一种侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物农药与微生物肥料技术领域，具体设及一种含芽抱萌发剂的侧抱 芽抱杆菌可湿性粉剂的制备方法。
【背景技术】
[0002] 我国每年使用大量的化学农药制剂，极易造成农药残留超标，生物富集，不仅污染 生态环境，还影响人类的健康。而生物农药副作用小，对人无害，是一种具有广阔前景的绿 色农药，日益成为全球农药发展的一种趋势。
[0003] 芽抱杆菌是目前生物农药与微生物肥料中研究最多的一种微生物，它具有广谱抗 菌活性和极强的抗逆能力，其营养细胞能在真菌性病原菌丝体表面繁衍定殖，有效抑制病 菌生长，因此，在控制病害发生、促进植株生长，提高作物产量等方面显示出了广阔的应用 前景。
[0004] 侧抱芽抱杆菌可促进植物根部有益菌大量生长，抑制病原菌繁殖，促进植物根系 生长，增强根系吸收能力，并能活化±壤养分，从而提高作物产量，改善品质，是一种极为有 效的微生物农药与微生物肥料。侧抱芽抱杆菌次生代谢产物具有生物学功能多样性，种类 丰富，能产生具有很高活性的酶类、激素、细菌素、多肤抗生素等，尤其能产生多种对特定病 原菌具有活性的抗生素，其研究备受关注。
[0005] 侧抱芽抱杆菌(Bacillus laterosporus)产生的抗菌活性物质主要有细胞壁降解 酶类（如几下质酶和葡聚糖酶）、细菌素类、抗生素类（包括脂肤类抗生素和多肤类抗生 素）等抗菌物质。黎定军等对侧抱芽抱杆菌2-Q-9研究时发现其分泌的抑菌物质对青枯 病菌有强烈的抑制作用，并进一步对该抑菌物质的性质进行了研究。Shoji等从侧抱芽抱 杆菌340-19的发酵液中分离得到一种新型的抗菌素，被称为芽抱菌胺，对革兰氏阳性菌 和革兰氏阴性菌都有不同的抑制作用。李伟杰等进行了侧抱芽抱杆菌X10固体菌剂的田间 应用效果试验，结果表明，固体菌剂对番茄青枯病有很好的防治效果，同时还能够促进番茄 植株生长和产量增加。此外，杜春梅等开展了对侧抱芽抱杆菌化-21的研究，发现该菌发 酵液对黄瓜枯萎病菌（F'usarium oxys-porum)、甜瓜枯萎病菌（F.oxysporum)、水稻恶 苗病菌（F.moniliforme)、小麦赤霉病菌（F.gra-minearum)等多种植物病原真菌具 有抗菌活性。通过Se地adex层析和CM-- Sepharose Fast Flow离子交换层析从发酵液 中分离得到4种抗菌物质，初步推测可能为蛋白类或抗菌肤，或者是含有肤键结构的抗菌 物质。张摇分离的一种侧抱芽抱杆菌YMF3·00003产生的胞外酶对两种危害严重的±传病 原真菌一尖抱镶刀菌（化3日1'；[-皿owspor皿）和立枯丝核菌（Rhizoctonia solani)菌 丝的生长具有强烈的抑制作用。Barsby等在己布亚新几内亚分离到一株侧抱芽抱杆菌，其 产生的一种十肤抗生素能明显抑制白色念珠菌的生长。赵秋敏等分离到一株产几下质酶的 侧抱芽抱杆菌，对小麦赤霉病菌（Fusarium gra-minearum)、棉花立枯病菌（R hizoctoniasolani)、苹果轮纹病菌（Botiyospuaeria berengeriana)等 8 株病原真菌 有明显的抑制效果。赵秋敏等分离到一株产几下质酶的侧抱芽抱杆菌，对淡色库蚊二龄幼 虫有明显的致死作用，且与Bt杀虫剂混合使用时对Bt杀虫剂有明显的增效作用。 Orlova等报道一株侧抱芽抱杆菌形成的一种胞内晶体对幼蚊有毒杀作用。麻林涛等在专 利号2011102604337中公开了一种侧抱芽抱杆菌，保藏号为CGMCC No.5090及利用该细菌制 备的微生物菌种剂、微生物肥料W及它们的制备方法。张新雄等在专利号2013102411333中 公开了一种高密度固体发酵生产侧抱芽抱杆菌活菌的方法，发酵有效活菌数可达到500亿/ 克，产品杂菌率低于5%，芽抱率高达90%W上，能大大降低企业的生产成本。
