件下培养至菌丝满瓶；所述培养基采用木屑培养基配方，具体为：杂木屑75%，麸皮 15%、玉米粉8%、熟石膏粉1%、石灰1%，含水量60%。
[0029] (2)三级菌种制作 I.培养基配方 分为木条培养基配方和麦粒培养基配方； 木条培养基配方为：按干重计，栗木木条（规格：〇. 4?0. 8cmX0. 4?0. 8cmX 10? 18cm，木条长度应比菌袋高度短1?5cm) 80%、麸皮18%、熟石膏粉2% ; 麦粒培养基配方为：按干重计，麦粒8 0 %、细杂木屑（松、杉、柏、樟木屑除外，粒径 彡3mm) 18%、熟石膏粉2% ; Π.培养基制作 包括木条培养基制作和麦粒培养基制作； 木条培养基制作为：将栗木木条用1%石灰水浸泡预湿120h，捞出木条，并用清水洗净 不溶性石灰，浙干至无水流出。先将麸皮与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿木条上，混匀待用； 麦粒培养基制作为：将麦粒用1%石灰水浸泡预湿72h，捞出麦粒，并用清水洗净不溶 性石灰，浙干至无水流出；再将细杂木屑与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿麦粒上，再拌均匀，待 用。
[0030] III ·装袋 选用规格为13?16 cmX27?35 cmXO. 004?0.007cm的袋子，先将麦粒培养基在 袋底垫0. 5cm厚的一层，再将木条培养基整理成40根的小捆，并用橡皮筋固定，然后坚直放 到袋内的一边，接着再将麦粒培养基填充到另一边，麦粒培养基高出木条培养基〇. 5cm并 覆盖木条培养基，整平麦粒培养基，然后用套环及盖封袋。
[0031] IV.灭菌 高压1. 49 X 105帕，126°C灭菌3. 5h，放入冷却室冷却至常温。
[0032] V .接种 在接种箱内按无菌操作接入二级菌种。
[0033] VI·培菌 温度22°C，湿度60%，空气清新，无光培养25天，至菌丝长满菌种袋，期间每隔5d检杂 一次。
[0034] W.养菌 温度20°C，湿度60%，空气清新，无光养菌20天，得到灰树花三级菌种。
[0035] (3)菌包制作 按配方配制灰树花培养料，装包，包中央打直径1. 5cm，深度大于木条长度0. 5cm的接 种孔，用套环封口，灭菌。
[0036] (4)接种培菌 将灭菌完毕的菌包冷却至室温，按无菌操作接入灰树花三级菌种，木条菌种插入接种 孔，麦粒菌种盖面(略大于套环即可)，放入培菌室培养25天至菌丝长满菌包。
[0037] (5)催蕾 包括瓦片制作和原基分化； I.瓦片制作 瓦片展平为半椭圆形，椭圆形长径为菌袋直径的3/4倍，短径为菌袋直径的3/8,短 径为长径的1/3,将椭圆弯为瓦片形，瓦片圆孤直径为菌袋直径的1/2,即将瓦片覆于菌袋 上，瓦片与菌袋间因为直径差会形成一空间，菌丝长满后经后熟培养5天，将菌包移入出菇 房，在菌袋侧壁菌丝浓密处开直径2cm的圆孔作为出菇孔，将孔内培养料剐去2mm，将菌 包平放于地面或架子上，在孔上盖瓦，温度控制在17°C，湿度控制在75%，C0 2浓度控制在 1100mg/kg，并给予200LUX的光照； II .原基分化 覆瓦催蕾8天，出菇孔长出脑状原基，去掉覆瓦，温度控制在18°C，湿度控制在85%， C02浓度控制在800mg/kg，并给予400LUX的光照。
[0038] (6)育菇 覆瓦催蕾15天，温度控制在16°C，湿度控制在85%左右，C02浓度控制在1500mg/kg，并 给予400LUX的光照，直至采收。
[0039] 与木屑菌种相比，本菌种接种效率高5%，菌种最大生长距离短50%，培菌效率高 20%，且使用本菌种，菌包上下菌龄较为一致，利于菌包营养集中释放，首批菇产量可增加 20%;与液体菌种相比，本菌种适用于我国现有的菌种生产、检测及接种设备及技术人员，培 菌效率相当，但其定植、盖面较快，且菌种本身具有较好的抗菌、隔菌效果，同等情况下，可 降低培菌感染率2%。
