本发明公开了一种农作物杀菌剂的制备方法，属于杀菌剂制备技术领域。
背景技术：
我国农作物种类多，分布范围广，病害的种类相对较多。据调查，全国农作物的各种病害有2000余种，发生严重的有700多种，每年农作物病害造成的损失是巨大的，严重地影响了农业的发展。虽然人们己开发研究出了多种防治病害的药剂，并取得了良好的防治效果，但是大部分化学农药会带来较大的负面作用，尤其是农药对人和动物的伤害以及对自然环境的污染等问题，对人类的健康和生态环境构成了较大的威胁，如农药中毒以及环境污染等一系列问题己屡见不鲜。人与自然和谐发展，人类在自身发展的同时必须保护自身赖以生存的自然环境，这是人类在进入新世纪所面临的一大严峻考验。因此，开发具有高效低毒、环境友好型的绿色农药是农药研究领域重要发展方向。
使用现代杀菌剂防治植物病害是保证农作物高产、稳产的重要措施之一。但是随着高效、内吸、选择性强的现代杀菌剂被开发和广泛应用，杀菌剂抗性越来越严重和普遍，常导致植物病害化学防治失败，农业生产遭受巨大损失，同时杀菌剂广谱性较差、防治效果不佳，使用过程中易造成严重的环境污染和资源的过度浪费的问题也日渐突出。
技术实现要素：
本发明主要解决的技术问题：针对现有的农作物杀菌剂广谱性较差，防治效果不佳，长期施用容易导致病原菌抗性增强、施药量的成倍增加，且使用过程中易造成严重的环境污染的问题，提供一种农作物杀菌剂的制备方法，该方法首先将多粘芽孢杆菌接种到培养基中培养，将所得培养物离心处理，收集下层菌种与土豆泥、蔗糖、黄豆饼粉等混合发酵，经高温灭菌后收集发酵液离心处理并收集上清液，再将丁香、肉桂和芦荟粉碎后与黄酒混合并超声提取处理，最后将所得提取物与上清液、鱼精蛋白、桐油等搅拌并包装好，即可得到农作物杀菌剂，多粘芽孢杆菌发酵产生的抗菌物质可以通过位点竞争和诱导抗性的方式，杀灭和控制病原菌，鱼精蛋白具有很强的杀菌能力和广谱抑菌性，本发明制得的农作物杀菌剂使用方便，可以采用浸种、灌根、喷雾处理等多种方式，且杀菌剂杀菌、防治效果显著，有效降低了杀菌剂的使用量及抗性的发生与发展，并且能够扩大杀菌谱，在减少用药成本的同时，降低了对环境的影响，具有广阔的应用空间。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
（1）依次称取10～20g葡萄糖、5～8g蛋白胨、3～5g牛肉膏和0.5～0.8g氯化钠和800～1000mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合均匀后，转移至灭菌罐中，在100～110℃下高温灭菌5～10min，制得培养基，随后按8～12%接种量将多粘芽孢杆菌接种到培养基中，并将培养基置于摇床中，在35～45℃、120～140r/min下培养12～24h；
（2）培养结束，将培养物置于离心机中，在1000～1200r/min下离心30～40min，收集下层菌种，再依次称取30～40g土豆泥、10～15g蔗糖、3～5g黄豆饼粉、1～3g磷酸氢二钠、0.3～0.5g硫酸镁和800～1000mL去离子水，搅拌混合后置于发酵罐中，取6～8g上述下层菌种加入到发酵罐中，在25～35℃下发酵3～4天，发酵结束，升温至100～110℃高温灭菌5～10min，随后收集发酵液，并置于离心机中，在5000～6000r/min下离心30～40min，收集上清液，备用；
（3）称取10～20g丁香、6～8g肉桂和8～12g芦荟加入到粉碎机中进行粉碎，随后加入到烧杯中，并加入100～200mL黄酒，搅拌混合均匀后，置于超声波振荡仪中，在180～200W下超声提取1～2h，随后过滤，收集滤液，并减压蒸馏至原体积的1/2，得到提取物；
（4）按重量份数计，称取80～90份步骤（2）备用的上清液、20～30份上述提取物、10～15份鱼精蛋白、6～8份十二烷基二甲基苄基氯化铵、10～20份桐油、3～5份单硬脂酸甘油酯、1～3份蓖麻油聚氧乙烯醚、30～40份柠檬酸和3～5份壳聚糖，搅拌20～30min后，包装，即可得到农作物杀菌剂。
