专利名称：一种醋蛋粉的制法及含醋蛋粉的组合物及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种醋蛋粉，尤其涉及醋蛋粉的制备方法及含醋蛋粉的组合物，及该组合物在制备增加骨密度、防治骨质疏松、缓解疲劳、增强免疫力的保健食品中的应用。
背景技术：
随着社会老龄人口显著增加，骨质疏松已成为一个重要的公共健康问题，严重地威胁着老年人的身体健康。骨质疏松主要表现为骨矿物质密度减少和骨质变松，常导致脊椎骨压缩变形、股骨颈和前臂腕部易骨折。
据流行病学调查估计，欧美和日本约有7500万人患骨质疏松症。美国骨质疏松基金会的调查结果显示，绝经后白人妇女分别有54.0％和30.0％患骨量减少和骨质疏松，大于50岁的男性有3％～6％患骨质疏松，28％～47％为骨量减少。
目前，我国40岁以上人群骨质疏松患病率16.1％，随着年龄增加，骨质疏松发病率递增，60岁以上人群患病率22.6％，80岁以上人群患病率高于50％，而且，随着地区、性别差异，骨质疏松患病率也明显不一样，城市高于农村，女性多于男性。据预测我国骨质疏松患者8400万，占总人口的6.6％。
许多因素与骨质疏松症有关，如遗传、内分泌、生活方式及膳食营养等。在膳食因素中，关系较密切的为钙、磷、维生素D及蛋白质等，其中研究最多的是钙营养。钙是骨骼中主要矿物质成分之一，也是骨正常成长的先决条件。大量临床实验及流行病学调查结果表明，钙摄入不足所造成的骨质丢失是导致骨质疏松的主要危险因素。
骨质疏松症属于祖国医学“骨痿”、“骨痹”范畴。中医学认为本病的发生与年老脏衰，肾精亏虚及饮食失调，劳逸过度等因素有关。肾为先天之本，主骨藏精生髓，若肾气亏损，不能生精化髓充骨，则髓减骨枯；肝藏血而主筋束骨，利关节，若肝血不足，筋脉失于濡养，则筋骨懈怠，痿弱无力；故肝肾不足、精血亏虚，骨枯髓减，筋骨失养，瘀血阻络是形成骨质疏松症的主要原因。
骨密度降低是骨质疏松症的一项重要指标，目前用于增加骨密度的主要方法是补钙，但存在不易吸收或治标不治本的问题。
发明内容
本发明的一个目的在于克服现有技术中存在的问题，提供一种醋蛋粉的制备方法，通过以下步骤实现将原料柑橘或山楂洗净、用破碎机、打浆机(0.5mm孔径)加工成果汁。加入0.5％的食品级果胶酶，进行澄清处理，温度35-45℃，自然pH值约为4。反应2小时后，用板框压滤机压滤(滤布120目)，在80℃下加热15分钟灭菌，得到柑桔或山楂汁。将果汁冷却到28℃，加入活化好的酵母发酵三天，待发酵液酒精度为6-7％(v/v)、总糖降至10g/l以下时停止发酵，得到柑桔或山楂果酒。将3％培养好的的醋酸菌加到发酵好的果酒里，搅拌转速为150r/min，通风比为1∶0.8，在32℃发酵4天，待总酸(以乙酸计)升至6-7％时停止发酵。用板框压滤机压滤除菌体后，在80℃加热15分钟灭菌，得到6-8％醋酸含量的柑桔或山楂果醋。将洗净、灭菌、消毒后的鸡蛋放入上述果醋中，果醋与鸡蛋配比为3～5∶1，浸泡72小时，至pH值约为5，搅拌均匀后压滤得到果醋蛋液，将果醋蛋液进行喷雾干燥得到果醋蛋粉，进风温度为150-160℃，出风温度为80-90℃。
本发明的另一个目的是提供含醋蛋粉的组合物，组合物由醋蛋粉、钙含量高的碳酸钙、淫羊藿、骨碎补、黄精、当归、三七、酪蛋白磷酸肽组成。
