一种栽培木耳的抑菌培养基及其栽培方法与流程

本发明属于食用菌的技术领域，尤其涉及一种栽培木耳的抑菌培养基及其栽培方法。

背景技术：

木耳，别名黑木耳、光木耳。真菌学分类属担子菌纲，木耳目，木耳科。色泽黑褐，质地柔软，味道鲜美，营养丰富。木耳蛋白质的含量是牛奶的六倍，钙、磷、铁纤维素含量也不少，此外，还有甘露聚糖、葡萄糖、木糖等醣类，及卵磷脂、麦角甾醇和维生素c等，蛋白质丰富，而且富含多种维生素和矿物质，特别是铁元素含量极高，每100克干木耳含铁达185毫克，是肉类的100倍，黑木耳是缺铁性贫血患者的极佳食品。木耳可素可荤，不但为中国菜肴大添风采，而且能养血驻颜，令人肌肤红润，容光焕发，并可防治缺铁性贫血等，具有很多药用功效，如木耳具有预防动脉粥样硬化的功效；黑木耳还有润肠解毒功能；黑木耳中的腺嘌呤核苷有显著的抑制血栓形成的作用，因此，还是中老年人的优良保健食品；黑木耳对胆结石、肾结石、膀胱结石、粪石等内源性异物也有比较显著的化解功能；黑木耳还含有多种矿物质，能对各种结石产生强烈的化学反应，剥脱、分化、侵蚀结石，使结石缩小，排出。黑木耳是我国传统的出口商品，目前已经实现规模化、袋料化栽培。但由于粗放的栽培方式、缺乏科学、配套杂菌污染措施，使得杂菌污染危害增大，成为黑木耳高产、稳产的重要限制因素。所以，有效地控制黑木耳杂菌的危害是实现黑木耳高产、稳产、优质的重要环节。

传统栽培木耳的栽培基质都是以棉籽壳、玉米芯、米糠、稻草等材料为主。本领域的技术人员通过对影响木耳品质、产量等因素的研究，发现不同的栽培基质和栽培方法对木耳的品质和产量有很大影响。例如中国专利cn201610613832.x公开了一种木耳培养基及其栽培木耳方法，包括以下重量份配比的原料：松木屑50～60份、木耳渣10～20份、木薯渣10～20份、红薯渣10～20份、鱼腥草1～3份、艾草4～6份、石膏1～2份，该发明具有营养丰富、栽培出的木耳质量高的特点。

艾纳香为菊科艾纳香属blumeabalsamiferadc，苗药名档窝凯diangdvobbvid植物的新鲜或干燥地上部分，别名大风艾、冰片艾、家风艾等，是我国著名的黎族药物，黎药名“娜龙”，《开宝本草》、《本草纲目》和《岭南采药录》等本草典籍均有记载，具有祛风除湿、活血散瘀、开窍醒神、清热止痛的功效，临床上用于治疗风寒感冒、寒湿泻痢、腹痛肠鸣、风湿痹痛、跌打伤痛等。艾纳香是提取天然左旋冰片(又称艾片)的主要植物，天然冰片气味清香，是一种高级香料，同时还是一味名贵的中药材，具有清热解毒、消炎止痛、开窍醒神等功效，其药用价值远大于合成冰片；因艾纳香在我国分布广泛、产量丰富，市场地位逐年提升。

艾渣是艾纳香经加热升华提取艾片后的残渣，经研究表明，艾渣中含有鞣质、蒽醌类化合物、多糖和皂苷类化合物等多种物质，其中总蒽醌3.176mg/g、总黄酮12.853mg/g、总有机酸18.715mg/g、总皂苷9.512mg/g和总多糖13.120mg/g(王秋萍,何珺,陈伟,马海霞,吴竹.艾渣中有效成分的定性检测及含量测定[j].云南农业大学学报(自然科学),2016,v31(4):751～756)。若不对艾渣加以回收利用而是被作为工业废物处理掉，这不仅对药物资源造成极大的浪费，同时对环境也造成极大污染。

本发明人在对木耳栽培研究时，尝试用药厂提取艾粉后的药渣进行木耳的栽培，惊奇地发现这种新的培育基质，不仅使得木耳的生长、质量、产量等均获得理想的效果，同时木耳多糖、黄酮类、有机酸类等有效成分的含量亦得到提高，另外还由于药渣与传统的培养基质棉籽壳、棉籽壳相互搭配，抑制了培养基中细菌活性，促进了木耳生长，提升了木耳的药用价值。