本发明的应用方法是：按质量比0.5：1000～0.8：1000将本发明制得的杀菌剂与清水混合均匀，随后利用喷雾机对水稻叶面喷雾处理，杀菌剂每亩作物施用量为10～20g即可。经检测，本发明制得的农作物杀菌剂对病原菌菌丝生长的抑制率达95%以上，施用于叶面后药效持续时间长达30～40天，对农作物灌根杀菌其药效可长达4～6个月，连续施用1～3个月后，作物发病率减少80～90%，防治效果明显。
本发明的有益效果是：
（1）本发明制得的农作物杀菌剂使用方便，杀菌效果显著，适用于各种农作物的根系，同时也可以施用于农作物叶面及收获储藏期；
（2）本发明制得的农作物具有广谱杀菌的作用，使得一种杀菌剂能同时防治多种植物病害，提供了一种快捷、有效的防治手段，且本发明有效较少了杀菌剂的用量，在降低病原菌的抗药性的同时避免了杀菌剂对环境造成的污染。
具体实施方式
首先依次称取10～20g葡萄糖、5～8g蛋白胨、3～5g牛肉膏和0.5～0.8g氯化钠和800～1000mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合均匀后，转移至灭菌罐中，在100～110℃下高温灭菌5～10min，制得培养基，随后按8～12%接种量将多粘芽孢杆菌接种到培养基中，并将培养基置于摇床中，在35～45℃、120～140r/min下培养12～24h；待培养结束，将培养物置于离心机中，在1000～1200r/min下离心30～40min，收集下层菌种，再依次称取30～40g土豆泥、10～15g蔗糖、3～5g黄豆饼粉、1～3g磷酸氢二钠、0.3～0.5g硫酸镁和800～1000mL去离子水，搅拌混合后置于发酵罐中，取6～8g上述下层菌种加入到发酵罐中，在25～35℃下发酵3～4天，发酵结束，升温至100～110℃高温灭菌5～10min，随后收集发酵液，并置于离心机中，在5000～6000r/min下离心30～40min，收集上清液，备用；再称取10～20g丁香、6～8g肉桂和8～12g芦荟加入到粉碎机中进行粉碎，随后加入到烧杯中，并加入100～200mL黄酒，搅拌混合均匀后，置于超声波振荡仪中，在180～200W下超声提取1～2h，随后过滤，收集滤液，并减压蒸馏至原体积的1/2，得到提取物；最后按重量份数计，称取80～90份上述步骤备用的上清液、20～30份上述提取物、10～15份鱼精蛋白、6～8份十二烷基二甲基苄基氯化铵、10～20份桐油、3～5份单硬脂酸甘油酯、1～3份蓖麻油聚氧乙烯醚、30～40份柠檬酸和3～5份壳聚糖，搅拌20～30min后，包装，即可得到农作物杀菌剂。
实例1
首先依次称取10g葡萄糖、5g蛋白胨、3g牛肉膏和0.5g氯化钠和800mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合均匀后，转移至灭菌罐中，在100℃下高温灭菌5min，制得培养基，随后按8%接种量将多粘芽孢杆菌接种到培养基中，并将培养基置于摇床中，在35℃、120r/min下培养12h；待培养结束，将培养物置于离心机中，在1000r/min下离心30min，收集下层菌种，再依次称取30g土豆泥、10g蔗糖、3g黄豆饼粉、1g磷酸氢二钠、0.3g硫酸镁和800mL去离子水，搅拌混合后置于发酵罐中，取6g上述下层菌种加入到发酵罐中，在25℃下发酵3天，发酵结束，升温至100℃高温灭菌5min，随后收集发酵液，并置于离心机中，在5000r/min下离心30min，收集上清液，备用；再称取10g丁香、6g肉桂和8g芦荟加入到粉碎机中进行粉碎，随后加入到烧杯中，并加入100mL黄酒，搅拌混合均匀后，置于超声波振荡仪中，在180W下超声提取1h，随后过滤，收集滤液，并减压蒸馏至原体积的1/2，得到提取物；最后按重量份数计，称取80份上述步骤备用的上清液、20份上述提取物、10份鱼精蛋白、6份十二烷基二甲基苄基氯化铵、10份桐油、3份单硬脂酸甘油酯、1份蓖麻油聚氧乙烯醚、30份柠檬酸和3份壳聚糖，搅拌20min后，包装，即可得到农作物杀菌剂。