[0040] 实施例2 一种灰树花三级菌种制作方法，包括如下步骤： (1) 一、二级菌种制作 一级菌种制作包括培养基配制，装试管，121°c灭菌30min，冷却，无菌接种，24°C和相对 湿度65%条件下培养至菌丝满管；所述培养基采用加富PDA培养基配方，具体为：麦粒50g+ 土豆200g混合煮汁、葡萄糖20g、琼脂20g、pH值自然、制作培养基1000mL ; 二级菌种制作包括培养基配制，装瓶，125°C灭菌90min，冷却，无菌接种，24°C和相对湿 度65%条件下培养至菌丝满瓶；所述培养基采用木屑培养基配方，具体为：杂木屑75%，麸皮 15%、玉米粉8%、熟石膏粉1%、石灰1%，含水量60%。
[0041] (2)三级菌种制作 I.培养基配方 分为木条培养基配方和麦粒培养基配方； 木条培养基配方为：按干重计，栗木木条（规格：〇. 4?0. 8cmX0. 4?0. 8cmX 10? 18cm，木条长度应比菌袋高度短1?5cm) 88%、麸皮11. 5%、熟石膏粉0. 5% ; 麦粒培养基配方为：按干重计，麦粒88%、细杂木屑（松、杉、柏、樟木屑除外，粒径 彡3mm) 11. 5%、熟石膏粉0· 5% ; Π.培养基制作 包括木条培养基制作和麦粒培养基制作； 木条培养基制作为：将栗木木条用1%石灰水浸泡预湿130h，捞出木条，并用清水洗净 不溶性石灰，浙干至无水流出。先将麸皮与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿木条上，混匀待用； 麦粒培养基制作为：将麦粒用1%石灰水浸泡预湿80h，捞出麦粒，并用清水洗净不溶 性石灰，浙干至无水流出；再将细杂木屑与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿麦粒上，再拌均匀，待 用。
[0042] III ·装袋 选用规格为13?16 cmX27?35 cmXO. 004?0.007cm的袋子，先将麦粒培养基在 袋底垫3cm厚的一层，再将木条培养基整理成70根的小捆，并用橡皮筋固定，然后坚直放到 袋内的一边，接着再将麦粒培养基填充到另一边，麦粒培养基高出木条培养基2cm并覆盖 木条培养基，整平麦粒培养基，然后用套环及盖封袋。
[0043] IV.灭菌 高压1. 49X 105帕，126°C灭菌4h，放入冷却室冷却至常温。
[0044] V ·接种 在接种箱内按无菌操作接入二级菌种。
[0045] VI·培菌 温度24°C，湿度70%，空气清新，无光培养35天，至菌丝长满菌种袋，期间每隔10d检杂 一次。
[0046] W.养菌 温度22°C，湿度70%，空气清新，无光养菌25天，得到灰树花三级菌种。
[0047] (3)菌包制作 按配方配制灰树花培养料，装包，包中央打直径2. 5cm，深度大于木条长度3cm的接种 孔，用套环封口，灭菌。
[0048] (4)接种培菌 将灭菌完毕的菌包冷却至室温，按无菌操作接入灰树花三级菌种，木条菌种插入接种 孔，麦粒菌种盖面(略大于套环即可)，放入培菌室培养30天至菌丝长满菌包。
[0049] (5)催蕾 包括瓦片制作和原基分化； I.瓦片制作 瓦片展平为半椭圆形，椭圆形长径为菌袋直径的1倍，短径为菌袋直径的1/2,短径为 长径的2/3,将椭圆弯为瓦片形，瓦片圆孤直径为菌袋直径的4/5,即将瓦片覆于菌袋上，瓦 片与菌袋间因为直径差会形成一空间，菌丝长满后经后熟培养10天，将菌包移入出菇房， 在菌袋侧壁菌丝浓密处开直径2. 5cm的圆孔作为出菇孔，将孔内培养料剐去3mm，将菌包 平放于地面或架子上，在孔上盖瓦，温度控制在19°C，湿度控制在80%，C0 2浓度控制在 1200mg/kg，并给予800LUX的光照； II .原基分化 覆瓦催蕾10天，出菇孔长出脑状原基，去掉覆瓦，温度控制在20°C，湿度控制在90%， C02浓度控制在900mg/kg，并给予1000LUX的光照。