所述醋蛋粉可以是用本发明的方法制成的果醋蛋粉，也可以是用其他任何合成或酿造的食用醋和鸡蛋，并用传统的方法制成的醋蛋粉。
组合物1由含有下述重量配比的原料组成醋蛋粉0.3-60％，碳酸钙5-50％，淫羊藿5-60％，骨碎补5-60％，黄精5-55％，当归5-50％，三七0.5-40％，酪蛋白磷酸肽(CPP)0.1-10％。
组合物2由含有下述重量配比的原料组成醋蛋粉0.3-40％，碳酸钙5-30％，淫羊藿5-40％，骨碎补5-40％，黄精5-40％，当归5-30％，三七1-30％，酪蛋白磷酸肽(CPP)0.1-10％。
组合物3由含有下述重量配比的原料组成醋蛋粉1-20％，碳酸钙10-20％，淫羊藿15-25％，骨碎补15-25％，黄精15-25％，当归10-25％，三七5-15％，酪蛋白磷酸肽(CPP)0.1-5％。
本发明的又一个目的是提供含醋蛋粉的组合物用途，在制备增加骨密度、防治骨质疏松、缓解疲劳、增强免疫力的保健食品的应用。
所述的保健食品组合物，其特征在于制剂形式为固体制剂，具体为片剂或胶囊剂或颗粒剂或冲剂。
根据上述配比，利用常规生产工艺进行有效成分的提取，按不同剂型添加常规辅料并充分混合后制成成品，可以是片剂或胶囊剂或颗粒剂或冲剂。因添加的辅料及用量、具体生产工艺均属现有公知技术，在此不再赘述。
本发明组合物的推荐量片剂、胶囊制剂为4.0g/人/天，颗粒剂、冲剂为8.0g/人/天，每日口服一次，根据剂型不同用水吞服或冲服。
本发明组合物无毒副作用，增加骨密度效果明显，可运用于制备增加骨密度的保健食品。
鸡蛋的蛋白质是一种完全蛋白质，含有人体必须的八种氨基酸，在与醋的浸泡过程中一定程度地分解为肽和氨基酸；此外还有卵磷脂、蛋黄油、维生素等，对补钙和促进钙的吸收有一定的作用。另外果醋含有的糖类、脂类、蛋白质、氨基酸、维生素、生物类黄酮及矿物质，特别是水果经发酵制成果醋后B族维生素等营养成分含量明显提高，能使动物食品中的钙质溶解被人体利用，有促进血液新陈代谢、消除疲劳、抗衰老功效。有研究表明，将鸡蛋及蛋皮用10％醋酸浸泡烘干，以此作为钙源饲以大鼠，观察醋酸钙对大鼠生长发育和对血钙、尿钙、粪钙和股骨钙含量的影响，结果醋蛋皮组股骨钙的存留率，钙在体内的吸收率、存留率与碳酸钙和全脂奶粉无显著差异。动物实验研究结果表明，醋蛋液能明显促进动物肠蠕动，促进消化功能，提高细胞免疫功能，降低脑组织的脂质过氧化。醋蛋粉在本方中具有补充钙源，增加骨密度，缓解疲劳，增强免疫力，健胃消食之功。
碳酸钙是目前成人补钙中应用较多的补钙剂，具有分子量小，钙元素含量高，在中和胃酸时能较快地生成可溶性钙离子而易被肠道吸收的特点。研究表明，适量增加钙摄入量，可增强骨密度，减少骨质丢失，抗骨折，防治骨质疏松症。动物实验研究表明，碳酸钙对大鼠废用性骨质疏松症具有很好的预防作用，且与其它补钙剂比较更加经济合理。故碳酸钙在本方中作为钙源，有补钙，增加骨密度，改善骨质疏松的作用。
淫羊藿起到益精填髓，补肾壮骨作用。淫羊藿主要有效成分为淫羊藿总黄酮。研究表明，淫羊藿水提液具有抑制破骨细胞、促进成骨细胞功能，增加钙化骨的形成，从而抑制骨质疏松症。
骨碎补为滋补肝肾、续筋接骨、活血止痛之良药。与淫羊藿配合增强补肝肾、益精血、强筋骨，以治疗骨枯髓减、筋骨懈怠之症。骨碎补主要含柚皮甙、骨碎补双氢黄酮甙、骨碎补酸等。研究表明，骨碎补提取液对组织培养中的鸡胚骨基原的Ca++、P沉积有明显促进作用，提高组织中碱性磷酸酶(ALP)活性，促进蛋白多糖合成，抑制胶原合成。用大鼠后股骨下端实验性骨损伤模型研究表明，槲蕨根茎水煎液可促进实验性大鼠骨损伤愈合，随着剂量增加，作用也增强。
