1.黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法,其特征是包括以下步骤:
1)、取材:
选用黄精叶钩吻的根状茎的不定芽作为外植体;
2)、不定芽的消毒:
将步骤1)所得的根状茎上的不定芽充分洗涤,然后在超净台上操作,先用75%酒精浸泡处理20~30sec,无菌水冲洗后,用含0.1%升汞灭菌8~10min,无菌水冲洗3~5次;
3)、不定芽的启动培养:
将消毒后的不定芽剥离外围的叶片后接种到启动培养基上,进行不定芽生长及丛生芽的诱导;
所述启动培养基为MS+BA0.6~3mg/L+NAA0~0.2mg/L+蔗糖20~30g/l+琼脂5~8g/l,pH为5.6~5.8;
诱导培养条件为:16小时光照,光照强度30~45μmolm-2s-1,温度为25±1℃;8小时暗培养,温度为21±1℃;上述光照和暗培养交替进行;
当启动培养基上的不定芽的基部出现至少3个丛生芽时,结束启动培养;
4)、不定芽的快速扩增:
将步骤3)所得的丛生芽分割成含1新芽的芽丛后转接于增殖培养基上进行培养,增殖培养基为MS+BA 0.6~3mg/L+NAA 0.2~0.5mg/L+KT 0~1.0mg/L+2,4-D 0~0.5mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20~30g/L+琼脂5~8g/L,pH为5.6~5.8;
培养条件为:16小时光照,光照强度30~45μmolm-2s-1,温度为25±1℃;8小时暗培养,温度为21±1℃;上述光照和暗培养交替进行;
待增殖培养基上的新芽至少长出3个丛生芽时,结束此步骤的培养;
5)、不定芽的伸长及生根培养:
将步骤4)所得的丛生芽切割成含2~3株为一丛的不定芽丛转移到生根/伸长培养基上进行培养,生根/伸长培养基为MS+BA0.6mg/L+NAA0.5mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20~30g/L+琼脂5~8g/L,pH为5.6~5.8;
培养条件为:16小时光照,光照强度30~45μmoLm-2s-1,温度为25±1℃;8小时暗培养,温度为20±1℃;上述光照和暗培养交替进行;
当不定芽丛长到4.0~6.0cm高、且基部有至少5条根时,结束此步骤的培养;
6)、将步骤5)所得的已生根的植株取出,得可出瓶种植的种苗。
2.根据权利要求1所述的黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法,其特征是:
以步骤4)所得的丛生芽替代步骤3)所得的丛生芽,重复进行步骤4)的不定芽的快速扩增;待增殖培养基上的新芽长出至少3个丛生芽时,将其进行分割。
3.根据权利要求1或2所述的黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法,其特征是:
所述步骤5)为:
将不定芽丛转移到生根/伸长培养基上,经过28~35天的培养,不定芽既能伸长生长,同时在植株的基部产生根,7~14天可诱导形成根,再培养后形成发达的根系。
4.根据权利要求1或2所述的黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法,其特征是:
将步骤6)所得的装有生根幼苗的培养容器置于自然温度、光照的环境下锻炼5~7天,然后打开瓶盖,放置1~2天后,将植株基部的生根/伸长培养基洗净,将苗移栽到河沙:泥炭土为1:1的混合基质培养20~35天,开始的10~14天温度为23~25℃,相对湿度为70~80%。
5.根据权利要求1或2所述的黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法,其特征是:
启动培养基为:MS+BA 2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20~30g/L+琼脂5~8g/L,pH为5.6~5.8;
增殖培养基为以下任意一种:
MS+BA3mg/L+NAA0.2mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20~30g/L+琼脂5~8g/L,pH为5.6~5.8;
MS+BA2mg/L+NAA 0.2mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20~30g/L+琼脂5~8g/L,pH为5.6~5.8;
MS+BA2mg/L+KT 1mg/L+NAA 0.2mg/L+2,4-D 0.5mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20~30g/L+琼脂5~8g/L,pH为5.6~5.8。