[0050] (6)育菇 覆瓦催蕾16天，温度控制在24°C，湿度控制在85%左右，C02浓度控制在1000mg/kg，并 给予1000LUX的光照，直至采收。
[0051] 与木屑菌种相比，本菌种接种效率高8%，菌种最大生长距离短80%，培菌效率高 50%，且使用本菌种，菌包上下菌龄较为一致，利于菌包营养集中释放，首批菇产量可增加 15%;与液体菌种相比，本菌种适用于我国现有的菌种生产、检测及接种设备及技术人员，培 菌效率相当，但其定植、盖面较快，且菌种本身具有较好的抗菌、隔菌效果，同等情况下，可 降低培菌感染率5%。
[0052] 实施例3 一种灰树花三级菌种制作方法，包括如下步骤： (1) 一、二级菌种制作 一级菌种制作包括培养基配制，装试管，121°c灭菌30min，冷却，无菌接种，24°C和相对 湿度65%条件下培养至菌丝满管；所述培养基采用加富PDA培养基配方，具体为：麦粒50g+ 土豆200g混合煮汁、葡萄糖20g、琼脂20g、pH值自然、制作培养基1000mL ; 二级菌种制作包括培养基配制，装瓶，125°C灭菌90min，冷却，无菌接种，24°C和相对湿 度65%条件下培养至菌丝满瓶；所述培养基采用木屑培养基配方，具体为：杂木屑75%，麸皮 15%、玉米粉8%、熟石膏粉1%、石灰1%，含水量60%。
[0053] (2)三级菌种制作 I.培养基配方 分为木条培养基配方和麦粒培养基配方； 木条培养基配方为：按干重计，栗木木条（规格：〇. 4?0. 8cmX0. 4?0. 8cmX 10? 18cm，木条长度应比菌袋高度短1?5cm) 87%、麸皮10%、熟石膏粉3% ; 麦粒培养基配方为：按干重计，麦粒87%、细杂木屑（松、杉、柏、樟木屑除外，粒径 < 3mm) 10%、熟石膏粉3% ; Π.培养基制作 包括木条培养基制作和麦粒培养基制作； 木条培养基制作为：将栗木木条用1%石灰水浸泡预湿125h，捞出木条，并用清水洗净 不溶性石灰，浙干至无水流出。先将麸皮与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿木条上，混匀待用； 麦粒培养基制作为：将麦粒用1%石灰水浸泡预湿73h，捞出麦粒，并用清水洗净不溶 性石灰，浙干至无水流出；再将细杂木屑与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿麦粒上，再拌均匀，待 用。
[0054] III ·装袋 选用规格为13?16 cmX27?35 cmXO. 004?0.007cm的袋子，先将麦粒培养基在 袋底垫lcm厚的一层，再将木条培养基整理成50根的小捆，并用橡皮筋固定，然后坚直放到 袋内的一边，接着再将麦粒培养基填充到另一边，麦粒培养基高出木条培养基lcm并覆盖 木条培养基，整平麦粒培养基，然后用套环及盖封袋。
[0055] IV.灭菌 高压1. 49 X 105帕，126°C灭菌3. 6h，放入冷却室冷却至常温。
[0056] V ·接种 在接种箱内按无菌操作接入二级菌种。
[0057] VI·培菌 温度23°C，湿度65%，空气清新，无光培养30天，至菌丝长满菌种袋，期间每隔6d检杂 一次。
[0058] ΥΠ ·养菌 温度20. 5°C，湿度65%，空气清新，无光养菌23天，得到灰树花三级菌种。
[0059] (3)菌包制作 按配方配制灰树花培养料，装包，包中央打直径2. 0cm，深度大于木条长度2. 5cm的接 种孔，用套环封口，灭菌。
[0060] (4)接种培菌 将灭菌完毕的菌包冷却至室温，按无菌操作接入灰树花三级菌种，木条菌种插入接种 孔，麦粒菌种盖面(略大于套环即可)，放入培菌室培养28天至菌丝长满菌包。