黄精具有滋肾填精，补脾益气之功，可缓解倦怠乏力之症。黄精主要含黄精皂甙、多糖类、氨基酸及微量元素等。研究表明，黄精多糖具有增强免疫、抗疲劳作用。
当归有补血养虚、活血止痛之效，以缓解腰背疼痛、关节疼痛之症。当归主要含有挥发油。研究表明，当归可促进骨髓和脾细胞造血功能，显著增加血红蛋白和红细胞数。水溶液灌胃可促进骨髓和脾细胞造血功能的恢复。
三七有化瘀生新，活血定痛之功，三七、当归合用增强活血通络止痛的作用，以缓解腰背疼痛、关节疼痛。三七主要含三七皂甙，三七素，槲皮素，挥发油等。研究表明，三七总甙可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化，促进成骨细胞OPG。
酪蛋白磷酸肽(CPP)是从天然酪蛋白中提取的一种多肽。可提高钙的溶解度，有促进钙吸收的作用。研究表明，CPP对人和动物钙的吸收和利用都具有促进作用。CPP作为促进因子，是一种非常有效的钙吸收促进因子，且能提高铁、锌、镁等金属离子的生物利用度。目前作为营养补充剂在日本，欧洲和国内已经广泛使用在食品、保健、饲料等行业中。
研究表明，本组合物各组分综合具有补充钙源，增加骨密度，防治骨质疏松、缓解疲劳，增强免疫力的作用。传统中医理论认为本组合物具有滋补肝肾，强筋壮骨，益气生血，化瘀止痛的功能，诸品合用，共奏补充钙源，滋补肝肾，强筋壮骨，益气生血，化瘀止痛之效。本组合物适用于缺钙、骨质疏松的中老年人群以及体弱的成年人群。
具体实施例方式
以下通过实施例对本发明作详细说明，并以动物试验进一步说明本发明的有益效果。下述组方均为原料药的重量克数。
实施例1果醋蛋粉的制备方法取柑桔2500g，用清水洗净、去皮后，用破碎机、打浆机(0.5mm孔径)加工成果汁1500g。加入0.1％的食品级果胶酶进行澄清处理，温度40℃，自然pH值约4，反应2小时后用板框压滤机压滤(滤布120目)，再经80℃加热15分钟灭菌。将柑桔汁冷却到28℃，加入活化好的酵母，在28℃发酵三天，待发酵液酒精度为6-7％(v/v)，总糖降至10g/l以下时停止发酵，得到柑桔果酒。加入3％培养好的的醋酸菌，搅拌转速为150r/min，通风比为1∶0.8，在32℃发酵4天，待总酸(以乙酸计)升至6-7％时停止发酵。用板框压滤机压滤除菌体后，再经80℃加热15分钟灭菌得到醋酸含量为6-8％的柑桔果醋1200g。
将洗净、杀菌、消毒后的鸡蛋放入柑桔果醋中，果醋与鸡蛋配比为3∶1，浸泡72小时，pH值约为5，搅拌均匀后用板框压滤机压滤得到果醋蛋液。将果醋蛋液进行喷雾干燥得到果醋蛋粉，进风温度为150-160℃，出风温度为80-90℃。
可以用山楂代替柑桔，破碎制成山楂汁，按照同样步骤制得果醋蛋粉。
也可以用合成或酿造的食用醋和鸡蛋，并用传统的方法制成醋蛋后进行喷雾干燥得到的醋蛋粉。
实施例21g/片的片剂
实施例31g/粒的胶囊
实施例44g/包的颗粒剂
实施例54g/包的冲剂
实施例6安全性毒理学试验1材料与方法
1.1受试物按本发明实施例1配方生产得到的片剂，以下均简称受试物。
