专利名称：猪背膘厚相关基因mac30的克隆及其在标记辅助选择上的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于家畜基因工程技术领域，具体地说涉及猪背膘厚相关基因MAC30的克隆及其在标记辅助选择上的应用。
背景技术：
中国是个养猪大国，也是猪种资源最丰富的国家，很早就开始将野猪驯化为家猪。经过长期选择，形成了许多各具特色的地方品种，仅《中国猪品种志》(张仲葛，上海科技出版社，1986)记载的就有48个。与国外的商品猪相比，中国地方品种具有许多突出的优点肉质好，产仔数高、抗逆性好和适应性强等等，但却有着两个共同的缺点，那就是瘦肉率低和增重慢。因此，增加胴体瘦肉率和提高生长速度一直是我国家猪的遗传改良工作的主要目标。
胴体性状主要包括以下两个方面一方面是胴体各组分的度量值，如背膘厚度、眼肌面积、胴体长、小肠长度以及各种内脏重等；另一方面是各组成的重量百分比，如屠宰率、腿臀比率、腿臀肉骨率、板油率和内脂率等。
许多胴体性状属于数量性状，由多基因控制、并存在主基因(major gene)效应。由于胴体性状表现晚且不便活体测量，采用常规育种方法对其进行选择周期长，收效慢。分子生物学技术的发展，使人们可以在DNA水平寻找控制胴体性状的主基因或与其紧密连锁的分子标记，在育种过程中用于标记辅助选择(marker assisted selection，MAS)，以便提高选择进展，更好地改善胴体品质，满足人们的需要，同时获得较大的经济效益。
通过候选基因法，已经找到了一些影响猪的胴体品质的基因。位于猪12号染色体上的生长激素基因(Growth Hormon，GH)是神经分泌内生长轴中调控动物生长发育的核心基因，其产物生长激索具有调节新陈代谢、促进生长发育等作用，是与猪的生长和胴体性状相关的主要候选基因，中外学者对它的基因型与生产性状的关系进行了广泛的研究。Knorr等(Knorr C等，Associations of GHgene variants with performance traits in F2 generations of European wild boar，Pietrain and Meishan pigs.Anim Genet，1997，28124-128)发现梅山猪与皮特兰猪杂交的F2代群体中，不同的GH基因型与8个胴体性状显著相关。李加琪等(李加琪等，IFG-1基因对长白×蓝塘猪资源群生产性能的遗传效应分析，遗传学报，2003，30(9)835-839)发现在长白×蓝塘猪构建的资源群体中类胰岛素生长因子1(Insulin-like growth factor I，IGF-I)不同基因型对断奶后日增重、骨率、胴体瘦肉量和皮脂率等性状有显著影响。刘桂兰等(刘桂兰等，IGF2基因PCR-RFLP多态性与脂肪沉积相关性状的关联分析，遗传学报，2003，30(12)1107-1112)分析了类胰岛素生长因子2(Insulin-like growth factor II，IGF-II)基因第8内含子两个NciI酶切位点的多态性在大白猪×梅山猪构成的F2代中的多态性分布情况，发现B位点B1B1基因型的个体显著比B2B2基因型的个体背膘薄18.28％(P＜0.01)，瘦肉率高8.71％(P＜0.01)。垂体转录因子(Pituitan transcription factor 1，PIT1)是生长激素、催乳素和促甲状腺素重要的调节因子，Yu等(Yu TP等，Association of PIT1 polymorphisms with growth and carcass traits inpigs.J Anim Sci，1995，731282-1288)曾报道PIT1与平均背膘厚存在显著相关，近年来Kuryland等(Kuryl J等，Association of POU1F1/RsaI genotypes with carcass traits in pigs.J Appl Genet，2001，42309-316)和Brunsch等(Brunsch C等，Analysis of associations of PIT1 genotypes with growth，meatquality and carcass composition traits in pigs.J Appl Genet，2002，4385-91)分别在不同的资源家系中检测到PITI与数种胴体性状相关。其它与胴体性状相关的候选基因还包括生长激素释放素(GHRH)、瘦素(Leptin)、生长素(Ghrelin)、肌细胞生成素(Myogenin)、生长激素抑制素(somatostatin，SS)、黑素皮质激素受体4(Melanocortin-4，MC4R)和生长素受体(growth hormone receptor，GHR)(XiaD等，Developmental patterns of GHr and SS mRNA expression in porcine gastric tissue.World JGastroenterol，2003，91058-1062)、MSTN(Jiang YL等，Identification of three SNPs in the porcinemyostatin gene(MSTN).Anim Biotechnol，2002，13173-178)等基因。