一种抑制大豆细菌性斑点病的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于农业病害防治技术领域，具体设及一种抑制大豆细菌性斑点病的方 法。
【背景技术】
[0002] 大豆原产于我国，是重要的粮食、油料作物，在我国农业生产中占有相当重要的地 位。20世纪90年代W来，随着人们对大豆保健功能的不断认识，菜用大豆(俗称毛豆)迅速发 展，成为部分地区出口创汇农产品和区域特色优势农作物。在大豆整个生育期，其生长不断 受到各种病原物(如细菌)的攻击。近几年，由于抗药性的蔓延及气候的反复无常，大豆细菌 病害蔓延迅速并逐渐加重。据大豆研究人员调查，大豆细菌性斑点病在全国大豆产区均有 发生，特别是在北方大豆产区，病害发生严重，给农业生产带来巨大损失。当前，在中南部个 别地区（如江苏、浙江、安徽），大豆细菌性斑点病害爆发，严重影响着大豆的产量和品质，成 为制约部分地区（如浙江)菜用大豆产业发展的重要因素之一。
[0003] 大豆细菌性斑点病，属于下香假单胞属，该属病原菌能侵染绝大多数蔬菜、经济作 物和农作物，对农业生产造成巨大损失。目前，对大豆细菌性斑点病害的防治主要是选育、 栽培抗性品种;使用化学农药。选育、栽培抗性品种受抗源不足，或病原物快速变异使品种 抗性丧失;化学农药的广泛使用造成环境污染，并激增病原菌的抗药性。传统杀菌剂一般只 具有杀菌或抑菌作用，限制病原菌的生长繁殖，从而导致抗药性的加速发展。为了阻止抗药 性的快速发展趋势，采用区别于传统杀菌剂作用模式的新型抗菌剂(抑制病菌毒性)势在必 行。因此，研究开发或探索对病原细菌生长繁殖非必须的，而对其发挥重要毒性功能的致病 系统(如HI型分泌系统(T3SS))起破坏或抑制作用的新型抗菌剂，或许是一个新思路、新领 域。
[0004] 植物病原细菌通过T3SS向寄主植物体内注射III型分泌效应蛋白，干扰寄主防御 反应;抑制植物细胞壁修复;促进细胞程序性死亡。分泌效应蛋白的T3SS装置由二十几种蛋 白组成，是所有分泌系统中最复杂、最重要的。当T3SS不能工作或核屯、装置组分缺失时，病 原细菌致病性一般会丧失。研究表明，尽管效应蛋白的功能因病原菌不同而异，而T3SS核屯、 装置在不同病原菌中却具有高度同源性和进化保守性，暗示同类分子信号或许能作用于多 种病原细菌的T3SS。基于运些发现，探索或开发特异性针对于T3SS毒性装置祀点的新型抗 菌剂，或许是一个新探索、新策略。
[0005] 近十年来，研究者开始探索防治病原细菌的新策略，筛选、并报道了一批特异性作 用于1355的抑制剂（金属离子化合物）。在鼠血清型沙口氏菌（5日1111〇]1日113 6]11日1'；[。曰 serovar typhimurium)中，Layton等人提出邻径亚苄基酷脱在一定程度上是通过限制化2+ 的利用而起作用，并且运种抑制作用可通过添加外源Fe 2+而被逆转。Fe2+在邻径亚苄基酷脱 介导中所展示的T3SS抑制作用，暗示人们：金属离子或许能扮演病原细菌T3SS抑制剂的功 能。然而，在T3SS抑制剂方面的研究，主要偏向于动物病原细菌，在植物病原细菌中的研究 却鲜有报道。
[0006] 基于先前的研究报道，姜伯乐等首次探究了金属离子对野油菜黄单胞菌(黄单胞 属）不同毒性系统的影响。发现Zn2+和Mn 2+同时对T2SS和T3SS有抑制作用；Ca2+特异性抑制 T3SS;化h同时抑制T2SS、T3SS和T4SS装置基因的表达。本实验室初步研究发现，金属离子组 合物(NiCb、NaCl和ZnCl2)对大豆斑疹病菌(植物病原黄单胞菌)T3SS具有显著的抑制效果， 组合物的抑制效果显著优于单剂(如NiCl2或化Cl或化C12)的抑制效果。然而，据目前研究报 道，下香假单胞菌大豆致病变种(假单胞属)T3SS与其它植物病原黄单胞菌(黄单胞属)T3SS 存在较大差异，诸如T3SS组装蛋白、调控基因及转录单元等方面。因而，金属离子对下香假 单胞菌大豆致病变种T3SS是否具有抑制效果；哪种金属离子化合物抑制效果显著；金属离 子化合物组合物抑制效果如何；W及能否成为防治大豆细菌性斑点病的新型抗菌剂，还一 无所知。
[0007] 基于W上分析及国内外研究进展，本发明W大豆细菌性斑点病的病原菌一下香假 单胞菌大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)为研究对象，筛选得到金属离 子化合物组合物抑制剂，其在大豆细菌性斑点病上具有显著生防效果。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是提出一种抑制大豆细菌性斑点病的方法，对大豆细菌性斑点病的 病原菌一下香假单胞菌大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)具有显著抑 制效果。