1.2试验动物(以下2和3实验)ICR小鼠、SD大鼠由浙江省实验动物中心提供，医学实验动物合格证号22001001，清洁级。(4喂养实验)SD大鼠由中科院上海实验动物中心提供，合格证号为中科动管第003号，清洁级，体重60-80g。
2急性毒性试验SD大鼠体重180-220g，雌雄各20只；ICR小鼠体重18-22g，雌雄各20只。按霍恩氏法将SD大鼠、ICR小鼠随机分为1.00g/kg、2.15g/kg、4.64g/kg、10.00g/kg体重四个剂量组，每组雌雄各5只。采用经口灌胃方式，按1ml/100g体重给受试物(10.00g/kg剂量组配成5.00g/kg按2ml/100g给受试物)。
观察大鼠及小鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察期限2周，确定大鼠及小鼠的半数致死剂量LD50，并确定急性毒性分级。
表1受试物对大鼠及小鼠的急性毒性
根据急性毒性分级标准，其大鼠及小鼠的经口毒性属于实际无毒类。
3遗传毒性试验3.1 Ames试验选用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97A、TA98、TA100、TA102，设5000、1000、200、40、8μg/皿五个剂量组，每个剂量设三个平行皿，重复试验一次。同时设空白对照组和阳性对照组(敌克松、叠氮钠、柔毛霉素、二氨基芴、1，8-二羟基蒽醌)。
观察计数培养基上各菌株的回变菌落数，试验结果见表2、表3。
3.2小鼠骨髓细胞微核试验ICR小鼠体重25-30g。小鼠随机分2.5、5.0、10.0g/kg体重三个剂量组，一个阴性对照组(蒸馏水)和一个阳性对照组(环磷酰胺60mg/kg体重)，每组10只，雌雄各5只。采用间隔24小时2次给样品，灌胃量按0.1ml/10g体重(10.00g/kg剂量组配成5.00g/kg按0.2ml/10g给受试物)。小鼠于第二次灌胃6小时后处死，取胸骨骨髓制成骨髓片，甲醇固定，Giemsa染色。观察镜检时每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PCE)，表2受试物Ames试验结果(第一次)
计算微核千分率(MN‰)，结果见表4。
表3受试物Ames试验结果(第二次)
表4受试物对小鼠微核率的影响
注*P＜0.01(与阴性对照组比)3.3小鼠精子畸形试验ICR雄性小鼠，体重26-34g。设2.5、5.0、10.0g/kg体重三个剂量组，一个阴性对照组(蒸馏水)和一个阳性对照组(丝裂霉素C 2.0mg/kg体重)，每组7只。各组样品按0.1ml/10g体重(10.00g/kg剂量组配成5.00g/kg按0.2ml/10g给受试物)以灌胃方式给予，连续5天，对照组也相同处理。于首次灌胃后第35天后脱臼处死，随机选5只小鼠分别取两侧附睾，放入盛有适量生理盐水的平皿中，用眼科剪将附睾剪碎，四层檫镜纸吸滤，直接涂片，自然干燥，甲醇固定，用1％伊红染色。高倍镜下观察精子形态，每只小鼠计数完整精子1000个，记录畸变精子类型和数目，计算精子畸形发生率(％)，结果见表5。
表5小鼠精子畸形试验结果