位于18号染色体上的瘦素基因(Leptin)被认为是与生长、胴体性状相关的一个基因(Sasaki S等，Assignment of the porcine obese(leptin)gene to chromosome 18 by linkage analysis of a new PCR-based polymorphism.Mamm Genome，1996，7471-472)，但Jiang等(Jiang ZH等Genetic polymorphisms in the leptin gene and their associationwith fatness in four pig breeds.Mamm Genome，1999，10191-193)的研究却没有发现明显的关联。位于猪9号染色体上的肌细胞生成素(Myogenin)是MyoD基因家族的成员，主要功能是调节成肌细胞分化为肌纤维。Te Pas等(te Pas MF等，Influences of myogenin genotypes on birth weight，growth rate，carcass weight，backfat thickness，and lean weight of pigs.J Anim Sci，1999，772352-2356)在两个大白猪群中检测了该基因的多态性，分析发现不同基因型的个体在出生重、生长速度和瘦肉量等性状上有显著差异。对两个选择系肌肉的MyoD基因家族成员mRNA表达水平比较发现F-系(选择生长速度)中myogenin、myf-5、MyoDl的mRNA表达水平比L-系(选择瘦肉率)高，在F-系中，背膘厚与成肌细胞的表达成负相关(te Pas MF等，Messenger ribonucleic acid expression of the MyoDgene family in muscle tissue at slaughter in relation to selection for porcine growth rate.J Anim Sci，2000，7869-77)。Kim等(Kim KS等，A missense variant of the porcine melanocortin-4receptor(MC4R)geneis associated with fatness，growth，and feed intake traits.Mamm Genome，2000，11131-135)在5个猪商品系中检测到MC4R基因遗传变异与背膘厚显著相关。刘桂兰等(刘桂兰等，猪资源家系MC4R基因扫描及其与脂肪性状的相关分析，遗传学报，2002，29(6)497-501)对大白×梅山的F2代174个体检测发现MC4R基因多态性与猪胸腰椎间膘厚(P＜0.05)、臀部膘厚(P＜0.02)、平均背膘厚(P＜0.04)、眼肌宽度(P＜0.003)、眼肌面积(P＜0.05)、皮率(P＜0.02)呈显著相关。
采用基因组扫描法，研究者们还定位了一些影响胴体性状的数量性状位点(QTL)。影响背膘厚的主基因被定位于第2和7号染色体上(de Koning等，Detection of quantitative trait loci for backfatthickness and intramuscular fat content in pigs(Sus scrofa).Genetics，1999，1521679-1690)。Paszek等(Paszek AA等，Interval mapping of carcass and meat quality traits in a divergent swine cross.AnimBiotechnol，2001，12155-165)利用119个分子标记对116个F2个体的胴体和肉质性状进行分析后发现在猪12号染色体上存在影响胴体长、第10肋骨背膘厚、平均背膘厚、板油率、眼肌面积和肌内脂肪含量等多个性状的QTL。最近，Clop等(Clop A，等，Detection of QTL affecting fatty acidcomposition in the pig.Mamm Genome，2003，14650-656)对伊比利亚猪与长白猪构建的F2进行基因组扫描，发现12号染色体上存在影响不饱和脂肪酸(亚麻酸)含量的QTL。Yue等(Yue G等，Linkageand QTL mapping for Sus scrofa chromosome 12.Journal of Animal Breeding and Genetics，2003，12095-102)以野猪、梅山猪和皮特兰构成的三个F2群体为研究对象，在12号染色体上发现了数个影响13-14肋骨间的背膘厚、瘦肉切割率等性状的QTL。据统计，除了SSC16和SSC17外，猪的所有染色体上均发现了影响背膘厚的QTL(Bidanel and Rothschild，2002)。