[0061] (5)催蕾 包括瓦片制作和原基分化； I.瓦片制作 瓦片展平为半椭圆形，椭圆形长径为菌袋直径的4/5倍，短径为菌袋直径的7/16,短径 为长径的1/2,将椭圆弯为瓦片形，瓦片圆孤直径为菌袋直径的3/5,即将瓦片覆于菌袋上， 瓦片与菌袋间因为直径差会形成一空间，菌丝长满后经后熟培养6天，将菌包移入出菇房， 在菌袋侧壁菌丝浓密处开直径2. 3cm的圆孔作为出菇孔，将孔内培养料剐去2. 5mm，将菌 包平放于地面或架子上，在孔上盖瓦，温度控制在18°C，湿度控制在78%，C02浓度控制在 800mg/kg，并给予600LUX的光照； II .原基分化 覆瓦催蕾9天，出菇孔长出脑状原基，去掉覆瓦，温度控制在19°C，湿度控制在87%， C〇2浓度控制在600mg/kg以下，并给予600LUX的光照。
[0062] (6)育菇 覆瓦催蕾16天，温度控制在18°C，湿度控制在85%左右，C02浓度控制在900mg/kg，并 给予800LUX的光照，直至采收。
[0063] 与木屑菌种相比，本菌种接种效率高6%，菌种最大生长距离短100%，培菌效率高 40%，且使用本菌种，菌包上下菌龄较为一致，利于菌包营养集中释放，首批菇产量可增加 25%;与液体菌种相比，本菌种适用于我国现有的菌种生产、检测及接种设备及技术人员，培 菌效率相当，但其定植、盖面较快，且菌种本身具有较好的抗菌、隔菌效果，同等情况下，可 降低培菌感染率4%。
[0064] 实施例4 一种灰树花三级菌种制作方法，包括如下步骤： (1) 一、二级菌种制作 一级菌种制作包括培养基配制，装试管，121°C灭菌30min，冷却，无菌接种，24°C和相对 湿度65%条件下培养至菌丝满管；所述培养基采用加富PDA培养基配方，具体为：麦粒50g+ 土豆200g混合煮汁、葡萄糖20g、琼脂20g、pH值自然、制作培养基lOOOmL ; 二级菌种制作包括培养基配制，装瓶，125°C灭菌90min，冷却，无菌接种，24°C和相对湿 度65%条件下培养至菌丝满瓶；所述培养基采用木屑培养基配方，具体为：杂木屑75%，麸皮 15%、玉米粉8%、熟石膏粉1%、石灰1%，含水量60%。
[0065] (2)三级菌种制作 I.培养基配方 分为木条培养基配方和麦粒培养基配方； 木条培养基配方为：按干重计，栗木木条（规格：〇. 4?0. 8cmX0. 4?0. 8cmX 10? 18cm，木条长度应比菌袋高度短1?5cm) 85%、麸皮12. 5%、熟石膏粉2. 5% ; 麦粒培养基配方为：按干重计，麦粒85%、细杂木屑（松、杉、柏、樟木屑除外，粒径 彡3mm) 12. 5%、熟石膏粉2. 5% ; Π.培养基制作 包括木条培养基制作和麦粒培养基制作； 木条培养基制作为：将栗木木条用1%石灰水浸泡预湿127h，捞出木条，并用清水洗净 不溶性石灰，浙干至无水流出。先将麸皮与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿木条上，混匀待用； 麦粒培养基制作为：将麦粒用1%石灰水浸泡预湿75h，捞出麦粒，并用清水洗净不溶 性石灰，浙干至无水流出；再将细杂木屑与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿麦粒上，再拌均匀，待 用。
[0066] III ·装袋 选用规格为13?16 cmX27?35 cmXO. 004?0.007cm的袋子，先将麦粒培养基在 袋底垫1. 5cm厚的一层，再将木条培养基整理成60根的小捆，并用橡皮筋固定，然后坚直放 到袋内的一边，接着再将麦粒培养基填充到另一边，麦粒培养基高出木条培养基1. 5cm并 覆盖木条培养基，整平麦粒培养基，然后用套环及盖封袋。
[0067] IV.灭菌 高压1. 49X 105帕，126°C灭菌4h，放入冷却室冷却至常温。
[0068] V ·接种 在接种箱内按无菌操作接入二级菌种。
[0069] VI·培菌 温度23. 5°C，湿度66%，空气清新，无光培养28天，至菌丝长满菌种袋，期间每隔7d检 杂一次。
[0070] W.养菌 温度21 °C，湿度68%，空气清新，无光养菌24天，得到灰树花三级菌种。
[0071] (3)菌包制作 按配方配制灰树花培养料，装包，包中央打直径2. 2cm，深度大于木条长度2cm的接种 孔，用套环封口，灭菌。