技术实现要素：

本发明的第一目的是提供一种有抑菌作用的木耳栽培培养基，所栽培获得的木耳出菇率高、产量大。

本发明的第二目的是提供该木耳的栽培方法。

具体来说，本发明提供了如下的技术方案：

本发明的木耳栽培的培养基，按质量百分比计包括如下原料：棉籽壳25～50％、艾渣35～60％、麦麸5～20％、石膏粉0.5～1.5％、石灰粉0.5～1.5％、蔗糖0.5～1.5％

本发明在基质中加入了艾渣，艾渣不仅能够为培养基质增添营养成分和活性成分，天然的植物有机酸具有抑菌活性，促进木耳生长，提高产量；在艾渣基质的促进下，生长出来的木耳含有一定量的多糖和黄酮类物质，具有抗病毒、增强免疫力的功效。艾渣与麦麸、蔗糖等其他基质搭配，原料中的氨基酸、微量元素提供了丰富的可溶性营养成分，供给和控制初期生长，且当菌体丰富后，分解利用慢效营养，形成持续性生长。

优选的，本发明的原料为：棉籽壳35～40％、艾渣40～50％、麦麸8～15％、石膏粉0.8～1.2％、石灰粉0.8～1.2％、蔗糖0.8～1.2％。

更优选的，本发明的原料为：棉籽壳44％、艾渣43％、麦麸10％、石膏粉1％、石灰粉1％、蔗糖1％。

本发明制备木耳培养基的方法，包括如下步骤：

(1)艾渣的处理：将艾渣用粉碎机打粉，过筛，所得艾渣颗粒粒径为1～2mm；

(2)配料：按处方重量份称取各基质原料，加水搅拌均匀即可；

(3)装料：将混匀的培养基装于聚丙烯菌袋内，装料，压紧，包扎；

(4)灭菌：将菌包放于灭菌锅内，加热灭菌，即得艾渣抑菌培养基菌袋。

所述步骤(4)中所述的灭菌温度为121℃，灭菌时间为1h。

一种利用艾渣栽培木耳的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a、菌种活化：

将木耳菌种转接于pda斜面培养基上，26℃培养10～15天，同样处理2～3次后，待菌种活力恢复；

b、生产种培养基和生产种的制备：

将玉米、麦麸、蔗糖和石膏粉加水后混匀，裝于玻璃瓶或聚丙烯菌袋内，压紧，包扎，121℃高压灭菌45～60分钟，即得生产种培养基；

生产种培养基冷却后，无菌操作下接入斜面菌种，封口，于24～26℃培养7～10天，待菌丝长满、长透培养基后即得生产种；

c、接种：

将1cm³步骤b所得生产种接入艾渣抑菌培养基菌袋中的生产种，盖上报纸，包扎袋口；

d、发菌、出菇

将步骤c中接种后的菌包放于培养室内，叠放5～7层，25℃下进行发菌、出菇培养。

进一步地，所述步骤a中的pda基质配方为：土豆180～220份、葡萄糖15～25份、琼脂糖15～25份、水900～1100份。

所述步骤b中的生产种培养基配方以质量比计为玉米85～95％、麦麸8～12％、蔗糖0.8～1.2％、石膏粉0.4～0.6％。

所述步骤c中接种在无菌操作下进行。

所述步骤d中的发菌，出菇前的培养条件是温度为25～30℃，在黑暗下进行；出菇后的培养条件为温度：25～30℃，湿度：60％～70％，使用日光灯作为光源，光照时间为8:00～20：00/d，保持培养室空气流通。

与现有技术相比，本发明的显著优点为：

(1)本发明利用的艾渣有丰富的有机酸，有机酸具有抗菌活性的天然分子，能抑制培养基中有害细菌的滋生，对植物安全，不会对植物产生伤害，可有效防止在植物组织培养繁殖过程中的细菌污染。本发明在培养基质中加入艾渣能够有效降低细菌污染，降低污染率，提高成苗率，降低生产成本，本方法使用的抑菌物质取材方便，操作简单，可广泛应用于植物工厂的菌种培植。艾渣中的有机酸不仅有抑菌作用，还具有突出的药用功效，被誉为抗生素的非药物性替代品，对木耳的健康和生长都有积极作用。

(2)本发明在基质中加入了艾渣，艾渣不仅能够为培养基质增添营养成分和活性成分，天然的植物有机酸具有抑菌活性，促进木耳生长，提高产量；在艾渣基质的促进下，生长出来的木耳含有一定量的多糖和黄酮类物质，具有抗病毒、增强免疫力的功效。