申请人长期以来致力于猪12号染色体上重要功能基因的分离鉴定工作，并取得了一定的成果(Yu M等，Isolation，physical mapping and polymorphism of the porcine ferredoxin reductase(FDXR)gene.Anim Genet，2002，33394-395；Yu M等，Physical mapping of the rod cGMP-phosphodiesterase-subunit(PDE6G)gene to pig chromosome 12.Anim Genet，2003，3476-77)。
MAC30(meningioma associate protein 30，MAC30)基因是首先在脑膜瘤细胞中发现的过度表达的基因之一，它是类胰岛素生长因子结合蛋白家族成员之一，参与对类胰岛素生长因子(IGF)的调节(Murphy M等，Identification and characterization of genes differentially expressed in meningiomas.Cell Growth Differ，1993，4715-722)。人和小鼠的基因组研究结果将MAC30基因分别定位于人的17(17q11)号染色体和鼠的11号染色体。申请人扩增猪的MAC30的基因组DNA片段，并利用RH克隆板将它定位在猪的12号染色体上(12q13，未发表)，符合比较基因组学研究的结果(Goureau A等，Human and porcine correspondence of chromosome segments using bidirectional chromosomepainting.Genomics，1996，36252-262)。Malhotra等(Malhotra K等，Identification of differentiallyexpressed mRNAs in human fetal liver across gestation.Nucleic Acids Res，1999，27839-847)通过差异显示技术(DDRT-PCR)发现MAC30基因在胚胎肝细胞和成体的肝细胞中有不同的表达模式，暗示它可能在机体的生长和分化过程中起重要作用。但是到目前为止，仍没见到全面研究MAC30基因功能的报导。研究突变位点在群体中的多态性，并进行性状关联分析是研究基因功能的一个非常有力的手段。所以申请人对这个基因的部分的外显子进行了多态研究和关联分析，以期能够发现它的功能。
发明内容
本发明的目的在于克隆猪MAC30基因的部分基因组DNA序列，寻找基因突变位点以及多态性的检测方法，筛选猪背膘厚性状相关的分子标记，作为猪遗传育种的辅助选择的应用。
本发明通过以下技术方案实现一种猪背膘厚相关基因MAC30，它的DNA序列如序列表SEQ ID NO1所述。
PCR扩增的MAC30基因组序列全长为970bp，其中包含如附图2所述的部分外显子2和部分的外显子3序列。
在序列表SEQ ID NO1的第848bp处有一个碱基突变(848G-848A)，导致其编码的氨基酸由缬氨酸(GTC-ATC)变成异亮氨酸。
克隆以上所述的MAC30基因所用的引物的DNA序列如下所示5′-ATACCCAGGAGTTCAAAGACACT-3′(正向)，’5′-GAGAGGGATGAGAAAGTAGGGGA-3′(反向)，
检测848G-848A碱基处突变的正、反同引物的DNA序列如下所示5’-GGGAGGAGTCTCTGTGTCGTGTGT-3’(正向引物)5′-GAGAGGGATGAGAAAGTAGGGGA-3′(反向引物)用于PCR产物直接测序的引物的DNA序列如下所示5′-TAGTCGTTCGTGGAAAGTCGTAGGTC-3′(反向引物)一种筛选适用于猪背膘厚性状的分子标记的方法，按照以下步骤制备用人MAC30基因cDNA为信息探针，作同源序列筛选，获得同源性90％以上的表达序列标签(EST)；然后对EST进行拼接；根据与人MAC30基因的基因组全长DNA序列的比对结果大致得出外显子的拼接位点，设计扩增引物；从猪血液基因组提取DNA，PCR扩增、PCR产物纯化和克隆测序，获得如序列表SEQ ID NO1所示的核苷酸序列。
应用PCR产物直接测序的方法检测猪MAC30基因848G-848A位点的多态性，并进行其基因型与猪的部分生产性状之间的关联分析。本发明为猪的分子育种提供了一个新的遗传标记。