[0072] (4)接种培菌 将灭菌完毕的菌包冷却至室温，按无菌操作接入灰树花三级菌种，木条菌种插入接种 孔，麦粒菌种盖面(略大于套环即可)，放入培菌室培养30天至菌丝长满菌包。
[0073] (5)催蕾 包括瓦片制作和原基分化； I.瓦片制作 瓦片展平为半椭圆形，椭圆形长径为菌袋直径的5/6倍，短径为菌袋直径的5/12,短 径为长径的5/12,将椭圆弯为瓦片形，瓦片圆孤直径为菌袋直径的3/4,即将瓦片覆于菌袋 上，瓦片与菌袋间因为直径差会形成一空间，菌丝长满后经后熟培养8天，将菌包移入出菇 房，在菌袋侧壁菌丝浓密处开直径2. 2cm的圆孔作为出菇孔，将孔内培养料剐去2. 3mm，将 菌包平放于地面或架子上，在孔上盖瓦，温度控制在18°C，湿度控制在76%，C02浓度控制 在1400mg/kg，并给予700LUX的光照； II .原基分化 覆瓦催蕾10天，出菇孔长出脑状原基，去掉覆瓦，温度控制在20°C，湿度控制在89%， C02浓度控制在1000mg/kg，并给予800LUX的光照。
[0074] (6)育菇 覆瓦催蕾15天，温度控制在20°C，湿度控制在85%左右，C02浓度控制在1200mg/kg，并 给予700LUX的光照，直至采收。
[0075] 与木屑菌种相比，本菌种接种效率高7%，菌种最大生长距离短70%，培菌效率高 60%，且使用本菌种，菌包上下菌龄较为一致，利于菌包营养集中释放，首批菇产量可增加 30%;与液体菌种相比，本菌种适用于我国现有的菌种生产、检测及接种设备及技术人员，培 菌效率相当，但其定植、盖面较快，且菌种本身具有较好的抗菌、隔菌效果，同等情况下，可 降低培菌感染率3%。
[0076] 实施例5 一种灰树花三级菌种制作方法，包括如下步骤： (1) 一、二级菌种制作 一级菌种制作包括培养基配制，装试管，121°c灭菌30min，冷却，无菌接种，24°C和相对 湿度65%条件下培养至菌丝满管；所述培养基采用加富PDA培养基配方，具体为：麦粒50g+ 土豆200g混合煮汁、葡萄糖20g、琼脂20g、pH值自然、制作培养基1000mL ; 二级菌种制作包括培养基配制，装瓶，125°C灭菌90min，冷却，无菌接种，24°C和相对湿 度65%条件下培养至菌丝满瓶；所述培养基采用木屑培养基配方，具体为：杂木屑75%，麸皮 15%、玉米粉8%、熟石膏粉1%、石灰1%，含水量60%。
[0077] (2)三级菌种制作 I.培养基配方 分为木条培养基配方和麦粒培养基配方； 木条培养基配方为：按干重计，栗木木条（规格：〇. 4?0. 8cmX0. 4?0. 8cmX 10? 18cm，木条长度应比菌袋高度短1?5cm) 84%、麸皮14%、熟石膏粉2% ; 麦粒培养基配方为：按干重计，麦粒84%、细杂木屑（松、杉、柏、樟木屑除外，粒径 彡3mm) 14%、熟石膏粉2% ; Π.培养基制作 包括木条培养基制作和麦粒培养基制作； 木条培养基制作为：将栗木木条用1%石灰水浸泡预湿128h，捞出木条，并用清水洗净 不溶性石灰，浙干至无水流出。先将麸皮与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿木条上，混匀待用； 麦粒培养基制作为：将麦粒用1%石灰水浸泡预湿78h，捞出麦粒，并用清水洗净不溶 性石灰，浙干至无水流出；再将细杂木屑与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿麦粒上，再拌均匀，待 用。
[0078] III ·装袋 选用规格为13?16 cmX27?35 cmXO. 004?0.007cm的袋子，先将麦粒培养基在 袋底垫2cm厚的一层，再将木条培养基整理成45根的小捆，并用橡皮筋固定，然后坚直放到 袋内的一边，接着再将麦粒培养基填充到另一边，麦粒培养基高出木条培养基lcm并覆盖 木条培养基，整平麦粒培养基，然后用套环及盖封袋。
[0079] IV.灭菌 高压1. 49 X 105帕，126°C灭菌3. 8h，放入冷却室冷却至常温。