(3)本发明利用的栽培基质原料来源于药厂提取艾片后的药渣，对废弃物作资源化利用，减少了工业废物造成的污染，达到了物尽其用，变废为宝的目的，有利于保护生态环境，降低生产成本，提高经济效益。

附图说明

图1为艾渣栽培木耳的栽培流程图

图2为木耳出菇效果图

具体实施方式

为了使本领域普通技术人员更好的理解本发明，下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但本发明并不限于下述的实施例。

实施例1：

培养基原料组分：棉籽壳44％、艾渣43％、麦麸10％、石膏粉1％、石灰粉1％、蔗糖1％。

木耳培养基的制备方法，包括如下步骤：

(1)艾渣的处理：将艾渣用粉碎机打粉，过筛，筛网直径为1×5cm，所得艾渣颗粒粒径为2mm。

(2)配料：按处方重量份称取各基质原料，加水搅拌均匀，加水量为湿料用手抓起、握紧时有水滴出(不成线)即可。

(3)装料：将混匀的培养基装于聚丙烯菌袋内，装料，装料量为80％，压紧，聚丙烯菌袋口穿过菌环、反转、报纸封口、塑料绳包扎。

(4)灭菌：将菌包整齐码放于灭菌锅内，预留20％空间，加热灭菌，加热温度为121℃，灭菌时间为1h。保证灭菌要彻底，但不能时间太长，以免培养基原料分解、营养损失。

木耳的栽培方法，包括如下步骤：

a、菌种活化：

pda基质配方为：土豆200g、葡萄糖20g、琼脂糖20g、水1l，调节ph5～6。

将试管菌种转接于pda斜面培养基上，26℃培养15天，同样处理3次后，待菌种活力恢复后即可。

b、生产种的制备：

生产种培养基原料组分：玉米89％、麦麸10％、蔗糖1％、石膏粉0.5％，调节ph5～6。

按生产种培养基配方配置培养基组分，加水后混匀，加水量为湿料用手抓起、握紧时有水滴出(不成线)即可。裝于玻璃瓶或聚丙烯菌袋内，装料量70％左右，压紧，聚丙烯菌袋加菌环、报纸封口、塑料绳包扎；用121℃高压灭菌60分钟，即可。培养基冷却后、无菌操作用接种针接入斜面菌种，封口，于26℃培养10天，待菌丝长满、长透培养基后即可作为生产种使用。

c、接种：

取灭菌后放冷的菌袋进行接种，接种在无菌操作下进行。需两人配合进行，一人解开菌包口，一人用接种铲挑取1cm³的生产种，快速接入生产菌包内，盖上报纸，包扎袋口。

d、发菌

将接种后的菌包码放于培养室内，一般7层，25℃下进行培养，做好菌丝生长和子实体生长管理，特别是温度、湿度、光照和通气量。菌丝生长的温度范围28℃，适宜25℃。水分：在菌丝生长阶段要求培养基中的含水量为65％，空气相对湿度在70％，在子实体生长发育阶段，空气相对湿度应控制在95％。通气：空气中co2含量对子实体生长发育有很大影响，一般要求每天10小时的间歇通风。保证发酵室内的新鲜空气。光照对子实体的形成有促进作用，在子实体生长期间每天进行12小时的光照培养。开孔：待菌丝体长满菌袋时，去掉木耳的封口报纸，对木耳的菌袋进行开孔，保证木耳能从孔中长出。

实施例2：

培养基原料组分：棉籽壳25.5％、艾渣60％、麦麸10％、石膏粉1.5％、石灰粉1.5％、蔗糖1.5％。

木耳培养基的制备方法，包括如下步骤：

(1)艾渣的处理：将艾渣用粉碎机打粉，过筛，筛网直径为1×5cm，所得艾渣颗粒粒径为1mm。

(2)配料：按处方重量份称取各基质原料，加水搅拌均匀，加水量为湿料用手抓起、握紧时有水滴出(不成线)即可。

(3)装料：将混匀的培养基装于聚丙烯菌袋内，装料，装料量为80％，压紧，聚丙烯菌袋口穿过菌环、反转、报纸封口、塑料绳包扎。

(4)灭菌：将菌包整齐码放于灭菌锅内，预留20％空间，加热灭菌，加热温度为121℃，灭菌时间为1h。保证灭菌要彻底，但不能时间太长，以免培养基原料分解、营养损失。

