专利名称：降解烟草烟碱的微生物及其分离、培养方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物，特别是涉及一种降解烟草烟碱的微生物，即烟草假单胞菌(Pseudomonas nicotianae)CGMCC NO.0757，本发明还涉及该微生物的分离鉴定和培养方法及其应用，属于微生物制备及应用技术领域。
本发明的再一目的在于这种降解烟草烟碱的微生物在降解烟草烟碱方面的应用，它可有效地减少烟草中烟碱的含量，且无污染。
本发明的另一目的在于提供这种降解烟草烟碱的微生物的分离方法。
本发明的又一目的在于提供这种降解烟草烟碱的微生物的培养方法。本发明的目的是这样实现的
一种降解烟草烟碱的微生物，它为假单胞菌属菌，可降解烟草中的烟碱。它为G-杆菌，精氨酸双水解酶阳性，氧化酶阳性，卵黄反应阳性；能够利用葡萄糖和海藻糖；DL-精氨酸、苯丙氨酸阳性，L-脯氨酸阴性，间-肌醇阴性；在培养基上生长时可见少量扩散的黄色荧光，最适生长温度为25-30℃。
该降解烟草烟碱的微生物应用在降解烟草烟碱方面。
该降解烟草烟碱的微生物的分离方法为首先从土样中分离出降解烟草烟碱的微生物菌株，其次进行分离纯化及耐受烟碱能力实验，然后获得在0.8％烟碱浓度旺盛生长的微生物，即烟草假单胞菌(Pseudomonasnicotianae)。土样采自烟叶仓库或露天烟垛周围的土壤。
该降解烟草烟碱的微生物的培养方法，其培养基组成为0.1％K2HPO4，0.4％KH2PO4，0.1％(NH4)2SO4，0.1％酵母提取物，0.4％烟碱；其培养条件为30℃摇瓶培养60h。
该发明通过使用微生物来实现降解烟草烟碱的目的，可以适当调整烟叶原料的烟碱含量大小，提高烟叶可用性。也可以分解烟尘中的烟碱，减少其对环境的污染。
烟草假单胞菌(Pseudomonas nicotianae)，已于2002年7月2日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC，保藏编号为CGMCC NO.0757。
5、6、7号培养基烟碱浓度在0.02％-0.06％之间，耐烟碱菌生长较旺盛。镜检为G-杆菌。在无烟碱菌板上长势普遍较弱，菌落直径较小。降烟碱菌的训化方法配制不同浓度烟碱肉膏培养基4瓶，各取100ml，接5、6、7号菌种，摇瓶28.0℃，115n/min，摇瓶培养36h，同上条件转接两次富集。耐烟碱菌的富集结果如表2所示。表2耐烟碱菌的富集结果
从表2可以看出，在烟碱浓度0.1％的培养液中，7号耐烟碱菌株能良好生长。7号耐烟碱菌的耐烟碱试验结果如表3所示。表3 7号耐烟碱菌的耐烟碱试验结果
7号微生物菌种鉴定结果该菌为G-杆菌，精氨酸双水解酶阳性，氧化酶阳性，卵黄反应阳性；能够利用葡萄糖和海藻糖；DL-精氨酸、苯丙氨酸阳性，L-脯氨酸阴性，间-肌醇阴性。在培养基上生长时可见少量扩散的黄色荧光，最适生长温度为25-30℃，经初步鉴定为假单胞菌属菌，生化性质类似恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)，定义为烟草假单胞菌(Pseudomonas nicotianae)，为一新的假单胞菌属菌种。实施例二烟草假单胞菌(Pseudomonas nicotianae)的培养条件用烟碱作为单一碳源和能量能够生长，少量酵母提取物能刺激菌体生长。培养基组成及培养条件为0.1％K2HPO4，0.4％KH2PO4，0.1％(NH4)2SO4，0.1％酵母提取物，0.4％烟碱，在30℃摇瓶培养60h，对烟碱的降解率为20-40％。
最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
权利要求
1.一种降解烟草烟碱的微生物，其特征在于它为假单胞菌属菌，可降解烟草中的烟碱。
2.根据权利要求1所述的降解烟草烟碱的微生物，其特征在于它为G-杆菌，精氨酸双水解酶阳性，氧化酶阳性，卵黄反应阳性；能够利用葡萄糖和海藻糖；DL-精氨酸、苯丙氨酸阳性，L-脯氨酸阴性，间-肌醇阴性；在培养基上生长时可见少量扩散的黄色荧光，最适生长温度为25-30℃。
3.权利要求1-2所述的降解烟草烟碱的微生物在降解烟草烟碱方面的应用。
4.权利要求1-2所述的降解烟草烟碱的微生物的分离方法，其特征在于首先从土样中分离出降解烟草烟碱的微生物菌株，其次进行分离纯化及耐受烟碱能力实验，然后获得在0.8％烟碱浓度旺盛生长的微生物，即烟草假单胞菌(Pseudomonas nicotianae)。
5.根据权利要求4所述的降解烟草烟碱的微生物的分离方法，其特征在于所述的土样采自烟叶仓库或露天烟垛周围的土壤。
6.权利要求1-2所述的降解烟草烟碱的微生物的培养方法，其特征在于其培养基组成为0.1％K2HPO4，0.4％KH2PO4，0.1％(NH4)2SO4，0.1％酵母提取物，0.4％烟碱；其培养条件为30℃摇瓶培养60h。
全文摘要
一种降解烟草烟碱的微生物，它为假单胞菌属菌，可降解烟草中的烟碱。该微生物的分离是首先从土样中分离出降解烟草烟碱的微生物菌株，其次进行分离纯化及耐受烟碱能力实验，然后获得在0.8％烟碱浓度旺盛生长的微生物，即烟草假单胞菌(Pseudomonas nicotianae)。其培养过程中培养基组成为0.1％K
文档编号C12N1/20GK1465695SQ02123578
公开日2004年1月7日 申请日期2002年7月3日 优先权日2002年7月3日
发明者孙君社, 马林, 袁有贵, 刘萍 申请人:中国农业大学