与阴性对照组比较*P＜0.014大鼠30天喂养试验将SD大鼠随机分成4组，每组20只，雌雄各半。试验设对照组，受试物1.67、3.33、6.67g/kg体重组，相当于人推荐量的25倍、50倍和100倍(人推荐量为4.0g/日)。实验各剂量按体重10％折算分别均匀拌入基础饲料，以饲料喂养方式给予，自由进食、饮水。连续观察30天，周记录体重和进食量并计算食物利用率。实验期末尾静脉取血进行血液学检查，断头取血进行血生化检查，对每只大鼠进行脏器大体观察，同时取肝、肾、脾、睾丸(卵巢)称重并计算脏体化，并取肝、肾、脾、胃、肠、睾丸(卵巢)进行病理组织学检查。实验结果见表6、表7、表8、表9、表10、表11、表12。
表6受试物大鼠体重的影响(X±SD)
表7受试物大鼠总食物利用率的影响(X±SD)
结果见表2，原始数据符合方差齐的要求(P＞0.05)，各剂量组大鼠体重增重、进食量、食物利用率和对照组比较差异均无显著性(方差分析，P＞0.05)表8受试物对大鼠HB、RBC、WBC的影响(X±SD)
表9受试物对大鼠WBC的影响(X±SD)
表10受试物对大鼠血生化的影响(X±SD)
表11受试物对大鼠血生化的影响(X±SD)
表12受试物对大鼠脏体比的影响(X±SD)
5结论根据本试验结果，本发明的组合物对雌雄大、小鼠经口LD50均大于10.00g/kg体重，属实际无毒。Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性。大鼠30天喂养试验结果，未见实验动物出现中毒症状，大体解剖也未见异常病理改变，血常规及生化指标均无损害性影响。
实施例7增加骨密度试验为了验证本发明组合物的功效，委托中国疾病预防控制中心完成动物功效试验。
1材料与方法1.1样品按本发明实施例1配方生产得到的片剂，以下均简称受试物，由杭州鑫富药业公司提供，推荐摄入量为每人每次4片，每天1次。
1.2试验动物50只初始体重60-75g的清洁级断乳WISTAR雄性大鼠，由中国医学科学院实验动物研究所提供，许可证编号SCXK(京)2000-0006。
1.3试验方法将大鼠按随机分成5组，即低钙饲料对照组，受试物低、中、高剂量试验组，分别相当于成人每公斤体重推荐量的5倍、15倍和30倍(根据大鼠平均每公斤体重进食100g，按0.335g/kgBW、1.005g/kgBW、2.010g/kgBW的剂量配制成半合成饲料，饲料中受试物的含量分别为3.35g/kg、10.05g/kg、20.10g/kg)，再根据高剂量试验组饲料的含钙量设置高剂量碳酸钙对照组。每组10只，单笼喂养，自由进食、饮去离子水，每周称体重，记录进食量。试验周期为12周。
1.4观察指标喂养12周后断头处死，剥离出右侧股骨，测量股骨长度。在105℃烤箱烤至恒重，称量骨重。用SD-1000骨密度仪测量大鼠股骨远心端及股骨中点的骨密度。
2试验结果2.1受试物对大鼠体重的影响(表13)
表13受试物对大鼠体重的影响(M±SD)
2.2受试物对大鼠股骨长度、重量及骨钙含量的影响(表14)表14受试物对大鼠股骨长度、重量及骨钙含量(M±SD)
与低钙对照组比较*P＜0.052.3受试物对大鼠骨密度的影响(表15)表15各组大鼠骨密度比较(M±SD)
3试验结论根据本试验结果，给予2.010g/kgBW受试物可使大鼠的股骨重量显著高于低钙对照组(P＜0.05)；给予0.335g/kgBW、1.005g/kgBW、2.010g/kgBW受试物可使大鼠的股骨钙含量显著高于低钙对照组(P＜0.05)；给予1.005g/kgBW、2.010g/kgBW受试物可使大鼠的股骨远心端骨密度显著高于低钙对照组(P＜0.05)；给予2.010g/kgBW受试物可使大鼠的股骨中点的骨密度显著高于低钙对照组(P＜0.05)。