木耳的栽培方法，包括如下步骤：

a、菌种活化：

pda基质原料组分：土豆180g、葡萄糖15g、琼脂糖15g、水900ml，调节ph5～6。

将试管菌种转接于pda斜面培养基上，26℃培养10天，同样处理2次后，待菌种活力恢复后即可。

b、生产种的制备：

生产种培养基原料组分：玉米90.8％、麦麸8％、蔗糖0.8％、石膏粉0.4％，调节ph5～6。

按生产种培养基配方配置培养基组分，加水后混匀，加水量为湿料用手抓起、握紧时有水滴出(不成线)即可。裝于玻璃瓶或聚丙烯菌袋内，装料量70％左右，压紧，聚丙烯菌袋加菌环、报纸封口、塑料绳包扎；用121℃高压灭菌45分钟，即可。培养基冷却后、开盖、无菌操作用接种针接入斜面菌种，封口，于24℃培养7天，待菌丝长满、长透培养基后即可作为生产种使用。

c、接种：

取灭菌后放冷的菌袋进行接种，接种在无菌操作下进行。需两人配合进行，一人解开菌包口，一人用接种铲挑取1cm³的生产种，快速接入生产菌包内，盖上报纸，包扎袋口。

d、发菌

将接种后的菌包放于培养室内，一般5层，25℃下进行培养，做好菌丝生长和子实体生长管理，特别是温度、湿度、光照和通气量。菌丝生长的温度范围22℃，适宜25℃。水分：在菌丝生长阶段要求培养基中的含水量为65％，空气相对湿度在65％，在子实体生长发育阶段，空气相对湿度应控制在85％。通气：空气中co2含量对子实体生长发育有很大影响，一般要求每天10小时的间歇通风。保证发酵室内的新鲜空气。光照对子实体的形成有促进作用，在子实体生长期间每天进行12小时的光照培养。开孔：待菌丝体长满菌袋时，去掉木耳的封口报纸，对木耳的菌袋进行开孔，保证木耳能从孔中长出。

实施例3：

培养基原料组分：棉籽壳50％、艾渣35％、麦麸10.5％、石膏粉1.5％、石灰粉1.5％、蔗糖1.5％。

木耳培养基的制备方法，包括如下步骤：

(1)艾渣的处理：将艾渣用粉碎机打粉，过筛，筛网直径为1×5cm，所得艾渣颗粒粒径为1.5mm。

(2)配料：按处方重量份称取各基质原料，加水搅拌均匀，加水量为湿料用手抓起、握紧时有水滴出(不成线)即可。

(3)装料：将混匀的培养基装于聚丙烯菌袋内，装料，装料量为80％，压紧，聚丙烯菌袋口穿过菌环、反转、报纸封口、塑料绳包扎。

(4)灭菌：将菌包整齐码放于灭菌锅内，预留20％空间，加热灭菌，加热温度为121℃，灭菌时间为1h。保证灭菌要彻底，但不能时间太长，以免培养基原料分解、营养损失。

木耳的栽培方法，包括如下步骤：

a、菌种活化：

pda基质原料组分：土豆220g、葡萄糖25g、琼脂糖25g、水1100ml，调节ph5～6。

将试管菌种转接于pda斜面培养基上，26℃培养12天，同样处理3次后，待菌种活力恢复后即可。

b、生产种的制备：

生产种培养基配方以质量比计为玉米86.2％、麦麸12％、蔗糖1.2％、石膏粉0.6％，调节ph5～6。

按生产种培养基配方配置培养基组分，加水后混匀，加水量为湿料用手抓起、握紧时有水滴出(不成线)即可。裝于玻璃瓶或聚丙烯菌袋内，装料量70％左右，压紧，聚丙烯菌袋加菌环、报纸封口、塑料绳包扎；用121℃高压灭菌50分钟，即可。培养基冷却后、无菌操作下用接种针接入斜面菌种，封口，于25℃培养8天，待菌丝长满、长透培养基后即可作为生产种使用。c、接种：

取灭菌后放冷的菌袋进行接种，接种在无菌操作下进行。需两人配合进行，一人解开菌包口，一人用接种铲挑取1cm³的生产种，快速接入生产菌包内，盖上报纸，包扎袋口。

d、发菌

将接种后的菌包码放于培养室内，一般6层，25℃下进行培养，做好菌丝生长和子实体生长管理，特别是温度、湿度、光照和通气量。菌丝生长的温度范围25℃，适宜25℃。水分：在菌丝生长阶段要求培养基中的含水量为65％，空气相对湿度在68％，在子实体生长发育阶段，空气相对湿度应控制在90％。通气：空气中co2含量对子实体生长发育有很大影响，一般要求每天10小时的间歇通风。保证发酵室内的新鲜空气。光照对子实体的形成有促进作用，在子实体生长期间每天进行12小时的光照培养。开孔：待菌丝体长满菌袋时，去掉木耳的封口报纸，对木耳的菌袋进行开孔，保证木耳能从孔中长出。