[0006] 侧抱芽抱杆菌还能提高作物抗逆性，达到增产增收的效果。张新雄等，研发了侧抱 芽抱杆菌±壤接种剂，大田试验结果显示其主要功能为：（1)改良±壤，使±壤肥力、微生 物活性及种群结构得到明显改善；（2)促进农作物生长，使农作物根系发达，植株增高， 茎杆增粗，叶片增多增厚，叶色浓绿，生长稳健；（3)增强农作物抗病能力，农作物施用± 壤接种剂后，均表现出抗病能力增强，被喻为"植物癌症"的烟草花叶病、棉花枯萎病、棉花 黄萎病，在施用接种剂后，发病率明显降低，大田病毒接种试验表明，烟草花叶病发病率降 低60%~70% ;( 4)增强农作物抗寒能力和抗旱抗溃能力；（5)有效改善农产品品 质；（6)提高农作物产量，±壤接种剂在不同地域、不同作物上应用，作物产量明显提高： 蔬菜增产12%~30%，水果增产20%左右，水稻增产10%~15%，烟草增产7.5%~ 19.8%，鲜茶叶产量增加26.8%，蚕桑产量增加20.8%。
[0007] 植物病害生防侧抱芽抱杆菌的研究开发应用目前已取得了不少成就，但其发展过 程中仍存在不少问题。首先，侧抱芽抱杆菌的产业化应用尚不成熟，在农业方面一些相应的 生物农药没有得到大范围的应用，运主要是由科技的不均衡性和理论转化为实际的考察期 较长造成。其次，侧抱芽抱杆菌自身也有需要克服的问题，我们生产的侧抱芽抱杆菌主要W 芽抱数量的多少来衡量，但经过我们试验发现有芽抱杆菌产品超过50%的芽抱施入地中由 于没有及时萌发而失去其效果。如王倩利用枯草芽抱杆菌TR21防治己西蕉枯萎病时，前期 试验利用TR21菌株NB发酵液灌根和叶蔽接种都能有效防治枯萎病，但是利用芽抱制备可湿 性粉剂的灌根与叶蔽效果却不理想，显示了去掉发酵液后的纯芽抱可能因为萌发困难而使 防效下降。
[0008] 芽抱杆菌在自然界中分布广泛，当外部条件适合生长时，芽抱会由休眠状态经过 一系列复杂生理生化反应成长为营养体并恢复新陈代谢作用，运个过程称为萌发 (germination)。自然界中芽抱萌发受外源营养物质的影响，运类营养物质被称之为"萌发 剂"，通常营养诱导芽抱萌发包括氨基酸、糖类和嚷吟核巧的单一作用，也包括它们的协同 作用（例如:AGFK;A:L-天冬献胺;G:葡萄糖;F:果糖;K:钟离子）。当营养物质接触到芽抱 时，芽抱内部会发生一系列变化，（1 )、芽抱核内部H+和Zn2+释放出来，致使芽抱核内部抑由 弱酸性上升至弱碱性；（2)、芽抱核内部化h--DPA的大量释放；（3)、芽抱核水合，内部化2+- DPA被水所替代，芽抱的耐热性下降；（4)、芽抱皮层的芽抱肤聚糖层水解，芽抱核膨胀；（5)、 芽抱核进一步水合，芽抱核内部蛋白质流动性增强，酶活性加强，合成ATP; (6)、降解SASP蛋 白，W释放芽抱DNA，进而引导芽抱生长过程中RNA、蛋白质、DNA的合成。
[0009] 芽抱和促进萌发的芽抱萌发剂在液体中混合后数秒钟之内，萌发剂快速跨过芽抱 衣和皮层到达芽抱内膜的表面，与位于芽抱内膜上的受体蛋白相互作用，激发芽抱进入萌 发状态，接着启动一连串萌发事件，之后的萌发过程不会因移走萌发剂而停止。
[0010] 在现阶段，还没有公开报道有关侧抱芽抱杆菌的芽抱萌发剂的文献，也未有在侧 抱芽抱杆菌可湿性粉剂中加入芽抱萌发剂的研究的报道。
[0011] 另外，由于不同的芽抱杆菌与湿润剂，分散剂等助剂的相容性，载体对各类芽抱杆 菌吸附性各不相同，将现有的芽抱杆菌可湿性粉剂的配方或制备工艺无法用于制备含有芽 抱萌发剂的侧抱芽抱杆菌可湿性粉剂;可湿性粉剂中有效菌的吸附量，存活率，对有害菌的 防治效果及可湿性粉剂量的稳定性差异较大，其整个可湿性粉剂的制备方法必须全盘考虑 各载体吸附能力，对侧抱芽抱杆菌的干燥过程中保护作用，湿润剂，分散剂对可湿性粉剂的 悬浮率，湿润时间的影响，并且对芽抱萌发剂进行全面的筛选才能够得到湿润时间短，悬浮 率高，芽抱保存时间久，使用后芽抱能快速萌发的，防效好的侧抱芽抱杆菌可湿性粉剂。
【发明内容】
[0012] 针对上述现有技术的不足，提供一种含有芽抱萌发剂的侧抱芽抱杆菌可湿性粉剂 及其制备方法，芽抱萌发剂能使侧抱芽抱杆菌可湿性粉剂融入水后，侧抱芽抱能快速萌发， 并大大提高侧抱芽抱的萌发率，其制备的侧抱芽抱杆菌可湿性粉剂芽抱含量为不低于100 亿CFU/克，悬浮率不低于85%，润湿时间不高于85S，细度粉碎过400目筛，水分含量不高于 5%，制备方法稳定。
[0013] 为