实施例8缓解疲劳、增强免疫力的功能试验根据小鼠负重游泳试验结果呈阳性，血乳酸、血清尿素两项指标呈阳性，表明该组合物具有缓解疲劳的功能，同时功能试验表明，细胞免疫功能试验测定，单核-巨噬细胞功能测定，NK细胞活性测定三项呈阳性，体重以及脏器/体重均正常，表明该组合物具有增强免疫力的功能。
综上所述，本发明组合物无毒副作用，具有显著的增加骨密度功能，也具有缓解疲劳、增强免疫力功能，可以制成增加骨密度、防治骨质疏松、缓解疲劳、增强免疫力的保健食品。
权利要求
1.一种醋蛋粉的制备方法，其特征是通过以下步骤实现将柑橘洗净、破碎制成果汁，加入食品级果胶酶，进行澄清处理，温度30-45℃，pH4，2小时后用板框压滤机压滤，高温灭菌15分钟，冷却至28℃后加入活化好的酵母，发酵三天，再加入醋酸菌，在32℃发酵4天，压滤除菌体后，经高温加热15分钟得到柑桔果醋，将洗净、灭菌、消毒后的鸡蛋放入上述果醋中，果醋与鸡蛋配比为3～5∶1，浸泡72小时，至pH值为5，搅拌均匀后压滤得到果醋蛋液，将果醋蛋液进行喷雾干燥得到果醋蛋粉，进风温度为150-160℃，出风温度为80-90℃。
2.根据权利要求1所述的醋蛋粉的制备方法，其特征是柑橘可用山楂替换。
3.一种含醋蛋粉的组合物，其特征是组合物由醋蛋粉、钙含量高的碳酸钙、淫羊藿、骨碎补、黄精、当归、三七、酪蛋白磷酸肽组成。
4.根据权利要求3所述的含醋蛋粉的组合物，其特征是醋蛋粉选择权利要求1制备的果醋蛋粉或由合成或酿造方法制成的醋蛋粉。
5.根据权利要求3或4所述的含醋蛋粉的组合物，其特征是由下述重量配比的原料组成醋蛋粉0.3-60％，碳酸钙5-50％，淫羊藿5-60％，骨碎补5-60％，黄精5-55％，当归5-50％，三七0.5-40％，酪蛋白磷酸肽0.1-10％。
6.根据权利要求3或4所述的含醋蛋粉的组合物，其特征是由下述重量配比的原料组成醋蛋粉0.3-40％，碳酸钙5-30％，淫羊藿5-40％，骨碎补5-40％，黄精5-40％，当归5-30％，三七1-30％，酪蛋白磷酸肽0.1-10％。
7.根据权利要求3或4所述的含醋蛋粉的组合物，其特征是由下述重量配比的原料组成醋蛋粉1-20％，碳酸钙10-20％，淫羊藿15-25％，骨碎补15-25％，黄精15-25％，当归10-25％，三七5-15％，酪蛋白磷酸肽(CPP)0.1-5％。
8.权利要求3-7任一所述的醋蛋粉组合物的用途，在制备增加骨密度、防治骨质疏松的食品中应用。
9.权利要求3-7任一所述的醋蛋粉组合物的用途，在制备缓解疲劳、增强免疫力的食品中应用。
全文摘要
本发明提供一种果醋蛋粉的制法及含醋蛋粉的组合物及用途。果醋蛋粉的制备是将鸡蛋浸泡于由柑橘或山楂制得的果醋，再经绞碎、压滤、喷雾干燥等过程制备。含醋蛋粉的组合物由醋蛋粉，碳酸钙，淫羊藿，骨碎补，黄精，当归，三七，酪蛋白磷酸肽组成。本发明提供的组合物可在制备增加骨密度、防治骨质疏松、缓解疲劳、增强免疫力的保健食品中应用。
文档编号C12J1/00GK1669478SQ20051004953
公开日2005年9月21日 申请日期2005年4月1日 优先权日2005年4月1日
发明者过鑫富, 汪钊 申请人:杭州鑫富药业有限公司