实施例4：

培养基原料组分：棉籽壳35％、艾渣60％、麦麸5％、石膏粉0.5％、石灰粉0.5％、蔗糖0.5％。

制备方法：同实施例1。

实施例5：

培养基原料组分：棉籽壳38.5％、艾渣38.5％、麦麸20％、石膏粉0.5％、石灰粉1.5％、蔗糖1％。

制备方法：同实施例2。

实施例6药用组分高用量

培养基原料组分：棉籽壳10％、艾渣67％、麦麸20％、石膏粉1％、石灰粉1％、蔗糖1％。制备方法：同实施例1。

对比例1

木耳栽培基质原料组分：棉籽壳10％、木屑67％、麦麸20％、石灰粉1％、石膏粉1％、蔗糖1％。制作方法同实施例1。

对比例2

木耳栽培基质原料组分：参考专利中国专利cn201610613832.x公开的一种木耳培养基及其栽培木耳方法，按其实施例一的原料组分制备培养基，原料组分为：松木屑50份、木耳渣10份、木薯渣10份、红薯渣10份、鱼腥草1份、艾草4份、石膏1份，制作方法同本发明实施例1。

性能评价实验

(1)试验药材：

木耳菌种：购买于贵州省农科院(生产种)；

对照组1～2：本发明实施例对比例1～2；

试验组：本发明实施例1～6；

(2)试验方法：

将木耳接种于本实施例1～6组方以及对比例1～2组方制备的培养基，每组20袋菌袋，25℃菌丝体黑暗培养35天，进入出菇期，60天后进入采收期，用刀切下子实体称重，并做好记录，统计第一次、第二次出菇重量和出菇率以及杂菌检测。

(3)试验结果见表1和表2。

表1木耳第一次出菇的子实体数量

备注：出菇率＝(出菇量(袋)/培植量(袋))×100％

表2木耳第二次出菇的子实体数

备注：出菇率＝(出菇量(袋)/培植量(袋))×100％

通过表1可知，木耳能够在本发明实施例1～5的不同比例的栽培基质中正常生长并出菇，栽培的木耳第一次出菇率与对照组1比较呈非常显著差异，与对照组2比较呈显著差异；第一次出菇量与对照组1比较呈非常显著差异，与对照组2比较呈显著差异；第二次出菇率与对照组1比较呈非常显著差异，与对照组2比较呈显著差异；第二次出菇量与对照组1比较呈非常显著差异，与对照组2比较呈显著差异。说明本发明添加艾渣制备的木耳栽培基质，其制备的木耳，出菇量均优于未添加艾渣而培出的木耳，木耳产量也明显较高；木耳第一次出菇的子实体重量最优时为21.45g/袋，出菇率100％，明显优于对照组1(木屑培养基)木耳出菇的子实体重量和出菇率。在采摘完第一次出菇的木耳后，经认真管理，本发明添加艾渣制备的木耳栽培基质，其制备的木耳，出菇量均在12g/袋以上，平均优于未添加艾渣培养的木耳的对照组。由此可知，本发明培养基中的艾渣对木耳生长有一定的促进作用。

其次，本发明培养基的杂菌污染率与对照1比较呈非常显著差异，与对照组2比较无统计学差异但抑菌效果较好。说明本基质中加入艾渣对培养基质具有较好的抑菌作用，与添加艾草和鱼腥草抑菌作用相当或更好；在同样抑菌作用的前提下，本发明木耳的出菇率和出菇量却远大于对照组2(中国专利cn201610613832.x)。说明艾渣中的有效成分有机酸能有效地抑制培养基中的杂菌生长，对木耳安全，不会对木耳产生伤害，提高了木耳的出苗率，又可有效防止在木耳组织培养繁殖过程中的细菌污染。

此外，从表1和表2中可综合看出：本试验例6培养基中添加了高剂量的艾渣，但木耳的出菇率和出菇量反而减少，有可能是过高剂量的艾渣抑制了部分木耳菌种的生长，再者处方中过高的艾渣，相应减少了棉仔壳的用量，有可能导致木耳生长中营养含量不足，不利于木耳的生长。

总而言之，本发明范围内的木耳栽培基质采用合理的组成配比和栽培方法，既提高了木耳的价值，增加经济效益，又可节约成本、可保护环境，是现代高效农业发展的可行之道。

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体方案及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。