依照本发明，猪背膘厚相关基因MAC30可以用于猪标记辅助选择中。
本发明的详细技术细节如下所述1.MAC30基因部分DNA序列的克隆(1)引物设计用人MAC30基因cDNA(GenBank收录号XM 031536)为信息探针，利用NCBI中的BLAST工具在GenBank猪EST数据库中做同源序列筛选，获得一系列同源性为90％以上的ESTs(片段长度大于100bp)，将这些ESTs的收录号在NCBI中用ENTREZ(文献见http//www.ncbi.nlm.nih.gov/Web/Search/index.html)查询相应序列，然后用序列分析软件DNAStar中的SeqMan程序构建猪EST-重叠群。根据EST拼接序列设计扩增引物。序列如下5′-ATACCCAGGAGTTCAAAGACACT-3′(正向)，5′-GAGAGGGATGAGAAAGTAGGGGA-3′(反向)(2)PCR产物的纯化、克隆和测序PCR产物的纯化在紫外灯下从低熔点琼脂糖凝胶上切下含目的片段的凝胶，放入1.5mlEpendorff管中，于70℃温育至凝胶完全融化，然后用PCR产物纯化试剂盒(Promega)纯化PCR产物，按照试剂盒说明书操作，具体步骤是在每300μl融化的凝胶中加入1ml Resin试剂，混匀20s，将Resin/DNA混合物装入注射器，使浆液通过试剂盒中的Minicolumn挤出。再在注射器中加入80％的异丙醇2ml，轻推活塞使异丙醇通过Minicolumn挤出，取下Minicolumn装入1.5ml Ependorff管中，10,000g离心2min以干燥Resin，将Minicolumn装入另一个干净的1.5ml Ependorff管中，加入30～50μl灭菌水，静置1min，10,000g离心20s，以洗脱DNA存于Ependorff管中。
连接反应将纯化RACE产物与pGEM-T easy载体(购自promega公司)连接，连接反应总体积是5μl，其中包括2.5μl 2×buffer，0.5μl的T载体，1.5μl的纯化PCR产物，0.5μl的T4连接酶，置16℃水浴过夜。
感受态细胞的制备从37℃培养了16～20h的新鲜平板上挑取一个DH5α单菌落接种于2ml LB中，于37℃振荡培养3h，转接1ml菌液于含有30ml LB的盐水瓶中，继续在37℃振荡培养约4h，待OD600达到0.3～0.4时将盐水瓶从摇床取出置冰浴冷却10～15min，然后将菌液转入离心管中于4℃4,000g离心10min以收集细胞，将离心管倒置以弃净培养液，用10ml冰预冷的0.1mol/L的CaCl2重悬沉淀，冰浴30min，重复4℃4,000g离心10min一次，用4ml冰预冷的0.1mol/L的CaCl2重悬沉淀，置4℃保存备用。
转化无菌状态下取100～120μl感受态细胞于1.5ml Ependorff管中，将5μl的连接产物加入混匀，在冰上放置30min，42℃热激90s，其间不要摇动Ependorff管，取出后冰浴3～4min，加入400μl无抗生素的LB液体培养基，37℃振荡培养45min。取100μl涂布于已提前4h涂布了IPTG(Isopropylthio-β-D-galactoside，异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)和X-gal的琼脂平板上，37℃平放1h后倒置培养。
质粒的小量制备挑取平板上的单菌落，接种于2-3ml LB中，37℃300r/min培养过夜。用1.5mlEP管12000r/min离心数秒收集菌体。每管加入100μl用冰预冷的溶液I[50mM葡萄糖，25mM Tris.Cl(pH8.0)，10mM EDTA(pH8.0)]，涡旋振荡至菌体充分悬浮。加入新配制的溶液II
200μl，快速颠倒混匀，冰浴5min，然后加入预冷的溶液III[5M乙酸钾，冰乙酸11.5ml，H2O28.5ml]150μl，混匀后冰浴5min，12000r/min离心5min，将上清转至另-EP管中，加入苯酚氯仿异戊醇500μl，涡旋振荡，离心后小心吸取上层水相，加入2倍体积的无水乙醇，-20℃沉淀30min，12000r/min离心5min，沉淀用70％乙醇洗涤2次，抽干，加入含有RNA酶的TE 20μl。
重组质粒的酶切鉴定取3μl质粒DNA与适量的双蒸水混匀，使其总体积为10μl，加入5U限制性内酶EcoRI及1μl相应的10×限制性内切酶反应缓冲液，轻弹管壁混匀并离心，置37℃水浴1-2小时，取2-3μl反应液于琼脂糖凝胶电泳检测，酶切结果与预计完全相同者，即为目的重组质粒。重组质粒采用双脱氧末端终止法在DNA自动测序仪上进行测序，序列测定由上海博亚生物技术有限公司完成。