本实例操作简便，使用时，按质量比0.5：1000将本发明制得的杀菌剂与清水混合均匀，随后利用喷雾机对水稻叶面喷雾处理，杀菌剂每亩作物施用量为10g即可。经检测，本发明制得的农作物杀菌剂对病原菌菌丝生长的抑制率达97%，施用于叶面后药效持续时间长达30天，对农作物灌根杀菌其药效可长达4个月，连续施用1个月后，作物发病率减少80%，防治效果明显。
实例2
首先依次称取15g葡萄糖、7g蛋白胨、4g牛肉膏和0.7g氯化钠和900mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合均匀后，转移至灭菌罐中，在105℃下高温灭菌8min，制得培养基，随后按10%接种量将多粘芽孢杆菌接种到培养基中，并将培养基置于摇床中，在40℃、130r/min下培养18h；待培养结束，将培养物置于离心机中，在1100r/min下离心35min，收集下层菌种，再依次称取35g土豆泥、13g蔗糖、4g黄豆饼粉、2g磷酸氢二钠、0.4g硫酸镁和900mL去离子水，搅拌混合后置于发酵罐中，取7g上述下层菌种加入到发酵罐中，在30℃下发酵3.5天，发酵结束，升温至105℃高温灭菌8min，随后收集发酵液，并置于离心机中，在5500r/min下离心35min，收集上清液，备用；再称取15g丁香、7g肉桂和10g芦荟加入到粉碎机中进行粉碎，随后加入到烧杯中，并加入150mL黄酒，搅拌混合均匀后，置于超声波振荡仪中，在190W下超声提取1.5h，随后过滤，收集滤液，并减压蒸馏至原体积的1/2，得到提取物；最后按重量份数计，称取85份上述步骤备用的上清液、25份上述提取物、13份鱼精蛋白、7份十二烷基二甲基苄基氯化铵、15份桐油、4份单硬脂酸甘油酯、2份蓖麻油聚氧乙烯醚、35份柠檬酸和4份壳聚糖，搅拌25min后，包装，即可得到农作物杀菌剂。
本实例操作简便，使用时，按质量比0.7：1000将本发明制得的杀菌剂与清水混合均匀，随后利用喷雾机对水稻叶面喷雾处理，杀菌剂每亩作物施用量为15g即可。经检测，本发明制得的农作物杀菌剂对病原菌菌丝生长的抑制率达98%，施用于叶面后药效持续时间长达35天，对农作物灌根杀菌其药效可长达5个月，连续施用2个月后，作物发病率减少85%，防治效果明显。
实例3
首先依次称取20g葡萄糖、8g蛋白胨、5g牛肉膏和0.8g氯化钠和1000mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合均匀后，转移至灭菌罐中，在110℃下高温灭菌10min，制得培养基，随后按12%接种量将多粘芽孢杆菌接种到培养基中，并将培养基置于摇床中，在45℃、140r/min下培养24h；待培养结束，将培养物置于离心机中，在1200r/min下离心40min，收集下层菌种，再依次称取40g土豆泥、15g蔗糖、5g黄豆饼粉、3g磷酸氢二钠、0.5g硫酸镁和1000mL去离子水，搅拌混合后置于发酵罐中，取8g上述下层菌种加入到发酵罐中，在35℃下发酵4天，发酵结束，升温至110℃高温灭菌10min，随后收集发酵液，并置于离心机中，在6000r/min下离心40min，收集上清液，备用；再称取20g丁香、8g肉桂和12g芦荟加入到粉碎机中进行粉碎，随后加入到烧杯中，并加入200mL黄酒，搅拌混合均匀后，置于超声波振荡仪中，在200W下超声提取2h，随后过滤，收集滤液，并减压蒸馏至原体积的1/2，得到提取物；最后按重量份数计，称取90份上述步骤备用的上清液、30份上述提取物、15份鱼精蛋白、8份十二烷基二甲基苄基氯化铵、20份桐油、5份单硬脂酸甘油酯、3份蓖麻油聚氧乙烯醚、40份柠檬酸和5份壳聚糖，搅拌30min后，包装，即可得到农作物杀菌剂。
本实例操作简便，使用时，按质量比0.8：1000将本发明制得的杀菌剂与清水混合均匀，随后利用喷雾机对水稻叶面喷雾处理，杀菌剂每亩作物施用量为20g即可。经检测，本发明制得的农作物杀菌剂对病原菌菌丝生长的抑制率达98%，施用于叶面后药效持续时间长达40天，对农作物灌根杀菌其药效可长达6个月，连续施用3个月后，作物发病率减少90%，防治效果明显。