一种鸡爪草组培快速养培方法
【专利摘要】本发明公开了一种鸡爪草组培快速培养方法，为低盐浓度的培养液，加有几种植物生长调节剂组合成一种培养基配方，使用本发明的组培快繁培养基，优株腋芽茎段为外植体，整个无菌培养过程只需一种培养基，培养过程简单易行。在培养基中继代培养和生根诱导同步进行，一次成苗。缩短鸡爪草组培苗育苗周期，有利于产业化生产。本发明还公开了鸡爪草一次成苗组培快繁方法，增殖培养过程为以芽繁芽方式，增殖系数高，无变异现象；生根过程中无愈伤组织形成，为皮部生根，移栽成活率高。
【专利说明】一种鸡爪草组培快速养培方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及组织培方法，尤其涉及一种鸡爪草组培快速养培方法。
【背景技术】
[0002]鸡爪草在《中国药典》各版中均有收录。鸡爪草具有抗炎、抗原生物、抗菌、抗过敏、抗肿瘤和细胞毒素、护肝以及消除耐药质粒等作用，临床上用于治疗鼻咽癌、鼻炎、结石症、头痛、跌打损伤以及面瘫等症。近年来，由于除草剂的广泛应用，造成产量锐减，加上鸡爪草全株药用，且单株产量低，鸡爪草遭到掠夺式地采集，野生自然资源受到严重破坏，市场价格一路上扬，是一味用途广泛，具有开发应用前景的中药品种。
[0003]采用组织培养方法能大量繁殖种苗，鸡爪草组培育苗鲜有报道，常规的组培育苗方法分继代增殖和生根诱导两个步骤，采用的培养基分继代培养基和生根培养基，育苗周期长。鸡爪草为一年生草本植物，全株药用，生根瓶苗可成丛栽种在苗床中，因此如能在同一种培养基中同步进行鸡爪草继代增殖和生根诱导，一次成苗，可节省成本及缩短组培苗育苗周期，有利于产业化生产。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种鸡爪草组培快速养培方法，在培养基中继代增殖和生根诱导同步进行，一次成苗，缩短鸡爪草组培育苗周期，有利于产业化生产。
[0005]本发明的技术方案如下:
一种鸡爪草组培快速养培方法，其特征在于包括以下步骤:
步骤1.外植体消毒:于晴天选取生长健壮的、无病虫害的鸡爪草植株，剪取茎段和顶芽作为外植体，剪去叶片，清洗，消毒；
步骤2.芽的诱导:将已经消毒好的外植体剪切成约2cm长段，每段留1-2个腋芽，然后斜插或垂直插在装有上述配制好的培养基的玻璃瓶中。外植体初次培养时，全暗培养10-15天腋芽萌动，再移至见光的地方培养；
步骤3.芽的增殖和生根培养:当腋芽萌动长至Icm时，切取腋芽接种在装有培养基的玻璃瓶中，进行芽的继代增殖和生根培养，培养室温度为26±2°C，光照12h.d-1，光照度1500-30001χο继代培养约20天芽长至2_3 cm,萌发出根系，30天长至3_5 Cm，根长2_3 cm,形成完整植株，30天后，再从一部份生根瓶苗完整植株上剪切无菌苗的腋芽茎段，进行培养，不断继代增殖，培养20天，增殖系数达到6.0-8.5，将另一部份生根瓶苗直接移至室外炼苗大棚在自然散射光照下培养5-7天；
步骤4.生根苗的移栽及管护:待生根小苗叶片舒展，叶色浓绿，苗茎深绿，茎轴伸长，苗高4cm时即可进行移栽，移栽时倒出培养基，取出小苗，用水洗净残留在根上的培养基，并截去过长的根系，保留2-2.5cm长，移栽于经0.2%高锰酸钾消毒过的苗床中，苗床基质为黄心土:细河沙:泥炭土，体积比为3:1:1，淋透水，加盖塑料薄膜拱棚及黑网，避免阳光直射，移栽一周后，揭开部分薄膜透气，每间隔7天交替喷施杀菌剂，施叶面肥和复合肥。
[0006]特别地，在步骤(1)中采用浓度0.1%的氯化汞消毒6-7分钟。
[0007]特别地，玻璃瓶是广口瓶。
[0008]与现有技术相比，本发明鸡爪草组培快速养培方法，在整个无菌培养过程只需一种培养基，该培养基中继代培养和生根诱导同步进行，一次成苗，缩短鸡爪草组培苗育苗周期，有利于产业化生产。