(3)DNA序列同源性检索鉴定通过美国国家生物技术信息中心(NCBI，National Center for Biotechnology Information，http//www.ncbi.nlm.nih.gov)网站的BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)软件，将测序后获得的DNA序列与GenBank数据库中公布的已知生理功能基因进行序列同源性比较，以鉴定和获得该DNA序列的功能信息。
2、标记性状关联分析利用申请人与中国湖北省通城县畜牧局种畜场合作组建的试验群体(含55个纯繁通城猪、26个长白♂×(大白×通城)♀和21个大白♂×(长白×通城)♀三元杂交组合猪)为实验对象进行性状关联分析.102个DNA样品用于基因型检测。
所分析的性状有部分生长性状，部分胴体性状和部分肉质性状。申请人建立了如下最小二乘模型yij＝μ+GENOTYPEi+SEXj+εij，其中，yij是性状观察值，μ为总体均数，GENOTYPEi为基因型效应，SEXj为性别效应，εij为随机误差，假定服从N(0，Iσ2)分布。
本发明的效果1、猪MAC30基因部分DNA序列的克隆PCR扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳检测结果显示均为特异的PCR产物。将PCR产物回收纯化后克隆测序，测序结果显示PCR产物的长度为970bp。其中包括部分外显子2和部分的外显子3的序列(如图2、SEQ ID NO1所示)。所涉及的完整的内含子2序列符合GT-AG规则。
测序结果表明在该片段的848bp处存在A、G两个等位基因分别编码异亮氨酸(Ile)和缬氨酸(Val)，测序峰图见图4。
2、标记性状关联分析对猪MAC30基因848bp处(SEQ ID NO1)多态性与部分生产性状之间的进行了关联分析。测试群体由三个组合构成，含55个纯繁通城猪、26个长白♂×(大白×通城)♀和21个大白♂×(长白×通城)♀三元杂交组合猪，总共102个个体。对猪MAC30基因测序结果表明，在所有检测的群体中GG基因型的个体有87个，AG基因型有15个个体，无AA基因型个体。由于A等位基因仅在通城猪群体中出现，在进行与部分性状关联分析时，仅对55个通城猪进行分析，其中GG基因型有40个体，AG基因型有15个个体。不同基因型之间性状的性状显著差异的结果(最小二乘均数和标准误分析)总结于表1，其它性状在不同的基因型之间没有显著的差异。
由表可知，GG基因型的平均背膘厚、6-7肋骨处背膘厚度均极显著地低于AG基因型的猪(P＜0.01)。根据结果申请人分析A等位基因可能是影响背膘厚的增效基因，大白、长白等商品猪由于受到强的选择压力的影响，导致A等位基因丢失，仅存在G等位基因，而通城猪受到的选择压力相对较小，还存在少量A等位基因，长白♂×(大白×通城)♀和大白♂×(长白×通城)♀三元杂交组合猪的A等位基因也极少(未检测到)。还可能是该基因与某个控制背膘厚的基因紧密连锁。
表1猪Mac30基因848位点不同基因型与背膘厚性状的关联分析
序列表
序列表SEQ ID NO1是本发明克隆的猪背膘厚性状相关基因MAC30的DNA序列；图1是本发明的技术流程图。
图2是猪MAC30基因部分DNA序列。大写字母分别为外显子2，3。小写字母为内含子2。5’-和3’-拼接位点的两个保守核苷酸(GT/AG)用黑体标出，起始密码子ATG以黑体字标出，848bp处A/G多态位点以圆括号()标出表示。引物的位置用方框显示。
图3是用于PCR产物直接测序的PCR产物琼脂糖凝胶电泳图。
琼脂糖胶浓度为2％。1-5泳道为PCR产物，长度为766bp；M泳道DNA分子量标记(100-1000bp ladder)图4PCR产物测序的彩峰图，箭头所指的是多态位点。
图5是本发明克隆的猪背膘厚性状相关基因MAC30的部分DNA序列所推导出的氨基酸序列。
具体实施例方式
实施例1猪标记性状关联分析在一个通城猪群中对MAC30基因第3外显子A848G多态性位点与部分生产性状进行关联分析，所分析的性状是部分胴体性状和部分肉质性状。
基因型检测结果表明在55个个体中占绝大多数的是GG基因型，有40个，AG基因型有15个个体。不同基因型之间性状的性状显著差异的结果(最小二乘均数和标准误分析)总结于表2，分析结果表明，GG基因型的平均背膘厚、6-7肋骨处背膘厚度均极显著地低于AG基因型的猪(P＜0.01)，其它性状在不同的基因型之间没有显著的差异。
表2猪Mac30基因848位点不同基因型与背膘厚性状的关联分析
**表示在0.01水平上差异极显著。
实施例2猪MAC30基因848位点多态在各猪品种中的分布情况在6个猪品种中检测猪MAC30基因第848位点的多态性，检测结果如表3所述，表3的数据分析显述，在所检测的这几个猪品种中，均是等位基因G的频率占优势，而在国外商品猪种长白和杜洛克中，没有检测到A等位基因存在。
