专利名称：一种可见光交联复合树脂固定黄嘌呤氧化酶活性细胞的方法
技术领城本发明涉及一种固定细胞的方法，具体地说，就是利用一种可见光交联复合树脂作为包埋载体，固定黄嘌呤氧化酶活性细胞的方法。
背景技术：
微生物细胞的固定化方法有吸附法、交联法和包埋法，其中以包埋法最为常用。作为包埋载体，天然高分子多糖类的海藻酸钠和卡拉胶应用最多。它们具有固化成形方便、对微生物毒性小、固定化密度高的优点。但它们抗微生物分解性能差，机械强度较低，而且海藻酸钠包埋法在多价阴离子及高浓度电解质溶液中易变软，溶解，稳定性不高，在对这两种载体的凝胶进行交联剂稳定化处理后，活力和传质性能会下降(参见王建龙、施汉昌，《工业微生物》，1998年第2期，35-39页)。
明胶包埋法要经过冰箱的冷冻处理，聚乙烯醇包埋法要使用添加剂硼酸，在现今开发使用的光敏树脂中很大一部分是紫外光敏树脂，美国Chen(参见Chen K C、Lin Y F，《Enzyme Microb Technol》，1994年第16期，79-83页)研究指出，冷冻处理、硼酸的酸性给细胞带来的毒性、紫外光照射都会对细胞产生不良影响，造成酶活的损失。党建章(党建章、郑雄敏、李飞，《南昌大学学报》，1995年第4期，380-384页)在包埋产延胡索酸酶的黄色短杆菌研究中用聚乙烯醇和卡拉胶包埋分别得到48％和50％的酶活保留。陈少欣(陈少欣、魏东芝、胡振华，《微生物学报》，2001年第3期，357-361页)在用明胶固定嗜热脂肪芽孢杆菌生产低聚半乳糖时得到了63％的酶活保留。曾胤新(曾胤新，《工业微生物》，2000年第1期，42-47页)在用明胶包埋产菊糖酶克鲁维酵母(Y85)时得到了73.9％的酶活保留。固定化微生物酶活的损失在很大程度上限制了固定化技术优点的发挥。
光交联树脂是一类很有潜力的新型包埋载体。为了避免紫外光交联树脂在使用过程中紫外光照射带来的毒害性，现在开发出了使用可见光照射的可见光交联树脂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种固定细胞的方法，即利用一种可见光交联复合树脂作为包埋载体，固定黄嘌呤氧化酶活性细胞的方法。
本发明的目的是这样实现的以可见光交联复合树脂(A3B)作为载体，将黄嘌呤氧化酶活性细胞包埋于其中，经可见光照射，制备了固定化细胞。
1)黄嘌呤氧化酶活性细胞的制备方法如下黄嘌呤氧化酶活性细胞来源将公知菌株球形节杆菌(Arthrobacterglobiformis)ATCC8010菌种振荡培养于100ml的诱导培养基(pH7.2)中，培养温度为25-30℃，培养时间为22-26小时。
诱导培养基(pH7.2)的配方为0.1-0.2％黄嘌呤，8-12％基础盐培养基XS，0.01-0.02％酵母膏。
其中，基础盐培养基XS的配方为68g KH2PO4，87g K2HPO4，100mgCaCl2，2g MgSO47H2O，5mg Fe(NH4)2(SO4)26H2O，用KOH调pH7.2。
培养结束后，用离心法收集菌体。再用0.9％KCl溶液洗涤菌体一次。用离心法收集菌体。再加10mMol的磷酸缓冲液(pH7.2-pH7.5)，使成5ml细胞悬液，洗涤，用离心法收集菌体。
2)黄嘌呤氧化酶活性的测定方法尿酸购自美国Sigma公司。用标准浓度的尿酸绘制工作曲线。尿酸的浓度在分光光度计上，用293nm波长的光吸收检测。
黄嘌呤氧化酶活性的定义为pH8.0，35℃反应，1min内催化产生1μMol尿酸的酶量。
本发明与现有技术相比，具有如下的优点和积极效果1)由于采用可见光交联树脂作为载体，在可见光的照射作用下将细胞固定，避免因采用紫外光照射带来的毒害，有利于细胞酶活保留的提高。
2)本固定化细胞同时具有抗微生物分解性能好，机械强度高，化学性能稳定重复反应稳定性高，酶活保留高等方面的优点。
3)本方法改善了催化过程，提高了利用效率，降低了成本。
总之，本发明在食品与发酵工业，医药工业，化学工业，环境保护和能源开发等各个领域有着广阔的应用前景。
具体实施例方式
以下结合具体实施例，对本发明的技术方案作进一步说明。
用玻片将可见光交联复合树脂(A3B)压成0.1～0.5毫米厚的薄片作为载体，将黄嘌呤氧化酶活性细胞菌泥或用磷酸缓冲液(pH7.2-pH8.0)溶解的黄嘌呤氧化酶活性细胞的溶液均匀涂布在一片树脂薄片上，将另一片树脂薄片盖在涂有细胞的树脂薄片上，压紧，然后放入可见光固化仪中，开机，经仪器发出可见光照射1～3分钟，制备了固定化细胞；固定化细胞的保留酶活力可达95.72％。
固定化细胞的制备方法同上。
现配制0.02mol/L，pH8.0的磷酸缓冲液，投入0.5g固定化细胞和0.0079g次黄嘌呤，35℃搅拌反应12小时，测定固定化细胞酶的保留酶活力。
测定结果固定化细胞酶的保留酶活力为95.72％。
测定结果固定化细胞酶的保留酶活力为92.1％。
测定结果固定化细胞酶的保留酶活力为94.35％。
测定结果固定化细胞酶的保留酶活力为95.42％。实施例5现配制0.02mol/L，pH8.0的磷酸缓冲液，投入0.5g固定化细胞和0.0062g次黄嘌呤，35℃搅拌反应12小时，测定固定化细胞酶的保留酶活力。
测定结果固定化细胞酶的保留酶活力为95.09％。
测定结果固定化细胞酶的保留酶活力为95.51％。
权利要求
1.一种可见光交联复合树脂固定黄嘌呤氧化酶活性细胞的方法，其特征在于以片状固态0.1～0.5毫米厚的可见光交联复合树脂作为载体，将黄嘌呤氧化酶活性细胞包埋于其中，经可见光照射，照射时间为1～3分钟，制备了固定化细胞。
2.按权利要求1所述的一种可见光交联复合树脂固定黄嘌呤氧化酶活性细胞的方法，其特征在于用两片固态可见光交联复合树脂薄片将固态细胞菌泥或溶液夹在中间。
全文摘要
本发明涉及一种固定细胞的方法,具体地说,就是利用一种可见光交联复合树脂作为包埋载体,固定黄嘌呤氧化酶活性细胞的方法。本发明是以可见光交联复合树脂作为载体,将黄嘌呤氧化酶活性细胞包埋于其中,经可见光照射,制备了固定化细胞。本固定化细胞同时具有抗微生物分解性能好,机械强度高,化学性能稳定,重复反应稳定性高,酶活保留高等方面的优点。本发明在食品与发酵工业,医药工业,化学工业,环境保护和能源开发等各个领域有着广阔的应用前景。
文档编号C12N11/08GK1368552SQ02115489
公开日2002年9月11日 申请日期2002年1月30日 优先权日2002年1月30日
发明者冯胜彦, 陈蔚梅, 吴斌, 熊晓然, 吴显辉, 郭明雄, 艾建宇 申请人:武汉大学