[0080] V ·接种 在接种箱内按无菌操作接入二级菌种。
[0081] VI·培菌 温度22. 5°C，湿度69%，空气清新，无光培养32天，至菌丝长满菌种袋，期间每隔8d检 杂一次。
[0082] W.养菌 温度22°C，湿度70%，空气清新，无光养菌22天，得到灰树花三级菌种。
[0083] (3)菌包制作 按配方配制灰树花培养料，装包，包中央打直径1. 5cm，深度大于木条长度lcm的接种 孔，用套环封口，灭菌。
[0084] (4)接种培菌 将灭菌完毕的菌包冷却至室温，按无菌操作接入灰树花三级菌种，木条菌种插入接种 孔，麦粒菌种盖面(略大于套环即可)，放入培菌室培养26天至菌丝长满菌包。
[0085] (5)催蕾 包括瓦片制作和原基分化； I.瓦片制作 瓦片展平为半椭圆形，椭圆形长径为菌袋直径的1倍，短径为菌袋直径的1/2,短径 为长径的2/3,将椭圆弯为瓦片形，瓦片圆孤直径为菌袋直径的1/2,即将瓦片覆于菌袋上， 瓦片与菌袋间因为直径差会形成一空间，菌丝长满后经后熟培养9天，将菌包移入出菇房， 在菌袋侧壁菌丝浓密处开直径2. 4cm的圆孔作为出菇孔，将孔内培养料剐去2. 2mm，将菌 包平放于地面或架子上，在孔上盖瓦，温度控制在19°C，湿度控制在75%，C02浓度控制在 1500mg/kg，并给予400LUX的光照； II .原基分化 覆瓦催蕾8天，出菇孔长出脑状原基，去掉覆瓦，温度控制在18°C，湿度控制在86%， C02浓度控制在800mg/kg，并给予500LUX的光照。
[0086] (6)育菇 覆瓦催蕾15天，温度控制在22°C，湿度控制在85%左右，C02浓度控制在600mg/kg，并 给予900LUX的光照，直至采收。
[0087] 与木屑菌种相比，本菌种接种效率高6%，菌种最大生长距离短50%，培菌效率高 30%，且使用本菌种，菌包上下菌龄较为一致，利于菌包营养集中释放，首批菇产量可增加 20%;与液体菌种相比，本菌种适用于我国现有的菌种生产、检测及接种设备及技术人员，培 菌效率相当，但其定植、盖面较快，且菌种本身具有较好的抗菌、隔菌效果，同等情况下，可 降低培菌感染率3%。
[0088] 实施例6 一种灰树花三级菌种制作方法，包括如下步骤： (1) 一、二级菌种制作 一级菌种制作包括培养基配制，装试管，121°c灭菌30min，冷却，无菌接种，24°C和相对 湿度65%条件下培养至菌丝满管；所述培养基采用加富PDA培养基配方，具体为：麦粒50g+ 土豆200g混合煮汁、葡萄糖20g、琼脂20g、pH值自然、制作培养基1000mL ; 二级菌种制作包括培养基配制，装瓶，125°C灭菌90min，冷却，无菌接种，24°C和相对湿 度65%条件下培养至菌丝满瓶；所述培养基采用木屑培养基配方，具体为：杂木屑75%，麸皮 15%、玉米粉8%、熟石膏粉1%、石灰1%，含水量60%。
[0089] (2)三级菌种制作 I.培养基配方 分为木条培养基配方和麦粒培养基配方； 木条培养基配方为：按干重计，栗木木条（规格：〇. 4?0. 8cmX0. 4?0. 8cmX 10? 18cm，木条长度应比菌袋高度短1?5cm) 83%、麸皮16%、熟石膏粉1% ; 麦粒培养基配方为：按干重计，麦粒83%、细杂木屑（松、杉、柏、樟木屑除外，粒径 彡3mm) 16%、熟石膏粉1% ; Π.培养基制作 包括木条培养基制作和麦粒培养基制作； 木条培养基制作为：将栗木木条用1%石灰水浸泡预湿126h，捞出木条，并用清水洗净 不溶性石灰，浙干至无水流出。先将麸皮与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿木条上，混匀待用； 麦粒培养基制作为：将麦粒用1%石灰水浸泡预湿76h，捞出麦粒，并用清水洗净不溶 性石灰，浙干至无水流出；再将细杂木屑与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿麦粒上，再拌均匀，待 用。