对猪MAC30基因848位点多态性基因频率在不同品种中的分布差异进行检验，差异显著性结果表明该位点基因频率在所检测的这六个猪品种中存在较大程度的差异。
序列表<110>华中农业大学<120>猪背膘厚相关基因MAC30的克隆及其在标记辅助选择上的应用<130>
<141>2004-06-07<160>1<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>970<212>DNA<213>猪(Sus scrofa)<220>
<221>gene<222>(1)..(970)<223>
<220>
<221>primer_bind<222>(948)..(970)<223>
<220>
<221>primer_bind
<222>(903)..(928)<223>
<220>
<221>primer_bind<222>(204)..(228)<223>
<220>
<221>primer_bind<222>(1)..(23)<223>
<220>
<221>mutation<222>(848)..(848)<223>
<220>
<221>Intron<222>(124)..(776)<223>
<220>
<221>exon<222>(777)..(970)<223>
<220>
<221>exon<222>(1)..(123)<223>
<400>1ata ccc agg agt tca aag aca ctc tgc tcc aga gcc ccc cag cgt ggt 48Ile Pro Arg Ser Ser Lys Thr Leu Cys Ser Arg Ala Pro Gln Arg Gly1 5 10 15tta agg cct tcc tgt ttt gcg agc ttg tgt ttc agc tgc ctt tct ttc 96Leu Arg Pro Ser Cys Phe Ala Ser Leu Cys Phe Ser Cys Leu Ser Phe
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权利要求
1.一种猪背膘厚相关基因MAC30，它的DNA序列如序列表SEQ ID NO1所述。
2.、根据权利要求1所述的基因，其特征在于PCR扩增的基因组序列全长为970bp，其中包含如附图2所述的部分外显子2和部分的外显子3序列。
3.根据权利要求1所述的DNA序列，其特征在于序列表SEQ ID NO1的第848bp处有一个碱基突变(848G-848A)，导致其编码的氨基酸由缬氨酸(GTC-ATC)变成异亮氨酸。
4.根据权利要求1所述的DNA序列，其中克隆MAC30基因所用的引物的DNA序列如下所示5′-ATACCCAGGAGTTCAAAGACACT-3′(正向)，’5′-GAGAGGGATGAGAAAGTAGGGGA-3′(反向)，
5.权利要求1所述的DNA序列，其中检测848G-848A碱基处突变的正、反向引物的DNA序列如序列表如下所示5’-GGGAGGAGTCTCTGTGTCGTGTGT-3’(正向引物)5′-GAGAGGGATGAGAAAGTAGGGGA-3′(反向引物)用于PCR产物直接测序的引物的DNA序列如下所示5′-TAGTCGTTCGTGGAAAGTCGTAGGTC-3′(反向引物)
6.一种筛选适用于猪背膘厚性状的分子标记的方法，按照以下步骤用人MAC30基因cDNA为信息探针，作同源序列筛选，获得同源性90％以上的表达序列标签(EST)；然后对EST进行拼接；根据与人MAC30基因的基因组全长DNA序列的比对结果大致得出外显子的拼接位点，设计扩增引物；从猪血液基因组提取DNA，PCR扩增、PCR产物纯化和克隆测序，获得如序列表SEQ ID NO1所示的核苷酸序列。
7.权利要求1-5任一项所述的猪背膘厚相关基因MAC30在猪标记辅助选择中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种与猪背膘厚相关基因MAC30单核苷酸多态性位点的检测方法及其在猪遗传传育种中作为分子标记辅助选择的应用。从猪背膘厚相关基因MAC30克隆到部分基因组基因，它的DNA序列如序列表SEQ ID NO1所示，该序列全长为970bp，其中包含如附图2所述的部分外显子2和部分的外显子3序列。在该序列的848bp处有一个碱基突变(848G－848A)，导致其编码的氨基酸由缬氨酸(GTC－ATC)变成异亮氨酸。应用本发明分别对原产于中国地方猪种和欧洲血统的猪种进行了相关检测，肯定了本发明用于猪遗传辅助选择的效果。本发明还提出了制备上述基因和用于检测应用的方法。
文档编号C12N15/10GK1721532SQ20041001348
公开日2006年1月18日 申请日期2004年7月16日 优先权日2004年7月16日
发明者李奎, 杨金娥, 余梅, 刘榜, 樊斌, 朱猛进, 熊统安 申请人:华中农业大学