[0009] 为达到本发明的目的所采取的技术方案如下：
[0010] -种抑制大豆细菌性斑点病的方法，其特征在于:使大豆细菌性斑点病的病原菌 接触抑制剂组合物，所述的大豆细菌性斑点病的病原菌为下香假单胞菌大豆致病变种 (Pseudomonas syringae pv.glycinea)，所述的抑制剂组合物由NiCl2，KCl，CrCl3组成；
[00川优选地，所述的抑制剂组合物由0.01皿01/1-50皿01/1的NiCl2,0.01皿0l/l-100y mol/L的KCl，0.0 l皿01/1-60皿ol/L的CrCl3组成；
[0012] 优选地，所述的抑制剂组合物由0.05皿o1/L-50mio1/L的NiCl2,0.1皿ol/L-50y mol/L的KCl，0.0 l皿〇1/1-30皿ol/L的CrCl3组成；
[0013] 优选地，所述的抑制剂组合物由0.lMlol/レ10Mlol/L的NiCl2,0.扣mol/レ15y mol/L的KCl，0.0 l皿〇1/1-10皿ol/L的CrCl3组成；
[0014] -种抑制大豆细菌性斑点病的抑制剂组合物，其特征在于：抑制剂组合物由 NiCb,KCl，CrCl3组成，所述的大豆细菌性斑点病的病原菌为下香假单胞菌大豆致病变种 (Pseudomonas syringae pv.glycinea)；
[0015] 优选地，所述的抑制剂组合物由0.05皿o1/L-50mio1/L的NiCl2,0.1皿ol/L-50y mol/L的KCl，0.0 l皿〇1/1-30皿ol/L的CrCl3组成；
[0016] 优选地，所述的抑制剂组合物由0.lMlol/レ10Mlol/L的NiCl2,0.扣mol/レ15y mol/L的KCl，0.0 l皿〇1/1-10皿ol/L的CrCl3组成；
[0017] 上述任一项的抑制剂组合物用于抑制大豆细菌性斑点病的用途，所述的大豆细菌 性斑点病的病原菌为下香假单胞菌大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)。 [001引本发明的有益效果：
[0019] 1、本发明的抑制剂组合物对大豆细菌性斑点病的病原菌一下香假单胞菌大豆致 病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)具有特异性的抑制作用，抑制效果显著。
[0020] 2、本发明的抑制剂组合物对环境无污染，绿色环保。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例对本发明进一步的说明，但本发明并不局限于此，实施例中的百 分比均为重量比。
[0022] 实施例1
[0023] 本实施例的抑制剂组合物包含1皿ol/L的NiCl2，15皿ol/L的KC1，0.05皿ol/L的 化Cl3，将上述组分充分混合揽拌均匀，得到本发明的抑制剂组合物。
[0024] 实施例2
[0025] 本实施例的抑制剂组合物包含0.05皿ol/L的NiCl2,0.1皿ol/L的KCl，25皿ol/L的 化Cl3，将上述组分充分混合揽拌均匀，得到本发明的抑制剂组合物。
[00%] 实施例3
[0027] 本实施例的抑制剂组合物包含35皿ol/L的NiCl2，0.05皿ol/L的KCl，5.5皿ol/L的 化Cl3，将上述组分充分混合揽拌均匀，得到本发明的抑制剂组合物。
[0028] 实施例4
[0029] 本实施例的抑制剂组合物包含0. lymol/L NiCl2，l .5wiiol/LKCl，0.如mol/L 化Cl3，将上述组分充分混合揽拌均匀，得到本发明的抑制剂组合物。
[0030] 比较试验A
[0031 ] 实验材料:下香假单胞菌大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)、 邸液体培养基、NiCb、KCl、化Cl3、2%大豆汁液(大豆新鲜叶片在液氮中研磨成粉末，然后溶 于去离子水中，0.22um过滤灭菌）。
[0032] 试验方法：
[0033] 1、菌体生长测定
[0034] (1)挑选下香假单胞菌大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)菌落 接种于20ml邸液体培养基中，于28°C、200巧m摇床上振荡培养20h(OD6〇() - 1.0);
[0035] (2)用移液器吸取上述菌液200ul，重新接种于新鲜的KB液体培养基中，继续振荡 培养直到ODs日日达到约1.0为止；
[0036] (3)将步骤（2)中的菌液5000g离屯、3min收集菌体，然后用