【具体实施方式】
[0009]实施例一
外植体消毒:于晴天选取生长健壮的、无病虫害的鸡爪草植株，剪取茎段和顶芽作为外植体，剪去叶片(留叶柄)，用加有少许洗洁精的水清洗1-2次，再用流水冲洗干净，然后在超净工作台上用0.1%的氯化汞消毒6-7分钟并摇动数次，最后用无菌水清洗4-5次。
[0010]芽的诱导:将已经消毒好的外植体剪切成约2cm长段，每段留1-2个腋芽，然后斜插或垂直插在装有上述实施例1配制好的培养基的广口瓶中。外植体初次培养时，全暗培养10-15天腋芽即可开始萌动，然后再移至见光的地方培养。
[0011]芽的增殖和生根培养:当腋芽萌动长至Icm左右时，切取腋芽接种在装有培养基的广口瓶中，进行芽的继代增殖和生根培养，培养室温度为(26±2) 0C ,光照12h.d-Ι，光照度1500-30001x。继 代培养约20天芽长至2-3 Cm，开始萌发出根系，30天长至3-5 Cm，根长2-3 cm,形成完整植株。30天后，再从一部份生根瓶苗完整植株上剪切无菌苗的腋芽茎段，进行培养，不断继代增殖，培养约20天，增殖系数达到6.0-8.5。将另一部份生根瓶苗直接移至室外炼苗大棚在自然散射光照下培养5-7天。
[0012]生根苗的移栽及管护:待生根小苗叶片舒展，叶色浓绿，苗茎深绿，茎轴伸长，苗高4cm左右时即可进行移栽。移栽时倒出培养基，取出小苗，用水洗净残留在根上的培养基，并截去过长的根系，保留2-2.5cm长，移栽于经0.2%高锰酸钾消毒过的苗床中，苗床基质体积比为黄心土:细河沙:泥炭土(3:1:1)，淋透水，加盖塑料薄膜拱棚及黑网，保持一定的温度和湿度，并要避免阳光直射，移栽一周后，可揭开部分薄膜透气，以后揭开薄膜的面积可逐渐加大，每间隔7天交替喷施杀菌剂，施叶面肥和复合肥。10-20天成活，成活率达92.5%。
[0013]实施例二
外植体消毒:于晴天选取生长健壮的、无病虫害的鸡爪草植株，剪取茎段和顶芽作为外植体，剪去叶片(留叶柄)，用加有少许洗洁精的水清洗1-2次，再用流水冲洗干净，然后在超净工作台上用0.1%的氯化汞消毒6-7分钟并摇动数次，最后用无菌水清洗4-5次。
[0014]芽的诱导:将已经消毒好的外植体剪切成约2cm长段，每段留1-2个腋芽，然后斜插或垂直插在装有上述实施例2配制好的培养基的广口瓶中。外植体初次培养时，全暗培养10-15天腋芽即可开始萌动，然后再移至见光的地方培养。
[0015]芽的增殖和生根培养:当腋芽萌动长至Icm左右时，切取腋芽接种在装有培养基的广口瓶中，进行芽的继代增殖和生根培养，培养室温度为(26±2) 0C ,光照12h.d-Ι，光照度1500-30001x。继代培养约20天芽长至2-3 Cm，开始萌发出根系，30天长至3-5 Cm，根长2-3 cm,形成完整植株。30天后，再从一部份生根瓶苗完整植株上剪切无菌苗的腋芽茎段，进行培养，不断继代增殖，培养约20天，增殖系数达到6.0-8.5。将另一部份生根瓶苗直接移至室外炼苗大棚在自然散射光照下培养5-7天。
[0016]生根苗的移栽及管护:待生根小苗叶片舒展，叶色浓绿，苗茎深绿，茎轴伸长，苗高4cm左右时即可进行移栽。移栽时倒出培养基，取出小苗，用水洗净残留在根上的培养基，并截去过长的根系，保留2-2.5cm长，移栽于经0.2%高锰酸钾消毒过的苗床中，苗床基质体积比为黄心土:细河沙:泥炭土(3:1:1)，淋透水，加盖塑料薄膜拱棚及黑网，保持一定的温度和湿度，并要避免阳光直射，移栽一周后，可揭开部分薄膜透气，以后揭开薄膜的面积可逐渐加大，每间隔7天交替喷施杀菌剂，施叶面肥和复合肥。10-20天成活，成活率达92.6%。
[0017]实施例三