[0090] III ·装袋 选用规格为13?16 cmX27?35 cmXO. 004?0.007cm的袋子，先将麦粒培养基在 袋底垫2. 5cm厚的一层，再将木条培养基整理成65根的小捆，并用橡皮筋固定，然后坚直放 到袋内的一边，接着再将麦粒培养基填充到另一边，麦粒培养基高出木条培养基2cm并覆 盖木条培养基，整平麦粒培养基，然后用套环及盖封袋。
[0091] IV.灭菌 高压1. 49 X 105帕，126°C灭菌3. 5h，放入冷却室冷却至常温。
[0092] V ·接种 在接种箱内按无菌操作接入二级菌种。
[0093] VI·培菌 温度24°C，湿度60%，空气清新，无光培养34天，至菌丝长满菌种袋，期间每隔9d检杂 一次。
[0094] W.养菌 温度20°C，湿度64%，空气清新，无光养菌25天，得到灰树花三级菌种。
[0095] (3)菌包制作 按配方配制灰树花培养料，装包，包中央打直径2. 5cm，深度大于木条长度1. 5cm的接 种孔，用套环封口，灭菌。
[0096] (4)接种培菌 将灭菌完毕的菌包冷却至室温，按无菌操作接入灰树花三级菌种，木条菌种插入接种 孔，麦粒菌种盖面(略大于套环即可)，放入培菌室培养25天至菌丝长满菌包。
[0097] (5)催蕾 包括瓦片制作和原基分化； I.瓦片制作 瓦片展平为半椭圆形，椭圆形长径为菌袋直径的6/7倍，短径为菌袋直径的13/32,短 径为长径的5/12,将椭圆弯为瓦片形，瓦片圆孤直径为菌袋直径的7/10,即将瓦片覆于菌 袋上，瓦片与菌袋间因为直径差会形成一空间，菌丝长满后经后熟培养7天，将菌包移入出 菇房，在菌袋侧壁菌丝浓密处开直径2cm的圆孔作为出菇孔，将孔内培养料剐去2mm，将菌 包平放于地面或架子上，在孔上盖瓦，温度控制在17°C，湿度控制在80%，C0 2浓度控制在 1000mg/kg，并给予600LUX的光照； II .原基分化 覆瓦催蕾9天，出菇孔长出脑状原基，去掉覆瓦，温度控制在19°C，湿度控制在90%， C02浓度控制在700mg/kg以下，并给予1000LUX的光照。
[0098] (6)育菇 覆瓦催蕾16天，温度控制在24°C，湿度控制在85%左右，C02浓度控制在800mg/kg，并 给予600LUX的光照，直至采收。
[0099] 与木屑菌种相比，本菌种接种效率高6%，菌种最大生长距离短60%，培菌效率高 50%，且使用本菌种，菌包上下菌龄较为一致，利于菌包营养集中释放，首批菇产量可增加 30%;与液体菌种相比，本菌种适用于我国现有的菌种生产、检测及接种设备及技术人员，培 菌效率相当，但其定植、盖面较快，且菌种本身具有较好的抗菌、隔菌效果，同等情况下，可 降低培菌感染率4%。
【权利要求】
1. 一种灰树花二级囷种制作方法，包括一、-级囷种制作，二级囷种制作，囷包制作，接 种培菌，催蕾，育菇，所述三级菌种制作包括培养基配方、培养基制作、装袋、灭菌、接种、培 菌、养菌，其特征在于： 所述培养基配方分为木条培养基配方和麦粒培养基配方，所述木条培养基配方为：按 干重计，栗木木条80%?88%、麸皮10%?18%、熟石膏粉0. 5%?3% ; 所述麦粒培养基配方为：按干重计，麦粒80%?88%、细杂木屑10%?18%、熟石膏粉 0· 5% ?3% ; 所述培养基制作包括木条培养基制作和麦粒培养基制作，所述木条培养基制作为：将 栗木木条用1°/。石灰水浸泡预湿120?130h，捞出木条，并用清水洗净不溶性石灰，浙干至无 水流出，再先将麸皮与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿木条上，混匀待用； 所述麦粒培养基制作为：将麦粒用1%石灰水浸泡预湿72?80h，捞出麦粒，并用清水 洗净不溶性石灰，浙干至无水流出；再将细杂木屑与熟石膏粉干拌均匀，撒到湿麦粒上，再 拌均匀，待用。