植体消毒:于晴天选取生长健壮的、无病虫害的鸡爪草植株，剪取茎段和顶芽作为外植体，剪去叶片(留叶柄)，用加有少许洗洁精的水清洗1-2次,再用流水冲洗干净，然后在超净工作台上用0.1%的氯化汞消毒6-7分钟并摇动数次，最后用无菌水清洗4-5次。
[0018]芽的诱导:将已经消毒好的外植体剪切成约2cm长段，每段留1-2个腋芽，然后斜插或垂直插在装有上述实施例3配制好的培养基的广口瓶中。外植体初次培养时，全暗培养10-15天腋芽即可开始萌动，然后再移至见光的地方培养。
[0019]芽的增殖和生根培养:当腋芽萌动长至Icm左右时，切取腋芽接种在装有培养基的广口瓶中，进行芽的继代增殖和生根培养，培养室温度为(26±2) 0C ,光照12h.d-Ι，光照度1500-30001x。继代培养约20天芽长至2-3 Cm，开始萌发出根系，30天长至3-5 Cm，根长2-3 cm,形成完整植株。30天 后，再从一部份生根瓶苗完整植株上剪切无菌苗的腋芽茎段，进行培养，不断继代增殖，培养约20天，增殖系数达到6.0-8.5。将另一部份生根瓶苗直接移至室外炼苗大棚在自然散射光照下培养5-7天。
[0020]生根苗的移栽及管护:待生根小苗叶片舒展，叶色浓绿，苗茎深绿，茎轴伸长，苗高4cm左右时即可进行移栽。移栽时倒出培养基，取出小苗，用水洗净残留在根上的培养基，并截去过长的根系，保留2-2.5cm长，移栽于经0.2%高锰酸钾消毒过的苗床中，苗床基质体积比为黄心土:细河沙:泥炭土(3:1:1)，淋透水，加盖塑料薄膜拱棚及黑网，保持一定的温度和湿度，并要避免阳光直射，移栽一周后，可揭开部分薄膜透气，以后揭开薄膜的面积可逐渐加大，每间隔7天交替喷施杀菌剂，施叶面肥和复合肥。10-20天成活，成活率达94.1%。
【权利要求】
1.一种鸡爪草组培快速养培方法，其特征在于包括以下步骤: 步骤1.外植体消毒:于晴天选取生长健壮的、无病虫害的鸡爪草植株，剪取茎段和顶芽作为外植体，剪去叶片，清洗，消毒； 步骤2.芽的诱导:将已经消毒好的外植体剪切成约2cm长段，每段留1-2个腋芽，然后斜插或垂直插在装有上述配制好的培养基的玻璃瓶中，外植体初次培养时，全暗培养10-15天腋芽萌动，再移至见光的地方培养； 步骤3.芽的增殖和生根培养:当腋芽萌动长至Icm时，切取腋芽接种在装有培养基的玻璃瓶中，进行芽的继代增殖和生根培养，培养室温度为26±2°C，光照12h.d-1，光照度1500-30001x,继代培养约20天芽长至2_3 Cm，萌发出根系，30天长至3_5 Cm，根长2_3 Cm，形成完整植株，30天后，再从一部份生根瓶苗完整植株上剪切无菌苗的腋芽茎段，进行培养，不断继代增殖，培养20天，增殖系数达到6.0-8.5，将另一部份生根瓶苗直接移至室外炼苗大棚在自然散射光照下培养5-7天； 步骤4.生根苗的移栽及管护:待生根小苗叶片舒展，叶色浓绿，苗茎深绿，茎轴伸长，苗高4cm时即可进行移栽，移栽时倒出培养基，取出小苗，用水洗净残留在根上的培养基，并截去过长的根系，保留2-2.5cm长，移栽于经0.2%高锰酸钾消毒过的苗床中，苗床基质为黄心土:细河沙:泥炭土，体积比为3:1:1，淋透水，加盖塑料薄膜拱棚及黑网，避免阳光直射，移栽一周后，揭开部分薄膜透气，每间隔7天交替喷施杀菌剂，施叶面肥和复合肥。
2.根据权利要求1所述的鸡爪草组培快速养培方法，其特征在于:在步骤(1)中采用浓度0.1%的氯化汞消 毒6-7分钟。
3.根据权利要求1所述的鸡爪草组培快速养培方法，其特征在于:玻璃瓶是广口瓶。
【文档编号】A01H4/00GK104026020SQ201410286741
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月25日 优先权日:2014年6月25日
【发明者】李永锋, 傅汝毅, 陈国勇, 陶玲云, 蓝文苑 申请人:广西博士海意信息科技有限公司