2. 根据权利要求1所述的灰树花三级菌种制作方法，其特征在于： 所述一级菌种制作包括培养基配制，装试管，121°C灭菌30min，冷却，无菌接种，24°C和 相对湿度65%条件下培养至菌丝满管；所述培养基采用加富PDA培养基，配方为：麦粒50g+ 土豆200g混合煮汁、葡萄糖20g、琼脂20g、pH值自然、制作培养基1000mL ; 所述二级菌种制作包括培养基配制，装瓶，125°C灭菌90min，冷却，无菌接种，24°C和相 对湿度65%条件下培养至菌丝满瓶；所述培养基采用木屑培养基，配方为：杂木屑75%，麸皮 15%、玉米粉8%、熟石膏粉1%、石灰1%，含水量60%。
3. 根据权利要求1所述的灰树花三级菌种制作方法，其特征在于所述的装袋操作为： 选用规格为13?16 cmX 27?35 cmX 0.004?0.007cm的袋子，先将麦粒培养基在袋底垫 0. 5?3cm厚的一层，再将木条培养基整理成40?70根的小捆，并用橡皮筋固定，然后坚直 放到袋内的一边，接着再将麦粒培养基填充到另一边，麦粒培养基高出木条培养基0. 5? 2cm并覆盖木条培养基，整平麦粒培养基，然后用套环及盖封袋。
4. 根据权利要求1所述的灰树花三级菌种制作方法，其特征在于所述的灭菌条件为： 高压1. 49X 105帕，126°C灭菌3. 5?4h，放入冷却室冷却至常温。
5. 根据权利要求1所述的灰树花三级菌种制作方法，其特征在于所述的接种操作为： 在接种箱内按无菌操作接入二级菌种。
6. 根据权利要求1所述的灰树花三级菌种制作方法，其特征在于所述的培菌方法为： 温度22?24°C，湿度60%?70%，空气清新，无光培养25?35天，至菌丝长满菌种袋，期间 每隔5?10d检杂一次；所述的养菌方法为：温度20?22°C，湿度60%?70%，空气清新，无 光养菌20?25天，得到灰树花三级菌种。
7. 根据权利要求2所述的灰树花三级菌种制作方法，其特征在于所述的菌包制作方法 为：按配方配制灰树花培养料，装包，包中央打直径1. 5?2. 5cm,深度大于木条长度0. 5? 3cm的接种孔，用套环封口，灭菌。
8. 根据权利要求1所述的灰树花三级菌种制作方法，其特征在于所述的接种培菌方 法为：将灭菌完毕的菌包冷却至室温，按无菌操作接入灰树花三级菌种，木条菌种插入接种 孔，麦粒菌种盖面，放入培菌室培养25-30天至菌丝长满菌包。
9. 根据权利要求1所述的灰树花三级菌种制作方法，其特征在于所述的催蕾包括瓦片 制作和原基分化，所述的瓦片制作方法为：瓦片展平为半椭圆形，椭圆形长径为菌袋直径的 3/4?1倍，短径为菌袋直径的3/8?1/2,短径为长径的1/3?2/3,将椭圆弯为瓦片形，瓦 片圆孤直径为菌袋直径的1/2?4/5,即将瓦片覆于菌袋上，瓦片与菌袋间因为直径差会形 成一空间，菌丝长满后经后熟培养5?10天，将菌包移入出菇房，在菌袋侧壁菌丝浓密处 开直径2?2. 5cm的圆孔作为出菇孔，将孔内培养料剐去2?3mm，将菌包平放于地面或架 子上，在孔上盖瓦，温度控制在17?19°C，湿度控制在75?80 %，C02浓度控制在1500mg/ kg以下，并给予200?800LUX的光照；所述的原基分化方法为：覆瓦催蕾8?10天，出燕 孔长出脑状原基，去掉覆瓦，温度控制在18?20°C，湿度控制在85?90%，C0 2浓度控制 在1000mg/kg以下，并给予400?1000LUX的光照。
10. 根据权利要求1所述的灰树花三级菌种制作方法，其特征在于所述的育菇方法为： 覆瓦催蕾15?16天，温度控制在16?24°C，湿度控制在85%左右，C0 2浓度控制在1500mg/ kg以下，并给予400?1000LUX的光照，直至采收。
【文档编号】A01G1/04GK104145711SQ201410156608
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年4月18日 优先权日:2014年4月18日
【发明者】胡汝晓, 王春晖, 彭运祥, 黄晓辉, 李新菊, 姜性坚 申请人:湖南省春华生物科技有限公司